Разработка тест-систем для диагностики герпесвирусной инфекции кошек на основе иммунологических методов

• Автор: Перепечаев, Константин Андреевич
• Шифр специальности: 03.00.23, 16.00.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2007
• Место защиты: Щёлково
• Количество страниц: 153 с. : ил.

Идеальным условием получения моноспецифических антисывороток представляется иммунизация продуцентов чистыми антигенами. Ключевым моментом в отработке твердофазного непрямого ИФА является получение коньюгата, то есть иммуноглобулина меченого пероксидазой. Качество получаемого коньюгата находится в прямой зависимости от серологической активности иммуноглобулина, активности фермента и условий связывания этих компонентов. Реакция иммунофлуоресценции, была предложена Кунсом в году, и ее трудно отнести к новым методам исследования. Однако, эта реакция получила в настоящее время вторую жизнь благодаря появлению гибридомных технологий, позволяющих получать моноклональные антитела. Их применение позволило значительно увеличить ее чувствительность и специфичность. Популярность РИФ объясняется экономичностью, наличием широкого спектра диагностических наборов, быстротой получения ответа. Чаще всего РИФ используют для быстрого обнаружения возбудителя в патологическом материале. РИФ является чрезвычайно ценным методом диагностики, его можно по праву отнести к экспрессметодам, поскольку он позволяет получить результат в течение ,5 часов с момента взятия образца на анализ, прост в исполнении, не требует стерильной работы. Таким образом, существуют все предпосылки для расширения спектра методов диагностики герпесвирусной инфекции кошек, поскольку быстрый и точный диагноз является решающим условием организации необходимых мер борьбы с этим заболеванием. В связи с вышеизложенным, целью настоящей работы являлось создание диагностикумов на основе очищенного и концентрированного вируса ГВК1, штамм Гранд, для использования его в качестве компонента наборов при определении уровня антител и детекции антигенов вируса ГВК1 в различных биологических субстанциях при иммуноферментной и люминисцентной диагностике герпесвирусной инфекции кошек. Разработать метод получения очищенного и концентрированного вируса ГВК1, штамм Гранд, репродуцированного в перевиваемой культуре клеток . Получить иммуносорбенты на основе активированной Сефарозы 4В с иммобилизованным в качестве анигена очищенным и конценгрированным вирусом ГВК1. Выделить антитела к вирусу ГВК1 из сыворотки естественно переболевших кошек методом аффинной хроматографии и получить пероксидазный и ФИТЦконъюгаты антител к антигенам ГВК1. Выделить I кошки, получить аитисыворогку к I кошки на кроликах и получить пероксидазный и ФИТЦконьюгаты с антиI кошки. Разработать тест систему для определения уровня антител к вирусу ГВК1 в сыворотке крови кошек в непрямм твердофазнм ИФА. Разработать тест систему для детекции антигена ГВК1 в смывах и соскобах с окулярного и респираторного тракта в прямом и непрямом твердофазном ИФА. Разработать тест систему для определения антигенов вируса ГВК1 в смывах и соскобах с окулярного и респираторного тракта в непрямой и прямой РИФ. Провести сравнительную оценку эффективности детекции вируса в прямой и непрямой РИФ, прямом и непрямом твердофазном ИФА и методом вирусовыделения на культуре клеток. ГВК1 в сыворотке крови кошек в непрямом твердофазном ИФА и реакции нейтрализации и детекции вируса в прямой и непрямой РИФ, прямом и непрямом твердофазном ИФА и методом вирусовыделения на культуре клеток. Разработаны методики получения компонентов для иммуноферментных и люминесцентных тестсистем, предназначенных для диагностики герпесвирусной инфекции кошек. Разработанные методики определения уровня антител в РИФ и ИФА рекомендуется использовать для оценки напряженности иммунитета, определения материнских антител у котят с целью корректировки сроков первой вакцинации, а также в качестве методов контроля антигенной активности соответствующих моно и поливалентных вакцин. Полученные результаты являются основой для дальнейших исследований по изучению механизмов и закономерностей формирования постинфекционного и поствакцинального противовирусного иммунитета у кошек, а также дают возможность расширить научные знания относительно роли вирусов в возникновении массовых респираторных заболеваний кошек и могут быть использованы при дальнейшем изучении иммунологии и патогенеза инфекций, вызванных герпесвирусами.