Биотехнологические исследования и разработка состава лечебно-профилактического средства на основе регуляторных белков гепатопротекторного действия

• Автор: Привалов, Игорь Михайлович
• Шифр специальности: 03.00.23
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2009
• Место защиты: Пятигорск
• Количество страниц: 160 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

Глава 1 Обзор литературы

1.1 Пространственнофункциональная организация ткани печени

1.2 Биологически активные в сверхмалых дозах адгезивные белки, выделенные из печени млекопитающих

1.3 Современное состояние исследований по созданию iепатопротекторных препаратов

1.4 i как модель i vi для изучения биологической активности

Глава 2 Организация проведения экспериментов, объекты, материалы и методы исследования.

2.1 Организация работа и планирование эксперимента

2.2 Объекты изучения. Вспомогательные вещества и оборудование

2.3 Методы исследования.
РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
Глава 3 Экспериментальное обоснование выбора технологии получения субстанции регуляторных белков печени.
3.1 Разработка технологии экстрагирования печени. Повышение производительности и эффективности процесса извлечения
3.1.1 Определение оптимального извлекающего состава.
3.1.2 Выбор температурного режима экстрагирования.
3.1.3 Выбор метода экстрагирования
3.1.4 Определение длительности экстрагирования
3.2 олучение супернатанта экстракта ткани печени. Выбор оптимальных параметров высаливания и диализа.
3.2.1 Центрифугирование экстракта.
3.2.2 Высаливание белков
3.2.3 Диализ. Интенсификация процесса диализа.
3.3 Фракционирование экстракга ткани печени методом изоэлектрофокусирования
Глава 4 Разработка лечебнопрофилактического препарата на основе кислых регуляторных белков печени
4.1 Тритурациоиные таблетки как оптимальная форма введения исследуемого белка.
4.2 Исследования по выбору вспомогательных веществ
4.3 Технологическая схема получения таблеток. Характеристика основных этапов
4.4 Оценка качества тритурационных таблеток Гепотрит
4.5 Общая технологическая схема, е основные этапы и параметры
Глава 5 Фармакологические исследования субстанции рщуляторных белков печени КРС и лечебнопрофилактического средства, разработанного на их основе
5.1 Изучение биологической активности исходной субстанции i
vi на модели i .
5.2 Изучение гепатопротекторной активности i vi с использованием первичной культуры гепатоцитов
5.3 Первичная оценка гепатозащитной активности субстанции кислых регуляторных белков печени.
5.4 Патогенез экспериментального токсического гепатига, инициированного тетрахлорметаном
5.5 Оценка терапевтической эффективности препарата на модели экспериментального поражения печени.
5.6 Исследование тритурационных таблеток Гепотрит на модели i .
ЗАКЛЮЧЕНИЕ.
ВЫВОДЫ.
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ ЛИТЕРАТУРНЫХ ИСТОЧНИКОВ
ПРИЛОЖЕНИЯ.
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ СОКРАЩЕНИЙ
АлАТ аланинаминотрансфераза
АсАТ аспартатаминотрансферза
БАД биологически активная добавка
БФС бромфеноловый синий
ВАУ высокоадгезивные участки
ВКМ внеклеточный матрикс
ИЭФ изоэлектрофокусирование
КРС крупный рогатый скот
ЛДГ лактатдегидрогеназа
МДА малоновый диальдегид
МК межклеточный контакт
МПА мясопептонный питательный агар
МЦ метил целлюлоза
ПЖК полиеновые жирные кислоты
ПМ плазматическая мембрана
ПОЛ перекисное окисление липидов
пакет прикладных программ
РБ регуляторный белок
РБП регуляторный белок печени
РУМ роторноударная мельница
СМД сверхмалые дозы
ТРГ триглицериды
ЩФ щелочная фосфотаза
ЭПР эндоплазматический ретикулум
ЕРЬ эссенциальныс фосфолипиды
ВВЕДЕНИЕ
Актуальность


