Иммунохимические и молекулярно-генетические свойства вируса алеутской болезни (Aleutian disease virus), циркулирующего на юге Приморского края, и разработка методов его диагностики

• Автор: Мартыненко, Марина Владимировна
• Шифр специальности: 03.00.23, 03.00.06
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2006
• Место защиты: Владивосток
• Количество страниц: 97 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ
ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ПАРВОВИРУСЫ ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Вирусы семейства vvii.

1.2. Вирус алеутской болезни i i vi, V.

1.2.1. Общая характеристика вируса

1.2.2. Физикохимические и антигенные свойства.

1.2.3. Геном V организация, репликация, изменчивость

1.3. Способы диагностики вируса.

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

2.1. Вирусный материал

2.2. Получение препарата VV дальневосточный изолят
2.3. Электронная микроскопия
2.4. Очистка ДНК
2.5. Электрофорез вирусных белков в ПААГ
2.6. Электрофорез ДНК в агарозном геле
2.7. Получение кроличьей антисыворотки к V
2.8. Выделение I из сыворотки крови норки.
2.9. Мечение I и вирионов V ,1
2 Реакция двойной иммунодиффузии
2 Встречный иммуноэлектрофорез
2 Ракетный иммуноэлектрофорез.
2 Радиоиммунный анализ
2 Полимеразная цепная реакция.
2 Дотблот гибридизация ДНК.
2 Секвенирование ПЦРфрагментов.
2 Анализ генетических данных
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
3.1. Морфологические свойства VV
3.2. Структурные полипептиды VV.
3.3. Иммунохимический анализ капсидных белков.
3.4. Молекулярногенетическая характеристика АЭУБУ.
3.4.1. Вирусная нуклеиновая кислота
3.4.2. Амплификация гена капсидного белка Ур2
3.4.3. Секвестрование геномаЛОУЭУ и филогенетический анализ
штаммов вируса
ГЛАВА 4. РАЗРАБОТКА МЕТОДОВ ДИАГНОСТИКИ АБУИУ
4.1 Выявление методом встречного иммунозлектрофореза
4.2. Радиоиммунные методы детекции
4.3. Выявление методом ГИДР.
4.4. Выявление методом дотблот гибридизации ДНК
ГЛАВА 5. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ.

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Физикохимические и антигенные свойства. Способы диагностики вируса. ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ. Выделение I из сыворотки крови норки. Ракетный иммуноэлектрофорез. Полимеразная цепная реакция. Дотблот гибридизация ДНК. Секвенирование ПЦРфрагментов. ГЛАВА 3. Структурные полипептиды VV. Иммунохимический анализ капсидных белков. Молекулярногенетическая характеристика АЭУБУ. ГЛАВА 4. Выявление методом ГИДР. ГЛАВА 5. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ. БСА. Н. 0. ПЭГ полиэтиленппиколь м. Актуальность темы. Норки vi . При клеточном содержании на фермах наиболее часто их инфицируют два парвовируса норок алеутской болезни V и энтерита V семейство vvii и морбилливирус чумы плотоядных V семейство xvii Литвинов, Яременко, . В конце х гг. Приморского края были зарегистрированы случаи массового падежа норок особенно щенков. Результаты вскрытия павших животных и эпидемиологические данные указывали на вирус алеутской болезни. К тому же, в сыворотке крови животных были обнаружены антитела к V Минская и др. Было сделано предварительное заключение, что наиболее вероятным возбудителем является V. Требовалось провести видовую идентификацию вируса, определить его патогенность. Алеутская болезнь норок контагиозное заболевание пушных зверей. Высокая восприимчивость животных и устойчивость вируса во внешней среде способствуют массовой смертности зверей, доходящей в некоторых случаях до 0 как за рубежом . России Михеев, , обуславливая значительный экономический ущерб пушному звероводству. Для вируса характерна высокая скорость изменчивости . . Показано, что единичные аминокислотные замены в его капсидных белках способны значительно влиять на патогенные свойства штаммов вируса i . v . В связи с этим, отнесение впервые выявленного на юге Дальнего Востока изолята V к группе штаммов определенной патогенности одна из важных задач при изучении вируса. Это позволит прогнозировать будущие вспышки, будет способствовать снижению экономического ущерба и разработке мероприятий по исправлению эпидемиологической ситуации на звероводческих фермах края. Литературные данные свидетельствует о достижении значительных успехов в изучении V. Предложенные вакцины малоэффективны, так как вирионы не нейтрализуются антителами, а циркулируют в виде инфекционного иммунного комплекса. До настоящего времени основным средством контроля заболевания, вызываемого V, остается выбраковка и изоляция пораженных животных, эффективность которой необходимо повышать, благодаря использованию современных молекулярногенетических методов, таких как радиоиммунный анализ, полимеразная цепная реакция, гибридизация нуклеиновых кислот, которые основаны на выявлении следовых количеств вируса. Однако, учитывая, что V не изученный вирус на Дальнем Востоке России, отсутствие данных об антигенных свойствах его капсидных белков и молекулярногенетических характеристик не позволяет разработать эффективные диагностические тестсистемы. Необходимо отметить, что исследование парвовирусов отстает от аналогичных исследований других вирусов. Во многом это определяется их мелким размером, сложностью культивирования, сильной зависимостью репликации от клетки. Практически отсутствуют сведения об их антигеном родстве. Расшифрованы нуклеотидные последовательности геномов менее половины всех известных парвовирусов. Поэтому, о происхождении и эволюции этих видов известно очень мало. Учитывая выше сказанное, а также то, что парвовирусы представляют угрозу для многих животных и, возможно, для человека, их изучение представляется актуальным и своевременным. Цель работы состояла в изучении структурноморфологических, иммунохимических и молекулярногенетических особенностей возбудителя алеутской болезни норок V, циркулирующего в зверосовхозах Приморского края и разработке методов нового поколения для его диагностики. V на основе ПЦР и гибридизации нуклеиновых кислот.