Изучение гистоновых вариантов на разных стадиях развития дрозофилы

• Автор: Иванченко, Мария Георгиевна
• Шифр специальности: 03.00.15
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1984
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 123 c. : ил

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Гистоны. Гетерогенность гистонового пула значение

для процессов клеточной дифференцировки и развития организмов

1.2 Гистоны дрозофилы.

1.3 Роль гистонов в организации и структурнофункциональных переходах хроматина.

1.4 Синтез гистонов и включение в хроматин

1.5 Постановка проблемы и конкретных задач исследования

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

2.1 Объекты исследования

2.2 Получение ядер
2.3 Разделение хроматина на транскрипционноактивную
и неактивную фракции.
2.4 Экстракция гистонов и приготовление гистоновых
препаратов.
2.5 Электрофоретические методы исследования гистонов
2.6 Определение количества гистоновых фракций.
2.7 Авторадиографическое исследование меченных
гистоновых фракций.
2.8 Окисление гистоновых фракций
3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУВДЕНИЕ
3.1 Идентификация субфракций гистоновых белков дрозофилы
3.1.1 Электрофоретические свойства.
3.1.2 Формы окисления
3.1.3 Ацетилированные формы
3.1.4 фосфорилированные формы.
3.2 Гистоны дрозофилы при онтогенезе
3.2.1 Различия в составе гистонового пула на разных
стадиях развития дрозофилы.
3.2.2 Изменения гистонов дрозофилы в ходе ранного эмбриогенеза
3.3 функциональное состояние клетки и состав
гистонового набора
3.3.1 Гистоновые белки клеток культуры дР при росте
между двумя последовательными пассажами
3.3.2 Влияние экдистерона и ингибиторов клеточного метаболизма на состояние гистонов.
3.3.3 Свойства гистонов во фракциях хроматина, различающихся по транскрипционной активности.
3.3.4 Изменение гистоновых белков дрозофилы при
тепловом шоке
ВЫВОДЫ.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Они могли бы представлять собой места узнавания специфическими молекулами. В таком случае, их доступность к трипсину могла бы просто отражать их общую доступность для ферментов, модифицирующих гистоны ацетилаз, метилаз, киназ и др. Хотя гистоны самые консервативные белки живого мира ,, но всетаки их первичная структура тоже может варьировать. Для лизинбогатого класса давно известно существование субфракций гистоновых вариантов . После развития техники электрофореза гистонов в полиакриламидных гелях ПААТ, содержащих неионные детергенты типа Тритона XI XI и да 4 , стало ясно, что гистоны Н2а, Н2в и НЗ тоже могут быть разделены на субфракции. Благодаря этому методу, были обнаружены также и минорные гистоноподобные белки хроматина ,1,II. В настоящее время обнаружены варианты нуклеосомных гистонов у различных филлогенетических групп многих видов морского ежа , птиц 1, млекопитающих , растений 5 и тетрахимены . Состав и количество вариантов могут меняться в зависимости от ткани 1,1 или стадии развития организма ,,3. На морском еже, который оказался самым плодотворным объектом для такого рода исследований, даже показано, что не только отдельные варианты, а целые гистоновые наборы ранние и поздние замещают друг друга при развитии организма . Замещения в составе гистонового пула тесно сопутствуются изменениями чувствительности к нуклеазам и длины повторяющейся структурной единицы хроматина там же . Поэтому авторы предполагают, что замещения гистоновых вариантов могут приводить к изменениям структуры хроматина и, таким образом, играть роль общего контролирующего процесса при развитии организмов. Из хроматина эритроцитов цыпленка вместе с гистонами экстрагируются три минорных белка Щ, М2 и М3 , которые повидимому присутствуют у всех позвоночных 1 . У млекопитающих обнаружено четыре таких белка . По электрофоретическим свойствам, а часто и по распределению основных аминокислот по длине полипептидной цепи, минорные гистоноподобные белки похожи на гистоны. У дрозофилы два минорных белка Д и Д2 были обнаружены в гистоновых экстрактах II Позже показано, что Д2 напоминает по аминокислотному составу Н2а и Н2в, а Д по этому признаку не похож ни на гистоны, ни на НМббелки хроматина 0. V Многоклеточные организмы состоят из большого числа специализированных клеток. Нет сомнения, что в этих клетках хроматин организован и функционирует поразному. Большое сродство гистонов к ДНК является, со своей стороны, предпосылкой для прочности созданных гетерогенностей. Однако, поскольку число гистоновых классов ограничено всего пять , а гистоновая структура весьма консервативна, то до сих пор гистоны считаются некоторыми авторами неспецифическими структурными элементами, которые не могут варьировать между разными тканями. Существование структурных вариантов гистонов и минорных гистоноподобных белков дает больше возможностей для создания гетерогенностей в хроматине. Различные гистоновые варианты и минорные белки, будучи дифференциально распределены в хроматине, могли бы придавать специфические свойства разным его участкам. Такими свойствами могут быть доступность хромосомных белков для модифицирующих ферментов, изменение сродства к различным негистоновым белкам, конформационные различия для узнавания со стороны диффундирующих регуляторов и др. Все это вместе взятое может привести к изменению активности определенных генов, что в конечном счете является основным механизмом клеточной дифференцировки. Подобная регуляция клеточной дифференцировки требует 1е неспецифичности гистоновых молекул к последовательностям оснований ДНК и 2е существования механизма для неслучайного распределения гистоновых субфракций между двумя дочерними нитями ДНК при клеточной репликации. Относительно механизма раннего эмбриогенеза известно, что первые десять клеточных делений дробление осуществляется без информации со стороны эмбрионального генома. Быстроделящиеся клетки примерно до стадии средней бластулы синтезируют белок за счет РНК цитоплазмы согл.