Ауторегуляция автолитических процессов и интенсификация автолиза дрожжей

• Автор: Карпекина, Татьяна Анатольевна
• Шифр специальности: 03.00.23
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2003
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 143 с.

СОДЕРЖАНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Глава 1. Автолиз и автолитическис процессы у микроорганизмов

1. Ферменты автолитического комплекса

2. Регуляция активности автолитических ферментов

3. Характеристики процесса автолиза.

Глава 2. Способы стабилизации ферментов

1. Использование добавок

2. Химическая модификация.

2.1 Поперечное связывание бифункциональными реагентами
2.2 Введение новых полярных или поверхностно
заряженных групп
2.3 Гидрофилизация поверхности белка
2.4 ПЭГ или углеводородное связывание
2.5 Другие способы стабилизации ферментов.
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
Глава 1. Объекты и методы исследований.
1. Объекты исследования.
2. Общие методы.
3. Биохимические методы.
4. Методы математической обработки данных.
Глава 2. Сравнительная характеристика способов
ферментативной деструкции клеток дрожжей
Глава 3. Модификация ферментов химическими шаперонами
1. Модификация протеиназ различными гомологами АОБ и ГСЛ
1.1 Модификация протеиназ молекулами СтАОБ.
1.2 Модификация протеиназ молекулами тирозола.
1.3 Модификация протеиназ молекулами САОБ
1.4 Модификация протеиназ молекулами гомосеринлактона.
2. Модификация амилаз
2.1 Модификация амилаз молекулами С7АОБ
2.2 Модификация амилаз молекулами тирозола
3. Модификация целлюлаз молекулами С7АОБ
Глава 4. Стабилизация алкилоксибензолами ферментов
автолитического комплекса дрожжей.
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Поэтому перспективной считается замена стадии выдержки резервуарных вин добавлением дрожжевых автолизатов, обогащающих вина ферментами, витаминами и другими продуктами автолиза. Одновременно усиливаются биохимические и физикохимические процессы превращения низкомолекуляриых соединений, содержащихся в вине, что и обеспечивает появление необходимых органолептических качеств. Очевидно, что потребность в дрожжевых автолизатах велика. Исторически сложилось так, что процесс автолиза нашел практическое применение раньше, чем начались теоретические исследования этого процесса. Разработка практических способов получения автолизатов микроорганизмов длительное время велась на эмпирической основе. Вместе с тем очевидно, что создание эффективных способов автолиза должно строиться на фундаментальных знаниях биологической сущности процессов автолитической деградации клеточных структур, роли этих процессов в жизнедеятельности микроорганизмов, изучении тех регуляторных механизмов, которые контролируют направленность и интенсивность автолитического гидролиза клеточных биополимеров. В обзоре литературы наряду с рассмотрением теоретических аспектов процессов автолиза, с учетом цели данной работы и подходов, примененных для ее достижения, будут рассмотрены и такие вопросы, как способы стабилизации ферментов. ГЛАВА 1. Термин автолиз в биологическую литературу был впервые введен Сальковским для обозначения обнаруженного им вместе с ГаппеЗайлером в г. , i, . Современное определение трактует автолиз как 1 необратимый процесс, который может привести к гибели клетки, 2 наступающий вследствие нарушения регуляции равновесной работы ферментных систем в сторону преобладания гидролитической и, 3 начинающейся с разрушения клеточной оболочки ЭльРегистан, Бабаян, . Теоретическое рассмотрение процесса автолиза включает в себя ряд вопросов, однако, в область нашего интереса входят такие как характеристика ключевых ферментов автолитического комплекса, способы регуляции их активности и характеристика процесса автолиза. Отметим, что пик внимания исследователей к автолитическим процессам в клетках микроорганизмов, сосредоточенного как на изучении физиологических функций автолитических процессов, так и на разработках высокоэффективных способов автолиза, главным образом, приходится к гг. За последние лет в литературе практически не появилось какихлибо новых данных, освещающих интересующие нас вопросы. В автолитический комплекс включают все деполимеразы, гидролизующие клеточные структуры и биополимеры. Первоначально к собственно автолизинам были отнесены те ферменты автолитического комплекса, которые участвуют в деградации материала клеточной стенки , , , , . ПГ гетерополисахарид, состоящий из остатков ацетилглюкозамина и ацетилмурамовой кислоты, образующих цепочки, соединенные пептидными мостиками. Фактически ПГ бактериальной стенки это мешковидная макромолекула огромного размера, изолирующая протопласт, уравновешивающая его тургорное давление, придающая клетке форму и защищающая ее от внешних воздействий Шлсгель, . Однако у микоплазм клеточная стенка отсутствует, у архебактсрий, дрожжей и грибов она имеет иную химическую структуру . i, . Поэтому к триггерным пусковым ферментам автолиза относят деполимеразы, участвующие в первоначальных нарушениях структуры клеточных оболочек вне зависимости от химического строения последних. . , . Чаще всего аминидазы и эндоацетилглюкозамииидазы встречаются в организмах вместе, тогда как мурамидазы бывают единственным автолизином клетки. Автолизины обладают, как правило, высокой субстратной специфичностью и растворяют клеточные стенки собственного продуцента и близко родственных штаммов. Однако некоторые бактерии продуцируют такие, которые гидролизуют клеточные стенки микроорганизмов других видов , iv, . Существует точка зрения, что внеклеточные визирующие ферменты имеют эволюционную связь с клеточными автолизинами , .