Биотехнологические подходы к повышению информативности серологической диагностики сифилиса

• Автор: Федосеева, Светлана Владимировна
• Шифр специальности: 03.00.23, 03.00.07
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2005
• Место защиты: Санкт-Петербург
• Количество страниц: 184 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
СОКРАЩЕНИЯ.
ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Характеристика возбудителя сифилиса.

1.2. Инфекционная иммунология сифилиса.

1.3. Современные методы лабораторной диагностики сифилиса

1.4. Иммуноферментный анализ в диагностике сифилиса

1.5. Реакция иммунофлюоресценции в диагностике сифилиса

1.6. Методы разделения иммуноглобулинов

1.6.1. Физикохимические методы

1.6.2. Бактериальные Гсрецепторы
1.7. Аффинная хроматография
ГЛАВА II. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.
2.1. Характеристика использованных антигенов.
2.1.1. Характеристика цельноклеточного антигена патогенной трепонемы.
2.1.2. Искусственные аналоги антигенов Т.расит.
2.1.3. Характеристика культурального трепонемного антигена
2.1.4. Характеристика кардиолипинового антигена
2.2. Характеристика конъюгатов.
2.3. Иммуноферментный анализ.
2.4. Реакция иммунофлюоресценции.
2.5. Аффинная хроматография
2.6. Метод иммуноблотинга
2.7. Характеристика контрольных панелей сывороток.
2.8. Характеристика контрольной панели слюны
2.9. Стандартные серологические реакции.
2.9.1. Реакция микроприципитации
2.9.2. Быстрый плазмореагиновый тест ИРЯтест.
2.9.3. Реакция связывания комплемента.
2.9.4. Реакция пассивной гемапглютинации
2 Общеклинические лабораторные исследования.
2 Статистическая обработка результатов
ГЛАВА III. Разработка и оптимизация ИФА на основе искусственных аналогов трепонемных антигенов
3.1. Изучение искусственных аналогов трепонемных антигенов
3.2. Сравнительная характеристика полистироловых планшетов
3.3. Изучение зависимости результатов ИФА от разведения исследуемого материала
3.3.1. Изучение влияния разведения сыворотки крови на результаты ИФА
3.3.2. Изучение влияния разведения слюны на результаты ИФА
3.4. Изучение влияния на результаты ИФА длительности контакта исследуемого материала с иммуносорбентом при комнатной температуре.
3.5. Изучение влияния сроков хранения иммуносорбентов на
результаты ИФА
ГЛАВА IV. Разработка и применение ИФА на основе
кардиолипинового антигена.
4.1. Выявление рабочей концентрации кардиолипинового антигена
для его сорбции на твердую фазу.
4.2. Результаты исследования кардиолипинового антигена в ИФА. ГЛАВА V. Разработка и оптимизация методов серологической диагностики сифилиса на основе нативных трепонемных антигенов
5.1. Разработка модифицированного метода IРИФабс.
5.1.1. Сравнительное характеристика конъюгатов на основе белка
5.1.2. Исследование культурального трепонсмного антигена в
Ф 5.1.3. Оптимизация условий проведения аффинной хроматографии.
5.2. Изучение фракций культурального трепонемного антигена
ГЛАВА VI. Апробация разработанных серологических методов и обоснование алгоритмов диагностики сифилиса
6.1. Оценка диагностической значимости определения специфических сывороточных антител к белковым антигенам
Т.i методом ИФА.
6.2. Оценка диагностической значимости выявления методом ИФА противотрспонемных секреторных Iантител к белковым антигенам .i.
6.3. Оценка диагностической значимости выявления Iантител модифицированным методом РИФабс.
6.4. Построение линейных дискриминантных функций для решения задач дифференциальной диагностики скрытого сифилиса
и серорезистентности.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ.
ВЫВОДЫ.
ЛИТЕРАТУРА


