Цитоморфологическая характеристика культур клеток рыб и их чувствительность к некоторым вирусам

• Автор: Завьялова, Елена Александровна
• Шифр специальности: 03.00.23
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2006
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 131 с. : ил.

1. Введение.

2. Обзор литературы

2.1. Культуры клеток и тканей рыб

2.1.1 Первичные культуры

2.1.2. Перевиваемые клеточные линии.

2.2. Вирусные заболевания рыб

2.2.1. Инфекционный некроз поджелудочной железы лососевых I.

2.2.2. Весенняя виремия карпов V

Собственные исследования

3. Материалы и методы

3.1. Рыбы.
3.2. Культуры клеток
3.3. Вирусы.
4. Результаты исследований
4.1. Разработка методов получения первичных и субкультур из тканей лососевых рыб ii i и их цитоморфологическая характеристика
4.1.1. Культура клеток из ткани сердца радужной форели
4.1.2. Культура клеток из ткани почек радужной форели.
4.1.3. Культура клеток из ткани селезенки радужной форели.
4.1.4. Культура клеток из ткани гонад радужной форели.
4.2. Разработка методов получения первичных и субкультур из тканей гонад серебряного карася i i . и их морфологические свойства
4.3. Разработка методов получения первичных и субкультур из тканей эмбрионов аквариумной рыбыгуппи i i . и их морфологические свойства.
4.4. Изучение чувствительности к вирусам первичных и субкультур из тканей рыб
4.4.1. Чувствительность первичных культур клеток из тканей внутренних органов и субкультуры из ткани гонад радужной форели к вирусу инфекционного некроза поджелудочной железы лососевых 1.
4.4.2. Чувствительность первичных и субкультур из ткани гонад серебряного карася к вирусу весенней виремии карпов V .
4.4.3. Чувствительность субкультур из ткани эмбрионов аквариумной рыбыгуппи к вирусам промышленноразводимых рыб
4.5. Изучение цитопатогенного действия штаммов вируса I и V на перевиваемые культуры клеток лососевых и карповых рыб
4.5.1. Размножение и титрование референтного и полевого штаммов вируса I в перевиваемых культурах клеток СНН1 и 4.
4.5.2. Морфологические изменения перевиваемых культур клеток СНН1 и 4, инфицированных нолевым и референтным штаммами вируса I
4.5.3. Размножение и титрование полевого штамма I в перевиваемой культуре клеток эпителиальной папилломы карпа ЕРС
4.5.4. Сравнительное изучение цитопатогенного действия в перевиваемых культурах клеток сердца кеты СНН1 и эпителиальной папилломы карпа ЕРС референтного и полевого штаммов вируса I и V
5. Обсуждение результатов исследований.
6. Выводы
Практические предложения.
Литература


Получены субкультуры клеток из первичных культур клеток гонад радужной форели и серебряного карася, дана их цитоморфологическая характеристика и определена чувствительность к вирусам инфекционного некроза поджелудочной железы лососевых I и весенней виремии карпов V соответственно. Получена и адаптирована для размножения вируса весенней виремии карпов V субкультура из клеток эмбрионов аквариумной рыбыгуппи. Отработана схема перевода непермиссивных клеток эпителиальной паппиломы карпа в состояние пермиссивности по отношению к вирусу инфекционного некроза поджелудочной железы лососевых I. Практическая ценность работы заключается в том, что в результате проведенных исследований отработаны методы получения первичных культур и субкультур из внутренних органов и гонад радужной форели, гонад карася и эмбрионов гуппи, чувствительных к вирусам лососевых и карповых рыб и показана возможность использования их в вирусологических исследованиях. Заседании научноконсультативного Совета по болезням рыб Межведомственной Ихтиологической комиссии и Секции патологии рыб и охраны гидробионтов Отделения ветеринарной медицины РАСХН Москва, г. Конференции Современные достижения и проблемы клеточной биотехнологии и иммунологии в ветеринарной медицине ВИЭВ, г. Совещании, посвященном научнопрактическим проблемам инфекционной патологии и охраны здоровья рыб, ВИЭВ, г. Международной конференции Сохранение генетических ресурсов. СанктПетербург, г. Конференции лет развития современных направлений клеточной биотехнологии ВИЭВ, г. Международной научнопрактической конференции Ветеринарная медицина современное состояние и актуальные проблемы обеспечения ветеринарного благополучия животноводства Ялта, г. Мсжлабораторном совещании научных сотрудников ВИЭВ г. Публикации По материалам диссертации опубликовано 9 научных работ. Диссертационная работа изложена на 1 страницах и включает введение, обзор литературы, собственные исследования, обсуждение, выводы, практические предложения, список литературы и приложения. Материалы диссертации иллюстрированы таблицами, рисунками. Список литературы включает 8 публикаций, в том числе 7 иностранных. Первичные культуры клеток Внедрение в вирусологическую практику метода культуры клеток расширило наши представления о возбудителях вирусных инфекций, характере инфекционного процесса, происходящего в клетках, методах диагностики и изготовлении биологических препаратов. Вполне понятно, что исследования связанные с ветеринарной медициной преобладали, а изучению низших позвоночных уделяли намного меньше внимания. Тем не менее, имеется значительный объем информации и богатый источник исследовательского материала среди холоднокровных позвоночных. Низшие животные составляют три четверти видов всех позвоночных, при этом рыбы насчитывают почти половину i , . В настоящее время разными исследователями во всех странах мира выведены многочисленные линии перевиваемых клеток из необластических и нормальных тканей рыб. В мире существует более 0 клеточных линий рыбного происхождения. Первое применение тканевых культур рыб провела . Она готовила эксплантаты из ткани аквариумных рыб гуппи i i . Одновременно . Первично трипсинизированные культуры клеток рыб появились позднее в году . В.В. Никольский и Е. Ф. Осадчая , Е. Ф.Осадчая , , В. Однослойные культуры клеток почек леща готовили Г. Д.Гончаров с соавторами , почек угря . Впоследствии культуры клеток из гонад разных видов рыб готовили многие зарубежные исследователи i I. Для работы с клетками рыб использовали среды, разработанные для тканей и клеток теплокровных животных, при культивировании учитывалась оптимальная для клеток рыб температура. В России метод культуры клеток рыб применили впервые более лет назад в ГосНИОРХе В. И.Тец и Г. С.Яковлева , они выращивали однослойные культуры клеток из гонад карпа. Позднее их работа была продолжена Рабкиным Е. М. и Куденцовой . С года подобные исследования были начаты в центральной лаборатории по изучению болезней рыб ВИЭВ. Н.И. Рудиков изучал возможность приготовления однослойных культур клеток недифференцированных гонад, почек, сердца, селезенки, плавательного пузыря, жабр и плавников радужной форели i почек, селезенки и сердца карпа i i . Рудиков Н. И., .