Изучение биологических особенностей кроликов, трансгенных по генам кластера регуляторов активации комплемента RCA

• Автор: Доцев, Арсен Владимирович
• Шифр специальности: 03.00.23
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2003
• Место защиты: Моск. обл., п. Дубровицы
• Количество страниц: 124 с.

ОГЛАВЛЕНИЕ
Введение

1. Обзор литературы

1.1. Трансгенные животные

1.2. Методы получения трансгенных животных

1.2.1. Микроинъекция

1.2.2. Ретровирусные векторы

1.2.3. Эмбриональные стволовые клетки

1.2.4. Спермин и липосомы

1.2.5. Перенос ядер

1.2.6. Перенос генов с помощью искусственных хромосом

УАС, ВАС
1.3. Применение трансгенных животных
1.3.1. Трансгенные животные с новыми хозяйственнополезными свойствами
1.3.2. Создание трансгенных животных устойчивых к
различным заболеваниям
1.3.3. Создание животных биореакторов для синтеза рекомбинантных белков фармакологического и технологического назначения
1.3.4. Ксенотрансплантация
1.3.4.1. Проблемы при ксенотрансплантации
1.3.4.2. Экспериментальные наработки в ксенотрансплантации
1.3.4.3. Создание генетически модифицированных доноров
1.3.4.4. Исследования в области ксенотрансплантации
1.3.4.4.1. Экспрессия в культуре клеток
1.3.4.4.2. Создание трансгенных мышей
1.3.4.4.3. Создание трансгенных свиней
1.4. Негативное действие трансгенов
2. Материалы и методика исследований
2.1. Реактивы и оборудование
2.2. Схема исследований
2.3. Молекулярногенетический анализ
2.4. Цитогенетические исследования
2.5. Гистологические исследования
2.6. Культивирование клеток трансгенных кроликов
3. Результаты и обсуждение
3.1. Ведение трансгенной линии и изучение наследования трансгена
3.2. Влияние наличия трансгена на некоторые физиологические показатели животного
3.3. Цитогенетические исследования
3.3.1. Описание нормального кариотипа кролика
3.3.2. Изучение влияния экзогена на стабильность кариотипа трансгенных кроликов
3.4. Гистологические исследования печени, почек, селезенки
и сердца
3.5. Исследование влияния экспрессии трансгена на реакцию отторжения на модели i vi
4. Выводы
5. Практические предложения
6. Список литературы
7. Список сокращений
ВВЕДЕНИЕ
Актуальность


Получить три поколения трансгенных кроликов, несущих генную конструкцию , при разных типах спаривания и изучить наследование трансгена. Изучить некоторые физиологические показатели трансгенных кроликов размер гнезда, падеж. Получить препараты хромосом трансгенных кроликов и их аналогов и выявить частоту встречаемости хромосомных аномалий. Исследовать влияние трансгена на структуру органов и тканей трансгенных кроликов. Изучить влияние экспрессии трансгена на поддержание клеток трансгенного происхождения в культуре i vi. Научная новизна. , на трансгенные индивидуумы на различных уровнях их организации генетическом, цитологическом, тканевом, организменном. Впервые выполнено исследование культур клеток трансгенных кроликов, несущих геныингибиторы комплемента генного кластера , на устойчивость к лизису сывороткой крови человека. Практическая значимость работы. Показано, что наличие интеграции генной конструкции на основе не оказывало существенного влияния на жизнедеятельность трансгенных кроликов, что позволяет рассматривать этих животных в качестве функциональной модели для изучения проблемы ксенотрансплантации. Установлена повышенная устойчивость клеток трансгенных кроликов к лизису сывоДг роткой крови человека, что позволяет рассматривать геныингибиторы комплемента генного кластера как геныкандидаты для генетической модификации животных с целью использования их в клеточной терапии. Основные положения, выносимые на защиту. На уровень хромосомных аномалий у трансгенных животных оказывают влияние как наличие трансгена, так и происхождение животного. При исследовании гистологической структуры печени, почек, селезенки и сердца кроликов, трансгенных по генамингибиторам комплемента кластера , существенных различий по сравнению с контрольными животными выявлено не было. При спаривании по типу трансген х трансген наблюдается снижение жизнеспособности потомков по сравнению со спариванием по типу трансген х нетрансген. Интеграция генов генного кластера повышает устойчивость клеток трансгенного происхождения к лизису сывороткой крови человека по сравнению с контрольными культурами. Апробация работы. ДНКтехнологии в клеточной инженерии и маркировании признаков сельскохозяйственных животных, ВИЖ, п. ВИЖ, п. Повышение конкурентоспособности животноводства и задачи кадрового обеспечения, РАМЖ, Московская обл. Подольский рн, п. Современные достижения и проблемы биотехнологии сельскохозяйственных животных, ВИЖ, п. Современные достижения и проблемы биотехнологии сельскохозяйственных животных, ВИЖ, п. Дубровицы, . Публикация результатов исследований. По материалам диссертации опубликовано 8 работ. Структура и объем работы. Диссертация изложена на 4 страницах, содержит таблиц, рисунков, состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов, результатов исследований и обсуждения, выводов, практических предложений. Список литературы включает 1 источник, в том числе 2 на иностранных языках. Трансгенными, называют животных, в геноме которых присутствует, введенная искусственно, дополнительная генетическая информация, называемая трансгеном. Таким образом, трансген это ген, чужеродный для данного вида и встроенный в его геном для изменения некоторых свойств организма, представляющих интерес для человека. Продукт этого гена белок, является трансгенным или рекомбинантным продуктом. Трансген может передаваться по наследству, и привнесенные им новые генотип и фенотип наследуются в последующих поколениях по законам Менделя. На основе этого с помощью селекции возможно создание гомозиготных трансгенных линий животных. Впервые о получении трансгенных сельскохозяйственных животных сообщили две лаборатории в США и Германии . , . При получении трансгенных организмов стремятся к тому, чтобы трансген содержался во всех соматических и, прежде всего, в половых клетках животного. В связи с этим наиболее целесообразно производить операции по переносу генов на ранних стадиях развития животного, в большинстве случаев, на стадии зиготы или двухклеточных эмбрионов. ДНК.