Эти данные указывают на потенциальную возможность возбудителя инфекции уклоняться от иммунного ответа организма. В составе возбудителя сифилиса обнаруживается около белковой составляющей, липидов и 5 углеводов. Таким образом, в структуре Т. Отмечается значительное сходство данного антигена для тканевой и культуральной трепонемы, а также других трепонсм. Полисахаридный антиген термолабильный, выдерживает нагревание до 0С в течение одного часа, извлекается трихлоруксусной кислотой, общий для тканевой и культуральной трепонемы. Липидный антиген. Он является комплексом, состоящим из нескольких фосфолипидов, включая вещество, сходное с кардиолипииом, и из гликолипина, еще недостаточно изученного. В последнее время исследователи все больше склоняются к мысли, что данная классификация антигенной структуры трепонемы является неточной следует говорить о липопротеиновом и липополисахаридном антигенах , , , , 8. В диагностических целях довольно широко используются липопротеиновые антигены . Технология получения
рекомбинантных белков позволяет получить в достаточно чистом виде аналог любого антигена. Наименее изучен, но также интересен липополисахаридный антиген с внешней мембраны возбудителя. Известно, что липополисахарид ЬРБ имеет молекулярную массу 0 кД, а в качестве мономера детерминанту олигосахаридов на белковых цепях основного каркаса. Общее число мономеров, а также минимальное число мономеров, достаточное для иммуногенности, неизвестно , 7, 9. В связи с этим, является актуальным изучение иммунного ответа на липополисахаридный антиген, а также возможности его применения в диагностике сифилиса. Инфекционная иммунология сифилиса. Проникновение бледной трепонемы в организм человека запускает целый каскад различных иммунологических реакций и, несомненно, их знание и понимание необходимо в правильной диагностике сифилиса. Считается, что врожденного иммунитета к сифилису не существует, хотя есть данные о том, что в сыворотке крови здоровых лиц присутствуют термолабильные трепонсмостатические и трепонемоцидные вещества, которые могут обусловить невосприимчивость к инфекции при половом контакте с больным заразной формой сифилиса, а также могут обеспечить процесс самоизлечения сифилиса организмом. Приобретенного пожизненного иммунитета у переболевших сифилисом не возникает, в связи с чем сифилисом можно болеть несколько раз. Причем повторное заболевание реинфекция считается безусловным подтверждением излеченности больного от предыдущего 4, . Естественно, первая реакция организма на внедрение возбудителя это активация клеточного звена иммунитета. В фагоцитозе бледных трепонем участвуют самые разные клетки лейкоциты, эозинофилы, эпителиальные клетки, макрофаги, ретикулярные клетки. Наличие большого количества макрофагов и ретикулярных клеток служит показателем активности иммунологического процесса . Фагоцитоз носит незавершенный характер, что играет отрицательную роль в борьбе с сифилитической инфекцией, поскольку в фагоцитирующей клетке долгое время сохраняется жизнеспособный возбудитель. Фагоцитоз стоит рассматривать как первый и постоянный этап борьбы организма с бледной трепонемой, протекающий во время всего инфекционного заболевания. В процессе фагоцитоза происходит передача антигенной информации, т. Тлимфоцитами. Начинается синтез гетерогенной популяции антител или иммуноглобулинов гуморальный иммунный ответ. Образующиеся на трепонемные антигены антитела не обладают защитными свойствами, но опсонизированные ими микробные клетки полностью погибают в процессе фагоцитоза. Иммуноглобулины составляют около всех плазменных белков, а также обнаруживаются в больших количествах в различных секретах слюна, слезы, молоко, тканевые жидкости. На высоте иммунного ответа трепонемы образуют цисты или переходят в Ьформу, что способствует переходу инфекции в латентный скрытый период, во время которого клинические проявления заболевания отсутствуют. Снижение напряженности иммунного ответа вызывает обратный переход возбудителя в извитую стадию, его размножение и как следствие этого рецидивы болезни 4, .