Разработка подхода к планированию зондов для эффективной ПЦР в реальном масштабе времени

• Автор: Гудов, Владимир Петрович
• Шифр специальности: 03.00.23
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2009
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 107 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ
ВВЕДЕНИЕ.

ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР

Генетически модифицированные организмы

Обоснование необходимости создания трансгенных растений.

Проблемы использования ГМпродукции

Актуальность

Решение уравнения Форстера. Теоретическая база. ПЦР в реальном масштабе времени и анализ результатов. Глава 3. Реактивы и приборная часть. Общие методики. Определение концентрации олигонуклеотидов и зондов. Синтез 8гидроксиюлолидпна из 3аминофенола. Синтез 56карбоксифлуоресцеина 9 а,б. М.МтетраметилЗкарбоксиродамина . ЯОХ, АРОМТг 330диметокситрптилпропан2,3диолпропиламид 5карбокснродам1ша X . К,МдифторацетилМ,Рдизтил2,7диметил5карбоксиродамина . X . Синтез гасителя флуоресценции 1 и его активированного производного . Метил204,4димстокситритилЫэтан2ола . ПЦР в масштабе реального времени. Одной из актуальных задач современной биотехнологии является разработка диагностических наборов реагентов для выявления генетически модифицированных источников ГМИ в семенном материале, кормах животных, пищевых продуктах лекарственном сырье и т. Принцип работы современных приборов для анализа ДНК базируются на количественном определении ДНК, используя метод ПЦР в реальном масштабе времени. Зарубежные приборы п реактивы для них, разработанные для осуществления данной методологии достаточно дороги. В настоящее время созданы отечественные аналоги приборной и реагентной базы доступные по ценовым и качественным характеристикам, для лабораторий, проводящих массовые исследования. Для тестирования трансгенных растений применяют те же жесткие стандарты по параметрам токсичности и аллергенности, что и для традиционных новых сортов культурных растений или новых видов продуктов питания. В настоящий момент невозможно полностью исключить ошибки в сертификации генетически модифицированных растений ГМР. Продукты, полученные с использованием ГМР, по международным нормам и согласно санитарным нормам РФ должны нести на себе информацию в виде маркировки, из которой явно следовазо бы, что продукт был получен из генетически модифицированных организмов. Пищевой продукт маркируется соответствующим образом, если соотношение трансгенного продукта к генетически немодифицированному более 0,9 . Особую актуатьность приобретают проблемы идентификация и оценки количественного содержания модифицированной ДНК пищевых продуктов, полученных из ГМР. Для выполнения этой задачи необходимо создание простой, воспроизводимой и доступной широкому кругу лабораторий, систему диагностики трансгенных растений и продуктов питания. На сегодняшний день существует два основных подхода, которые позволили бы решить вышепоставленную задачу. Иммуноферментнмй анализ. Данный метод использует специфичность антител к интересующему белковому материалу, содержащемуся в ГМР. Он показывает наличие и количество белка в исследуемой пробе с высокой специфичностью. Основным недостатком является невозможность тестирования белков в образцах, прошедших термическую и биохимическую обработку. ПЦР. Предпосылкой для ГМО детекции является наличие информации о типе генетической модификации, последовательность нуклеотидов введенного гена и регуляторных элементах промотор и терминатор. Для анализа необходимы микроколичества исследуемого образца, содержащего ДНК материал, включающий целевой ДНК фрагмент. Генетический материал остается стабильным. Высокая чувствительность, способность детектировать от одной до нескольких копий искомого гена в рамках генетического материала организма или в смесях пищевых продуктов. ПЦРдиагностика способна различить несколько различных вариантов генетической модификации в геноме трансгенного растения, тем самым повышая точность анализа. Генетичесий материал не претерпевает качественных изменений в процессе превращения трансгенного растения в продукт, употребляемый в пищу. Целыо данной работы являлось создание методологической и компонентной базы, а также оригинальных схем синтеза флуоресцентных красителей и гасителей флуоресценции, разработка подхода для эффективного планирования зондов для ПЦР в реальном масштабе времени. Проведение математического расчета Фостеровекого радиуса, оптимального с точки зрения используемой системы.