Характеристика половых клеток семенников кроликов как мишеней для генно-инженерных исследований

• Автор: Новгородова, Инна Петровна
• Шифр специальности: 03.00.23, 03.00.13
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2004
• Место защиты: п. Дубровицы, Московской обл.
• Количество страниц: 141 с. : ил.

ВВЕДЕНИЕ

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Процесс сперматогенеза у млекопитающих

Типы клеток сперматогенного эпителия

Перспективы использования стволовых клеток сперматогоний

Механизмы контроля пролиферации и дифференцировки сперматогоний

Культура клеток сперматогоний

Методы получения трансгенных животных с помощью половых клеток семенников

Трансформация клеток сперматогенного эпителия

Использование спермиев в качестве вектора для переноса чДНК

Трансплантация стволовых клеток сперматогоний

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
Используемые векторные системы
Реактивы и оборудование
Приготовление гистологических препаратов
семенников
Определение числа клеток сперматогенного эпителия и относительного количества ДНК ядер клеток
семенников
Иммуногистохимический анализ экспрессии рекомбинантных белков в семенниках кроликов
Приготовление культуры клеток семенников
Окрашивание и идентификация клеток культуры
тканей семенников
Генетическая трансформация клеток семенников i
Трансфекция культуры клеток семенников культуральной жидкостью
Трансфекция культуры клеток семенников клеткамиупаковщицами
Введение рекомбинантных векторов в семенники кроликов i viv
РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ Гистологические исследования семенников кроликов Изучение морфологии сперматогенеза кроликов и выявление возраста с максимальным числом сперматогоний
Определение относительного количества ДНК ядер клеток сперматогенного эпителия Трансформация клеток семенников i vi Получение и характеристика культуры клеток тканей семенников кроликов
Анализ эффективности генетической трансформации клеток семенников i vi Трансфекция клеток семенников кроликов ретровирусными векторными системами i viv Изучение эффективности генетической трансформации клеток семенников кроликов i viv генной конструкцией XV Изучение эффективности генетической трансформации клеток семенников кроликов i viv генной конструкцией XI
Сравнительный анализ эффективности генетической трансформации клеток семенников кроликов i viv
при использовании генных конструкций рХНЗУкСН и 1 рХ1п,ч
ОБСУЖДЕНИЕ
ВЫВОДЫ
ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Сперматогенез биологическое явление, возникшее в результате длительного эволюционного процесса и охватившее практически весь мир эукариотических организмов, заключающееся в превращении диплоидных первичных половых клеток в гаплоидные дифференцированные мужские половые клетки спермии, уникальные по своим свойствам и способные к автономному существованию и оплодотворению яйцеклетки С. Райцина, , Л. Данилова, . Е. , . Развитие первичных половых клеток. Пресперматогенез. Собственно сперматогенез. Развитие первичных половых клеток происходит у зародыша вне гонады. В этот период мужские и женские половые клетки морфологически не различаются, за исключением их хромосомных наборов. Эти клетки митотически делятся и обладают амебоидным движением, что позволяет им достигать гонады Л. Фалин, С. Райцина, . Пресперматогенез протекает в гонаде, где осуществляется дифференцировка пола. У некоторых животных этот период может практически отсутствовать, так как сперматогенез начинается непосредственно после того, как первичные половые клетки достигнут гонады. Определение начала сперматогенеза представляет определенные трудности С. Райципа, , К. Сурикова, А. Хэм и др. С. Захидов, . Сперматогенез заключается в постепенном преобразовании стволовых клеток в спермин, продолжающийся в определенный период времени в пределах семя выносящих канальцев семенников и затрагивающий пролиферацию, дифференциацию и созревание клеток сперматогеннного эпителия. Этот процесс представляет собой клеточное деление с повторными митотическими делениями, дублированием хромосом, генетической рекомбинацией, предназначенной для того, чтобы произвести сперматиды с гаплоидным набором хромосом, а затем дифференцирование сперматид в спермин. Это наиболее активная система самовозобнавлення организма, производящая ежедневно 7 спермиев на грамм ткани семенников. Продолжительность сперматогенеза для каждого вида животных является величиной постоянной . Процесс сперматогенеза сходен с эмбриональным развитием, так как сложные процессы дифференцировки в развивающихся половых клетках, как и при эмбриональном развитии, происходят в определенном временном аспекте . Сперматогенез характеризуется высокой степенью упорядоченности процессов развития и формирования спермиев в пространстве и времени, а также наличием определенной зависимости в разной степени диффсрснцированности половых клеток друг от друга. В извитых семенных канальцах семенников млекопитающих можно выделить около различных сперматогснных клеток. При этом в одном какомлибо участке канальца можно обнаружить не более пяти клеток. Процесс сперматогенеза в семенных канальцах осуществляется волнообразно, и поэтому на поперечных срезах извитых семенных канальцев можно наблюдать все клеточные ассоциации, характерные для данного вида животного. Число клеточных ассоциаций в семенниках млекопитающих постоянно у крысы у кролика 8 у быка у северного оленя у верблюда 7 А. Хэм и др. С. Райцина, С. Захидов, Л. Сперматогенез можно разделить на три стадии или периода сперматоцитогенез, сперматидогенез мейоз и спермиогенез Э. РузенРанге, С. Райцина, . Эти стадии связаны с определенными типами сперматогенных клеток сперматогоний, сперматоцитов, сперматид и спермиев. Каждый период у разных видов животных длится также определенное время. Существует и другая классификация сперматогенеза, делящая этот процесс на четыре периода размножение, рост, созревание и формирование мужских половых клеток. Остановимся более подробно на периодах сперматогенеза, относящихся к первой классификации. Спермато цитогенез. В этот период происходит митотическое деление части сперматогоний, образующихся из зачаткового эпителия и усиленное размножение сперматогоний в течение ряда последовательных генераций. Увеличивается масса цитоплазмы сперматогоний, и они превращаются в сперматоциты первого порядка. Мейоз является центральным событием в сперматогенезе, когда происходит конъюгация гомологичных хромосом и обмен участками между гомологичными хромосомами кроссинговер, спаривание хромосом и два деления созревания, приводящие к сокращению числа хромосом вдвое и образованию из сперматоцитов сперматид. Перед вступлением в профазу мейоза число ДНК в сперматоцитах на стадии прелептотены, образующейся при делении сперматогоний, удваивается.