Методологические подходы и разработка биотехнологии иммунобиологических препаратов для диагностики инфекционных особо опасных заболеваний и детекции их возбудителей

• Автор: Жарникова, Ирина Викторовна
• Шифр специальности: 03.00.23
• Научная степень: Докторская
• Год защиты: 2004
• Место защиты: Ставрополь
• Количество страниц: 313 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ
ГЛАВА 1. АНАЛИЗ МЕТОДОВ ЭКСПРЕССДИАГНОСТКИ ИНФЕКЦИОННЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ И МАТРИЦ ДЛЯ ИММОБИЛИЗОВАННЫХ СИСТЕМ обзор литературы
1.1. Анализ современного состояния экспрессдиагностики инфекционных заболеваний и индикации их возбудителей.

1.2. Матрицы для иммобилизованных систем тврдофазного иммуноанализа.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

2.1. Штаммы микроорганизмов, взятые в работу

2.2. Питательные среды, условия культивирования микроорганизмов

2.3. Получение антигенных комплексов микроорганизмов

2.4. Лабораторные животные, использованные в экспериментах

2.5. Методы иммунизации животных

2.6. Методы контроля антигенов и сывороток
2.7. Выделение иммуноглобулинов
2.8. Получение и контроль иммунофлуоресцирующих конъюгатов
2.9. Получение и контроль иммуноферментных конъюгатов
2 Физикохимические методы
2 Иммунохимические методы анализа
2 Лиофилизация биологического материала
2 Характеристика реагентов, используемых для получения магноиммуносорбентов
2 Методы математической и статистической обработки материалов
ГЛАВА 3. ПОЛУЧЕНИЕ АНТИГЕНОВ МИКРООРГАНИЗМОВ,
ИММУННЫХ СЫВОРОТОК И ИММУНОГЛОБУЛИНОВ
3.1. Получение антигенных комплексов микроорганизмов
3.2. Получение гипериммунных кроличьих сывороток
3.3. Подбор методов выделения иммуноглобулинов
ГЛАВА 4. КОНСТРУИРОВАНИЕ И ХАРАКТЕРИСТИКА ИММУНОГЛОБУЛИНОВЫХ КОНЪЮГАТОВ
4.1 Получение иммуноглобулинов диагностических флуоресцирую
4.2 Получение иммуноглобулинов диагностических иммунофер
ментных
ГЛАВА 5. РАЗРАБОТКА СУСПЕНЗИОННЫХ ДИАГНОСТИ
5.1. Биотехнология производства эритроцитарных диагностикумов
5.2. Биотехнология производства латексных диагностикумов
5.3. Разработка суспензионных алюмосиликатных диагностикумов 4 ГЛАВА 6. РАЗРАБОТКА И ИЗУЧЕНИЕ СВОЙСТВ МАГНО
ИММУНОСОРБЕНТОВ МИС
6.1. Разработка полиакриламидных магноиммуносорбентов
6.2. Конструирование композиционных магноиммуносорбентов на ос
нове аэросила
6.3. Разработка композиционных магноиммуносорбентов на основе
алюмосиликата
6.4. Получение аффинных сорбентов для сорбции неспецифических
компонентов из сывороток крови 1
ГЛАВА 7. СОЧЕТАННЫЕ МЕТОДЫ ДЕТЕКЦИИ МИКРООРГАНИЗМОВ С МАГНОИММУНОСОРБЕНТАМИ
7.1. Разработка метода селективного концентрирования на магноиммуносорбенте с последующей постановкой иммуноферментного анализа ИФА
7.2. Разработка метода селективного концентрирования на магноиммуносорбенте с последующей постановкой количественного иммунофлуоресцентного анализа КИФА
7.3. Разработка метода селективного концентрирования на магноиммуносорбенте с последующей постановкой хемилюминесцентного иммунного анализа ХЛИА
7.4. Разработка метода селективного концентрирования на магноиммуносорбенте с последующей постановкой полимеразной цепной реакции ПЦР
7.5. Изучение диагностической ценности тестсистем магноиммуносорбентных
ГЛАВА 8. СТАБИЛИЗАЦИЯ БИОЛОГИЧЕСКОГО СЫРЬЯ И ИММУНОБИОЛОГИЧЕСКИХ ПРЕПАРАТОВ МЕТОДОМ ЛИОФИЛЬНОГО ВЫСУШИВАНИЯ
8.1. Отработка оптимальных защитных сред и параметров лиофильно
го высушивания
8.2. Характеристика лиофилизированных препаратов
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ


