Физиолого-эмбриологические аспекты биоинженерных технологий получения животных с заданными признаками

• Автор: Рябых, Владимир Павлович
• Шифр специальности: 03.00.23
• Научная степень: Докторская
• Год защиты: 2002
• Место защиты: Боровск
• Количество страниц: 340 с. : ил

ОГЛАВЛЕНИЕ
Введение

Обзор литературы

Фолликулогенез у крупного рогатого скота Фолликулогенез у крупного рогатого скота в течение повторяющихся эстральных циклов Регуляция набора волны фолликулов и доминантность
Связывание гонадотропных гормонов клетками фолликулов Синтез фолликулами стероидных гормонов Фолликулогенез в яичниках крупного рогатого скота в связи с вызыванием суперовуляции Влияние генетических факторов на популяцию фолликулов и показатель овуляций Влияние экзогенных гонадотропинов на динамику популяции фолликулов в яичниках крупного рогатого скота.

Состояние и перспективы разработки технологии получения трансгенных животных

Основные направления использования технологии трансгеноза

Повышение продуктивности Повышение устойчивости животных к инфекционным заболеваниям

Получение трансгенных животных, продуцирующих лекарственные биологически активные вещества с молоком

1.2.1.4. Изменение качества животноводческой продукции

1.2.1.5. Создание трансгенных животных доноров органов и тканей для ксенотрансплантации
1.2.2. Методы введения чужеродных генов в эмбрионы животных
1.2.2.1. Микроинъекционный метод введения генноинженерных конструкций в пронуклеусы зигот
1.2.2.2. Использование ретровирусных векторов
1.2.2.3. Перенос генов с помощью ядер трансформированных клеток
1.2.2.4. Использование сперматозоидов для переноса генноинженерн ых конс грукци й
1.2.3. Основные факторы, влияющие на эффективность технологии получения трансгенных животных
1.2.3.1. Вызывание суперовуляции у свиней
1.2.3.1. Визуализация пронуклеусов в зиготах сельскохозяйственных животных
1.2.3.3. Введение генноинженерных конструкций в пронуклеусы зигот
1.2.3.4. Факторы, влияющие на частоту интеграции генноинженерных конструкций в геном эмбрионов и потомства
1.2.3.5. Трансплантация микроинъецированиых зигот животнымреципиентам
1.2.3.6. Определение интеграции чужеродных генов в геном животных на стадии эмбрионов
СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
II. Объекты и методы исследований
III. Результаты исследований
3.1.1.
3.1.1.
3.1.1.3.
3.1.1.4.
3.1.1.5.
3.1.2. 3.1.
3.1.3.1.
Регулирование процесса фолликулогенеза у круп
ного рогатого скота в связи с вызыванием суперовуляции
Регулирование фолликулогенеза у коров и тлок в
середине лютеальной фазы полового цикла Изучение возможности регулирования фолликуло
генеза и повышения эффективности суперовуляции у коров за счт увеличения дозы вводимых гонадотропинов
Состояние популяции антральных фолликулов в
яичниках коров в середине лютеальной фазы полового цикла
Влияние предварительной гормональной обработки 1
коров в середине лютеальной фазы полового цикла на процесс фолликулогенеза
Влияние остаточных количеств гонадотропинов
СЖК на процесс фолликулогенеза при вызывании суперовуляции у коровдоноров
Регулирование фолликулогенеза препаратами ФСГ
разной степени очистки при вызывании суперовуляции у коровдоноров
Изучение динамики половых гормонов и разработка
способа прогнозирования суперовуляции у крупного рогатого скота
Регулирование фолликулогенеза у коров и тлок
путм предварительной обработки гонадотропными гормонами в начальный период лютеалыюй фазы полового цикла
Регулирование фолликулогенеза у коров путм пре
3.1.3.2.
3.1.3.3. 3.1.4.
3.1.4.1.
3.1.4.2.
3.1.4.3. 3.2.
3.2.2.
добработки их препаратом ГСЖК в начальный период лютеальной фазы полового цикла с последующей лютеинизацией крупных фолликулов хорионическим гонадотропином человека Вызывание лютей низании фолликулов с помощью хорионическог о гонадотропина человека в середине лютеальной фазы полового цикла Регулирование фолликулогенсза у коровдоноров путм предварительного введения гонадотропинов на 3й и 5й день полового цикла Регулирование фолликулогенеза и вызывание суперовуляции у коров в начальный период лютеалъной фазы полового цикла
Состояние популяции антральных фолликулов в яичниках коров в начале и середине лютеальной фазы полового цикла
Вызывание суперовуляции у коров в начальный период лютеальной фазы полового цикла Фолликулогенсз в яичниках коров в период вызывания суперовуляции
Совершенствован не эмбрно шжен ерн ых этапов технологии получения трансгенных животных
Выяснение причин, лимитирующих получение зигот у с винейдоноров, и разработка способа вызывания синхронизированной суперовуляции Анализ зависимости частоты интеграции трансгена в геном животных от фазы клеточного цикла зиготы.
Анализ факторов, влияющих на приживляемость
зигот, микроинъецированных генноинженерными конструкциями, у животныхреципиентов
3.2.3.1. Изучение факторов, влияющих на приживляемость зигот, микроинъецированных генноинженерными конструкциями, у свинейреципиентов и совершенствование способов е повышения
3.2.3.2. Анализ факторов, влияющих на эффективность получения потомства у крольчихрециииентов из зигот, микрошгьецировапных генноинженерными конструкциями
3.2.4. Разработка способа определения интеграции чужеродной ДНК в геном животных на стадии эмбриона.
3.2.5. Использование генов сомато гронинового каскада для получения трансгенных свиней
Выводы.
Практические предложения.
Список использованной литературы


