Денсовирус рыжего таракана Blattella germanica : Генетический аспект взаимодействия вирус / хозяин

• Автор: Чумаченко, Анастасия Геннадьевна
• Шифр специальности: 03.00.15
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2006
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 122 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Денсовирусы

Общая характеристика денсовирусов

Краткое описание структурнофункциональной организации денсовирусов, инфицирующих различные виды насекомых

Генетические элементы,

содержащие домен обратной транскриптазы

Мобильные элементы .

Тилы мобильных элементов

Дупликация сайтовмишений

Мобильные элементы как диспергированные повторяющиеся последовательности. .
Индукция мобильных элементов под действием стресса
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Условия содержания В. i
Постановка скрещиваний
Линии В. i, использованные в работе
Выделение тотальной ДНК рыжего таракана
Электрофорез в агарозном геле
Полимеразная цепная реакция
Получение очищенных продуктов ПЦР
Лигирование фрагментов ДНК
Трансформация клеток . i
Выделение и очистка плазмидной ДНК для идентификации рекомбинантных молекул .
Рестрикция рекомбинантных плазмид для установления длины вставки
Секвенирование ДНК
Компьютерный анализ
Саузернблот гибридизация .
Поддержание пересеваемой культуры клеток .i
Облучение клеток улучами
Микроинъекции вирусных частиц под кутикулу тараканов
Электронная микроскопия срезов ткани тараканов
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
1. Распространенность денсовируса V в популяциях
рыжего таракана
2. Пересеваемая культура клеток рыжего таракана
как модель для изучения денсовируса
3. Анализ тканеспецифичности развития вирусной инфекции
4. Заражение рыжего таракана денсовирусом V методом микроинъекций. Поддержание вируса в лабораторных условиях
5. Определение видоспецифичности вируса
6. Обнаружение ретроэлемонтов рыжего таракана и анализ их взаимодействия
с денсовирусом V
Обнаружение ретроидных элементов рыжего таракана
Активизация выявленных ретроэлемнтов под действием денсовируса V
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


В настоящее время известно пять различных отрядов насекомых i, , i и у представителей которых обнаружены денсовирусы i, . К настоящему времени открыто около денсовирусов i Р. i . М. i . . i . Около денсовирусов были выделены из различных видов беспозвоночных насекомых, креветок i . А. К., . ., ii . . X., i . ., i . Физикохимические свойства денсовирусов подобны свойствам парвовирусов позвоночных, хотя они имеют очень небольшое сходство нуклеотидных последовательностей М. ., М. ., . Подсемество денсовирусов делится на три рода один род vi содержит денсовирусы, цепи ДНК которых упаковываются примерно в одинаковом количестве, с геномом размером около 6 т. i i V V и денсовирус i , V второй род vivi состоит из денсовирусов, у которых упаковывается преимущественно одна цепь, с геномом размером около 4 т. КИПы i V, ix i V. Некоторые денсовирусы, нуклеотидная последовательность которых определена к настоящему времени, не подходят под данное разделение на три рода. Многие другие денсовирусы остаются неклассифицированными изза отсутствия их молекулярных характеристик. Ядра зараженных денсовирусами клеток становятся темными, электронная микроскопия позволяет рассмотреть плотные массы вирионов. Изза этого свойства денсовирусы получили свое название V . i . . . Это предположительно обусловлено тем, что эти вирусы автономно реплицируются и собираются в ядре. Как правило, денсовирусы вызывают смертельные заболевания хозяев . . ., . Первые симптомы потеря аппетита, вялость, подавление линьки и метаморфоза. Личинки насекомых становятся белесыми, у них наблюдаются признаки паралича конечностей. Такие симптомы у V и V. Таракан Р. РV, проявляет сходные симптомы перед смертью задние ноги парализуются, и их движения становятся нескоординированными. Другие денсовирусы вызывают опухоли в кишках хозяев, эпителиальные клетки средней кишки зараженных личинок разрастаются, становятся тонкими и полупрозрачными. Денсовирусы имеют гексагональную форму с диаметром нм и содержат линейную однонитевую молекулу ДНК протяженностью примерно 56 т. В зависимости от типа вируса вирусные частицы могут содержать или преимущественно комплементарную мРНК нить ДНК например, V, или обе нити примерно в равном отношении например, V i М. i Р. В том случае, когда в различных вирусных частицах упакованы как плюс, так и минус нити, при выделении тотальной ДНК в условиях высокой концентрации соли происходит формирование двухцепочечной ДНК. Фланги ДНК денсовирусов содержат концевые инвертированные повторы КИП, способные формировать вторичные структуры. У некоторых вирусов, например у V, КИП являются одинаковыми на обоих концах вирусной ДНК В. М. А. М., i М. .. v Е. Е., . ., v . V., . Показано, что КИП играют важную роль в процессе автономной репликации вирусной молекулы . ., . Все денсовирусы, нуклеотидная последовтельность которых определена к настоящему времени, имеют несколько открытых рамок считывания ОРС. В зависимости от типа вируса ОРС могут быть локализованы в одной или обеих цепях вирусной ДНК. Часть из них кодирует последовательности, экспресирующие белки вирусной капсулы, другие ОРС экспрессируют неструктурные регуляторные белки i М. i Р. Вирус эффективный переносчик генетической информации и может быть использован как вектор в генетической инженерии. Денсовирусы, измененные методами генетической инженерии, могут быть использованы в качестве удобных векторных систем для генетических манипуляций с насекомыми в настоящее время несколько денсовирусов были успешно использованы для этих целей. Другая интересная возможность заключается в использовании вирусов насекомых для контроля над численностью, используя вирус для доставки гена специфического для насекомых токсина.