Продукция рибонуклеаз клеточной культурой женьшеня

• Автор: Яснецкая, Елена Гурьевна
• Шифр специальности: 03.00.23
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2003
• Место защиты: Владивосток
• Количество страниц: 113 с. : ил

СОДЕРЖАНИЕ
ВВЕДЕНИЕ

ОЬЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Особенности продукции ферментов первичного метаболизма

культивируемыми клетками растений

1.2. Биотехнологические аспекты получения и использования рибонуклеаз

1.3. Физиологическая роль рибонуклеаз и участие в защитных

реакциях растений

1.4. Классификация патогенобусловленных РИ белков растений

1.5. Регуляция содержания РЯ белков в норме и условиях стресса

1.6. Рнбонуклеазоподобные белки группы РЯ

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1. МАТЕРИАЛЫ
2.2. МЕТОДЫ
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
3.1. Рибонуклеазная активность в культивируемых клетках растений
3.2. Стабильность продукции рибонуклеаз в штамме 1М. Ростовой цикл
и динамика накопления рибонуклеаз
3.3. Иммунофермснтный анализ рибонуклеаз
3.4. Специфичность и кинетические параметры рибонуклеаз женьшеня. Первичная структура белков Р1 и 2
3.5. Механизмы индукции и возможные способы регуляции активности рибонуклеаз в культуре клеток женьшеня
3.5.1. Влияние стрессовых факторов на рибонуклеаз ную активность и ростовые характеристики клеточной культуры женьшеня
3.5.2. Влияние компонентов питательной среды на рибонуклеазную активность
и ростовые характеристики клеточной культуры женьшеня
3.5.3. Регуляция активности рибонуклеаз веществами индукторами
защитных реакций растений
3.5.4. Влияние ингибиторов киназ и фосфатаз на активность и содержание рибонуклеаз в каллусах женьшеня
3.6. Роль рибонуклеаз в процессе ингибирования роста АгоЬасегит Штеасеп при их культивировании с клетками женьшеня
3.7. Динамика активности и количества рибонуклеаз при совместном культивировании клеток женьшеня с У. рзеисоПЬегсохх
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Результаты исследований были представлены на конференциях молодых ученых Биологопочвенного института ДВО РАН , , , на международных конференциях Физиология растений наука 1 тысячелетия Москва, , Сигнальные системы растительных клеток Москва, , Сознание и наука взгляд в будущее Владивосток, , на 8й международной конференции по женьшеню Сеул, Корея, . Публикации. По материалам диссертации опубликовано 8 работ. Работа выполнена в лаборатории биотехнологии Биологопочвенного института ДВО РАН. Иммуноферментный анализ выполнен совместно с сотрудниками лаборатории основ неинфекционного иммунитета Тихоокеанского института биоорганической химии ДВО РАН. Определение первичной аминокислотной последовательности проведено совместно с сотрудниками Л. И. Фсдореевой и Г. П. Моисеевым. В литературе опубликовано относительно мало сведений о культурах клеток растений продуцентах ферментов. Некоторые ферменты растений, такие как карбогидразы, фосфатазы, супероксиддисмутазы, хитиназы, гидролазы, пероксидазы и каталазы, важны для биотехнологического исследования, поскольку представляют интерес для сельского хозяйства, практической медицины и косметологии. До недавнего времени хитиназы, глюканазы, пероксидазы, каталазы и другие важные растительные ферменты выделяли из дикорастущих либо культивируемых растений. Изучено большее количество гликозидаз, хнтиназ и рибонуклеаз растений, протеолитические ферменты папайии, фицин из плодов фигового дерева, бромелаин ананаса, и актинидии плодов киви . Препараты пероксидазы выделяют из корней хрена. Биотехнологический способ получения веществ первичного метаболизма, однако, может быть альтернативой традиционному способу. С помощью методов культивирования тканей, клеток и органов растений создан ряд клеточных технологий, позволяющих получать вещества вторичного метаболизма, имеющие широкое применение в качестве лекарственных препаратов. Известно лишь несколько примеров относительно активной продукции культивируемыми клетками растений веществ первичного метаболизма. Рядом авторов предпринимались попытки выделения пероксидаз из культивируемых корней хрена , , табака ii , и редьки , , а также из культуральных сред после выращивания суспензий клеток картофеля, арахиса и вигны , . Сообщалось о получении каллусной культуры, а также культуры трансформированных корней хрена Хадеева и др. В культивируемых i vi корнях содержалось столько же фермента, сколько и в обычном корне 0 мкгг сырого веса, каллусные клетки хрена содержали пероксидазу в количестве 0 мкгг сырого веса. С помощью спонтанного и индуцированного мутагенеза и селективных систем Караковой и соавт. Лучшие клоны по содержанию пероксидазы в 2,3 раза превосходили исходные линии Каранова и др. Каллусная культура i i . Этот фермент является эффективным антиоксидантом и играет важную роль в лечении различных воспалительных процессов. Выход супероксидцисмутазы составил 0 мгкг биомассы, что превышает в несколько раз количество фермента, получаемого из 1 л массы эритроцитов мг, хотя и уступает по продуктивности биомассе рекомбинантного штамма дрожжей vii 3,5 гкг биомассы Дроздова, . Метод выделения, предложенный Кирилловой и соавт. Исследование ферментов первичного метаболизма в культурах растительных клеток проводятся не только с целью получения штаммовпродуцентов. Изучение основ регуляции и способов индукции этих веществ необходимо для определения их роли в процессах развития и защитных реакциях растительной клетки табл. Таблица 1. Хитиназы и глюканазы клеточных культур петрушки, томатов, сои, винограда и табака Элиситорами . . . . Хитиназы клеточных культур табака Ауксином и цитокинином ii . Фосфатазы в суспензионной культуре клеток i i, РНКазы культуры клеток томатов Фосфатным голоданием , . . Гидролазы суспензионной культуры клеток табака Элиситорами и жасмоновой кислотой v .