В начале литературного обзора рассмотрены основные положения, касающиеся строения и функции печени, организации ее межклеточного пространства. Далее рассмотрены адгезивные белки печени млекопитающих, описаны их физикохимические свойства и специфическая биологическая активность. Затем приведен обзор существующих гепатопротекторных препаратов, рассмотрены все существующие применяемые в официальной медицине органопрепараты генатозащитного действия. Так как в работе предложено исследование специфической активности регуляторного белка печени i vi с использованием культуры i в последнем разделе обзора будут приведены необходимые материалы. Печень играет важную роль в осуществлении и регуляции многих метаболических процессов. Функции печени многообразны. Она является, прежде всего, крупной пищеварительной железой, вырабатывающей желчь, которая но выводному протоку поступает в двенадцатиперстную кишку такая связь железы с кишкой объясняется развитием ее из эпителия передней кишки, из которой развивается часть . Ей свойственна барьерная функция ядовитые продукты белкового обмена, доставляемые в печень с кровыо, в печени нейтрализуются кроме того, эндотелий печеночных капилляров и звездчатые ретикулоэндотелиоциты обладают фагоцитарными свойствами лимфоретикулогистиоцитарная система, что важно для обезвреживания всасывающихся в кишечнике веществ. Печень участвует во всех видах обмена, в частности, всасываемые слизистой оболочкой кишечника углеводы превращаются в печени в гликоген депо гликогена. Печени приписывают также гормональные функции. Таким образом, печень является одновременно органом пищеварения, кровообращения и обмена веществ всех видов, включая гормональный . Приблизительно две трети клеточного состава ткани печени составляют гепатоциты. Одну треть синусоидальные клетки печени эндотелиоциты, клетки Купфера, липоциты, ркклетки 0. Гепатоциты имеют округлую, овальную и полигональную форму диаметр мкм, по морфологии они относятся к нетипичному эпителию. Плазматическая мембрана ПМ гепатоцитов разделяется на три домена, различающихся по функции, а также по набору ферментов 1, 6. Контакты гепатоцитов включают все основные ультраструктуры, характерные для других эпителиальных тканей зона простого соединения контактной поверхности клетки ,8, зона плотного соединения 3,8, щелевое соединение 5,1, зона слипания 3,8, дссмосомы 1,8 2. Ранжируем эти ультраструктуры по уменьшению плотности плотное соединение щелевое соединение зона слипания десмосома простое соединение . Минимальной адгезией обладает ультраструктура простого соединения. В зоне простого соединения наблюдается адгезия по типу клетка клетка и клетка ВМК внутриклеточный матрикс. Простое соединение можно определить как межклеточную щель, образованную плазматическими мембранами контактирующих клеток и располагающимися параллельно друг другу на расстоянии нм 5. Щель заполнена слабоэллектронноплотпым материалом. Результаты исследований ультраструктур межклеточных контактов показывают, что нарушения адгезивных взаимодействий гепатоцитов приводят к изменению нормальных морфологических реакций клеток. Основными физикохимическими факторами, оказывающими влияние на адгезию гепатоцитов, являются температура и концентрация
ионов Са во внеклеточном пространстве. Ионы кальция играют важную роль в таких жизненноважных процессах, как мышечное сокращение, фоторецепция, передача нервного импульса и многое другое. Более того, кальций относится к числу универсальных регуляторов разнообразных процессов, протекающих в клетке. Частыми мишенями для Са2 являются кальцийсвязывающие белки. При дефиците Са в межклеточном пространстве гепатоцитов уменьшается адгезия клеток. Впервые это было показано Андерсоном в г 5, 3. После диспергирования печени, предварительно перфузированной раствором, не содержащим ионов Са , была получена суспензия целых клеток. В более поздних исследованиях выявлено, что при дефиците ионов Са2 в процессе перфузии первыми разрушаются ультраструктуры зоны межклеточных контактов МК простого соединения, а затем оставшиеся 2. Метод гидростатического клина позволил дополнить исследования по клеточной адгезии.