Антигенные свойства инфекционных и термоинактивированных препаратов вакцинных штаммов вируса болезни Марека

• Автор: Бобровская, Ирина Владимировна
• Шифр специальности: 03.00.23
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2000
• Место защиты: Щелково
• Количество страниц: 150 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕ1ИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

1. ЛИТЕРАТУР 1ЫЙ ОБЗОР

1.1. ВИРУС БОЛЕЗНИ МАРЕКА 1

1.1.1. Классификация ВБМ

1.1.2. Биологические характеристики ВБМ, ВТК и ВГИ

1.1.3. Морфология и морфогенез

1.1.4. Патогенез и типы взаимодействия вируса с клеткой.

1.2. ВИРУСНЫЕ БЕЛКИ И А1ТИГЕ1Ы

1.2.1. Основные антигены ВБМ и ВГИ

1.2.2. Другие белковые комплексы, кодирующие ВБМ и В И
1.3. ВАК1ЩНОПРОФИЛАКТИКА БОЛЕЗНИ МАРЕКА.
1.3.1. Вакцины на основе штаммов серотипа 1.
1.3.2. Вакцины на основе штаммов серотипа 2.
1.3.3. Вакцины па основе штаммов серотипа 3.
1.3.4. Поливалентные вакцины.
1.3.5. Рекомбинантные вакцины.
1.4. СПОСОБЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АНТИГЕННОЙ И ИММУЮЛО
1 ИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ ВБМ, ВТК И ВГИ
1.4.1. Серологические методыг.
1.4.2. Применение ИФА для идентификации антигенов ВБМ, В К и ВГИ и антител к ним.
1.5. ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ПОЛИМЕРАЗНОЙ ЦЕННОЙ РЕАКЦИИ
ПЦР ДЛЯ ТИИРОВА1ИЯ ВБМ
1.6.ЗАКЛЮЧЕНИЕ
СОБСТВЕН 1ЫЕ ИССЛЕДОВАИЯ
2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАИЙ
3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.
3.1. СИНТЕЗ ИММУ1ЮПЕРОКСИДАЮГО КГЫ АТА
3.1.1. Выделение, очистка и концентрирование 1цО из желтков яиц
3.1.2. Исследование в РДГ1 и в ИФА антисывороток к 0 кур, полученных на баранах и кроликах.
3.1.3. Выделение из гипериммунных сывороток баранов и кроликов специфических антивидовых антител к желткам кур методом аффинной хроматографии.
3.1.4. Конъюгация бараньих и кроличьих аитиО антител кур с пероксидазой и подбор их рабочих разведений
3.2. ИЗУЧЕНИЕ ФРАКЦИОННОГО И МОРФОЛОГИЧЕСКО СОСТАВА БЕСКЛЕТОЧНОГО ВГИ ПРОИЗВОДСТВЕН 1ЫЕ СЕРИИ СУХОЙ ВАКЦИНЫ ПРОТИВ ГМ ПА ОСНОВЕ ШТАММА
ГС6.
3.3. ПОЛУЧЕНИЕ АНТИГЕНОВ ВШ, РАЗЛИЧАЮЩИЕСЯ I К
ЕРЕКРЕСТ1ЮЙ СЕРОТИИЧЕСКОЙ АКТИВ ЮСТИ ТЕРМ ДЕНАТУРАЦИЯ.
3.3.1. Влияние термоденатурации на антигенную активность препаратов на основе ВГИ
3.3.2. Изучение антигенных свойств препаратов на основе вируса герпеса кур ВГК
3.4. ПРИМЕНЕНИЕ ПОЛИ И МОНОКЛОНАЛЬНЫХ АНТИТЕЛ ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ СТРУКТУРНЫХ БЕЛКОВ БОЛЕЗНИ МАРЕКА.
3.5. ПРИМЕНЕНИЕ КОМПЬЮТЕРНОЙ ПРОГРАММЫ ДЛЯ О IРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ ВИРУСА В ВАКЦИНЕ ПРОТИВ 1М
ИММУНОФЕРМЕНТНЫМ ААЛИЗОМ.
3.6. ИДЕНТИФИКАЦИЯ ВБМ С ПОМОЩЬЮ 1ИР
3.6.1. Применение ПЦР для выявления ДК ЬМ 1 и 3 серши
3.6.2. Выявление ДНК ВБМ в патологическом материале с помощью ПЦР.
3.6.3. Дифференциация вирулентных онкогенных штаммов ВЬМ I серотипа
ОБСУЖДЕНИЕ.
ВЫВОДЫ.
ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Получить антигены ВБМ, различающиеся по перекрестной серотипической активности, применив приемы термодспатурации. Разработать варианты ИФА с применением поли и моноклональных антител для выявления структурных белков ВБМ. Разработать компьютерную программу по обработке данных титрования антигенов в ИФА. Подобрать специфичные праймеры и оптимизировать условия постановки полимеразной цепной реакции для выявления и типирования ДНК вируса болезни Марека. Разработан