К., Агафонов В. И., . При изучении закономерностей адсорбции иммунных антител установлено, что они адсорбируются органическими соединениями, содержащими гидроксильные, хинонные, карбоксильные, апьдегидо , сульфо и нитрогруппы, органическими соединениями, в состав которых входят атомы металлов, а также пористыми веществами активированным углм, каолином и т. Адамов А. К, Бердиков В. Т., . Суспензионные диагностикумы применяют в реакции суспензионной агглютинации РСЛ, которую осуществляют на стекле или в образных иммунологических планшетах . Благодаря специфичности и простоте, реакция получила распространение в микробиологической практике. Среди матриц для суспензионных диагностикумов хорошо себя зарекомендовали латексы полистирол, полиакролеин и др. Лукин Ю. В. с соавт, Воробьва З. Г., Лазовская А. Л., Лукин Ю. В., Ерохин. Е.П. Опалейчук И. С. с соавт. Александер С. К., Фидлер Л. М., Лукин Ю. В, Дячина М. Н. с соавт. Лазовская А. Л., Воробьва З. Г., Слинина К. Н., . Латексы водные эмульсии каучукоподобных полимеров, получаемые полимеризацией или сополимеризацией различных органических непредельных соединений Бусеев А. И., Ефимов И. П., . Реакции на основе латекса называются реакцией агглютинации латекса РАЛ. Для приготовления диагностикумов обычно используют частицы латекса диаметром не более 1 мкм i , i М. М., . В ряде работ сообщалось об успешном применении латекса с диаметром частиц 0,0,8 мкм. Сомова с соавт. Л.Н. Ерковой и О. С.Чечиком обобщены данные о промышленных способах производства латексов и их свойствах. А.Л. Лазовской, З. Г. Воробьвой, К. РАЛ и показана перспективность использования данной реакции. Положительныйопыт использования различных латексов в качестве иммунореагентов описан при диагностике чумы Зайцев , , легионеллеза Ерохин Е. П., , дизентерии Юдицкая М. Н., , стафилококковой инфекции Фикс Л. И., , сифилиса Базиков И. А., и др. А.А. Изредка наблюдающиеся ложноотрицательные результаты РАЛ могут быть устранены с помощью предварительной обработки исследуемых сывороток равным объмом 0,1 М раствора ЭДТА или 5 раствором трипсина в течение 1 ч при температуре С . Хорошие результаты дат также разведение антигенсодержащего материала буферным раствором с 0, твина . Л.М. Луканина с соавт. РАЛ . РНГА, исследуя сыворотки крови морских свинок, заражнных возбудителем бруцеллза. Чувствительность РАЛ была в 5 раз выше, чем РНГА с использованием эритроцитарного антигенного бруцеллзного диагностикума Одесского предприятия по производству бактерийных препаратов. Применение разработанных Н. Г. Плехановой с соавт. При этом возможна не только идентификация, но и дифференциация псевдомонад за счт значительной разницы в титрах РАЛ. Б.А. Дубаневич и В. М.Костюковский показали перспективность использования РАЛ в диагностике лептоспироза. Е.П. Ерохин с соавт. В качестве красителя авторы использовали пиронин. Наличие на поверхности полиакролеиновых частиц альдегидных групп дало возможность проводить направленную модификацию носителя казеином, обеспечивая оптимальные условия для иммобилизации иммуноглобулинов и повышая стабильность конъюгата. Исследования были проведены с возбудителями чумы, туляремии, бруцеллза, легионеллза. Разработанный авторами диагностикум не уступал по активности коммерческим эритроцитарным диагностикумам. Ниязматов с соавт разработали латексный диагностикум на основе сополимера стирола с цинковой солью непредельной карбоновой кислоты, чувствительность полученного диагностикума при выявлении холерного вибриона составила 5x 3 м. А.ПЛСочеткова с соавт. Чувствительность диагностикума при выявлении возбудителя туляремии составила 2,5x5 1х6 м. Имеются сообщения о приготовлении на основе полиакролеиновых микросфер диапюстикумов чумных, обладающих высокой активностью Зайцев , . Я.М. Станишевский с соавт. С помощью полимерных микросфер с иммобилизованным протеином А были созданы антительные диагностикумы с высокой чувствительностью. Таким образом, накопленные литературные данные свидетельствуют о перспективности данного направления.