У большинства исследованных видов млекопитающих синтез эстрадиола происходит в клетках гранулезы под влиянием ФСГ из андрогенов, синтезируемых клетками теки под влиянием ЛГ . Клетки теки, изолированные из прсдовуляторных фолликулов коров секретируют главным образом андростендион и повышают интенсивность синтеза в ответ на повышение уровня ЛГ, но они не способны ароматизировать андрогены в эстрадиол i . Ко . В противоположность этому клетки гранулезы не способны синтезировать андрогены v, но активно ароматизируют андрогены в эстрадиол . При этом было показано, что фолликулов па животное отвечают повышенной продукцией андрогена на ЛГ, но лишь фолликула имеют клетки гранулезы, способные ароматизировать андрогены в эстрадиол . У крупного рогатого скота доминирующие неовуляторные фолликулы, развившиеся в ходе первой фолликулярной волны, содержат в фолликулярной жидкости повышенный уровень эстрадиола и пониженный андрогенов, по сравнению с подчиненными фолликулами i . Низкий уровень андрогенов в фолликулярной жидкости доминирующего фолликула обусловлен тем, что андрогены, секретируемые текой, используются в качестве предшественника для синтеза эстрадиола клетками гранулезы. В лютеальиую фазу цикла на фоне высокого уровня прогестерона синтез эстрадиола в доминирующих фолликулах снижается, и эти неовуляторные фолликулы начинают рефессировать, что создаст условия для небольшого повышения базального уровня ФСГ и набора фолликулов следующей волны. ЛГ и овуляцию . Отбор и доминантность фолликулов сопровождаются увеличением способности клеток теки продуцировать андрогены, а клеток гранулезы ароматизировать их в эстрадиол. Таким образом, имеющиеся данные свидетельствуют, что начальные стадии фолликулярного роста происходят очень медленно и лишь после формирования полости фолликула идут более быстро. В течение полового цикла в яичниках коров наблюдается волны развития фолликулов по штук, но овулирует только один доминирующий фолликул, развивающийся в фолликулярную фазу никла. ФСГ. Один из фолликулов волны становится доминантным. Однако, механизм отбора, доминантного фолликула пока на известен, но имеются доказательства того, что доминантный фолликул подавляет развитие других подчиненных фолликулов. Резко выраженные эффекты доминантности у крупного рогатого скота повидимому, являются причиной того, что у коров физиологически более сложно манипулировать показателем овуляций, чем у овец , i, i . Знание механизмов, обеспечивающих доминантность фолликула и методов их регулирования очень важны для разработки эффективных способов суперовуляции у коровдоноров. Однако на сегодняшний день механизмы, определяющие набор фолликулов в волну и отбор из них доминирующего фолликула пока точно не установлены. Также все еще неизвестны механизмы атрезии фолликулов. Не выяснены и механизмы доминантности предовулягорного фолликула. В работах по повышению эффективности вызывания суперовуляции у коров существенное значение имеют исследования по изучению процесса связывания гонадотропинов клетками фолликулов разных стадий развития в течение полового цикла, т. В последнее время наибольшее развитие получила гипотеза, свидетельствующая о том, что реактивность фолликулов зависит не только от концентрации гонадотропинов в сыворотке, но также и от изменений концентрации рецепторов к этим гормонам на клеточных мембранах фолликулов. Рецепторы к моте цитирующему гормону. Концентрация рецепторов к I в клетках гранулезы крупных фолликулов увеличивается значительно между началом предовуляторного подъема ЛГ и пиком подъема ЛГ. После этого наблюдается снижение концентрации рецепторов к моменту овуляции I, , , ii, , . Эти результаты говорят о том, что конечное предовуляторное созревание фолликулов в яичниках коров связано с увеличенным количеством рецепторов ЛГ в клетках гранулезы. Концентрация рецепторов к ЛГ в клетках гранулезы, взятых у телок на 3, 5, и й дни астрального цикла из фолликулов 6 мм была невысокой. Однако на 7й день она была в раза выше, чем в другие дни, в которые проводилось изменение.