новый способ получения чистого препарата Ii из желтка яиц кур. Показана возможность исследования полученных гипериммуннмх сывороток к I кур в РДП и в ИФА подана заявка на получение патента. Получены и исследованы в ИФА специфичные и стабильные антигенные комплексы в нспрогретых и прогретых ультразвуковых лизатах клеток, инфицированных тремя серотипами ВБМ. Впервые для анализа антигенного сходства поверхностных белков и разных серотипов ВБМ и ВПГ человека в ИФА были применены МАТ, направленные к белкам ВПГ. ДНК вирулентных, онкогенных штаммов 1 ссрогипа и вакцинных штаммов вируса 3 серотииа, определены оптимальные параметры постановки I И V для обнаружения вирусной ДИК. Ира чес кая значимость. Мез одические указания для выявления и типировання ДНК вируса болезни Марека методом III у. Метод НЦР может быть использован для идентификации и дифферепцпации вирулентных, онкогениых штаммов I 1 серотииа, вакцинных штаммов 3 серогипа, а также для контроля за изменениями вируса в и ро i к у льт и пи ро ван и я. Ьолезнь Марека ЬМ синонимы пейролнмфоматоз, паралич, энзоотический ненроэпцефалит, инфекционный пенрогрануломатоз высококонтппкппое вирусное заболевание птиц отряда куриных, проявляющееся образованием опухолей и процессами дсмиелинизации нервных тканей. Заболевание было впервые описано в I. Жозефом Мареком, ветеринарным патологом, профессором Королевского Венгерского Университета . По характеру клинического проявления и иатологоана тимических изменении различают классическую и острую форму болезни Марека. Для классической формы характерны поражения периферической л центральной нервной системы. У больной птицы отмечается хромота, парезы. Птица гибнет от дегидратации и истощения, начиная с 35 месячного возрас та. Отход обычно составляет от 5 до . Острая форма 1М хараюернзуется поражением вну тренних органов н мышц лимфоидными опухолями, а также изменениями в цен тральной и периферической нервной системе. Опухоли часто обнаруживаются в почках, печени, яичниках, селезенке, железистом желудке и легких. Габлюдается атаксия п удушье. Птица исрсболевает и гибнет обычно и возрасте 4 недель. Падеж может достигать и более . Однако имеются сообщения о случаях падежа среди 2х суточных цыплят при осIрой форме ЬМ . БМ ГЗБМ передастся горизонтальным путем. II о я вирусная природа 1М предполагалась еще в е годы, ее воз б у м. Англии , а п г СЛ Оказалось, что ноэбуд ГМ является клеточноассоциированный Д 1Ксодеркащий гертч вирус рода 1 vi, семейства vii, подсемейства vii , . Однако большое количество сообщений в последнее время подтверждают гомологию В1М и вирусов подсемейства Д1iivii , , , , , 7, . Нслод за выявлением и идентификацией онкогеииого вируса, i м мр создали первую эффективную живую вакцину против БМ на ост ионе а пенупрованпого в культуре клеток ппамма ВБМ, которая была немедленно использована в коммерческих хозяйствах . Пносчедствпи от клинически здоровых индеек двумя группами исследователей в гг , был выделен вирус герпеса индеек ПГН Дшнгепиосвязанпый с ВБМ, i стал наиболее используемым во всем мире дня изготовления вакцинных препаратов. Борьба с БМ путем вакцинации послужила не только первым примером вакцины против болезни. До разработки н применения вакцины в г. ВЛСМОСП и мертпосз среди яйценоской п тицы доходили до и даже выше р зпа и процентные потери были обычным явлением. При вакцинации ечуын БМ резко снижались и отход яйценоской птицы составлял пко. V4, г.