Исследование однородительской дисомии и микросателлитной нестабильности при ранней эмбриональной гибели человека

• Автор: Никитина, Татьяна Владимировна
• Шифр специальности: 03.00.15
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1999
• Место защиты: Томск
• Количество страниц: 148 с. : ил

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. ЦИТОГЕНЕТИЧЕСКИЕ НАРУШЕНИЯ ПРИ РАННЕЙ ЭМБРИОНАЛЬНОЙ ГИБЕЛИ У ЧЕЛОВЕКА

1.2. ФЕНОМЕН ГЕНОМНОГО ИМПРИНТИНГА.

1.2.1 .Импринтинг на уровне целого генома..

1.2.2. Импринтированные участки генома

1.2.3. Эволюционное значение импринтинга

1.3. ОДНОРОДИТЕЛЬСКАЯ ДИСОМИЯ

1.3.1.Механизмы формирования однородительской дисомии

1.3.2. Фенотипические последствия однородительской дисомии

1.3.3. Импринтированные районы генома человека.
1.3.4. Клиническая значимость однородительской дисомии.
1.3.5. Перспективы исследования однородительской дисомии у человека.
1.4. МИКРОСАТЕЛЛИТНАЯ НЕСТАБИЛЬНОСТЬ.
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ
2.1. МАТЕРИАЛ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.2. КУЛЬТИВИРОВАНИЕ ЭМБ ИОНА ЛЬНЫ X ФИБРОБЛАСТОВ И ПОЛУЧЕНИЕ ХРОМОСОМНЫХ ПРЕПАРАТОВ.
2.3. ВЫДЕЛЕНИЕ ДНК.
2.4.ДНКМАРКЕРЫ, ИСПОЛЬЗОВАННЫЕ ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ РОДИТЕЛЬСКОГО ПРОИСХОЖДЕНИЯ ХРОМОСОМ.
2.5. ПОЛИМЕРАЗНАЯ ЦЕПНАЯ РЕАКЦИЯ ПЦР.
2.6. ЭЛЕКТРОФОРЕЗ В ПОЛИАКРИЛАМИДНОМ ГЕЛЕ
2.7. СТАТИСТИЧЕСКАЯ ОБРАБОТКА РЕЗУЛЬТАТОВ
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ.
3.1. СТРУКТУРА ХРОМОСОМНЫХ НАРУШЕНИЙ ПРИ
РАННЕЙ ЭМБРИОНАЛЬНОЙ ГИБЕЛИ.
3.2. ВЫБОР ПОЛИМОРФНЫХ ДНКМАРКЕРОВ И АНАЛИЗ РОДИТЕЛЬСКОГО ПРОИСХОЖДЕНИЯ ХРОМОСОМ ПРИ РАННЕЙ ГИБЕЛИ ЭМБРИОНОВ ЧЕЛОВЕКА
3.3. АНОМАЛИИ КАРИОТИПА, НЕ ОБНАРУЖЕННЫЕ ПРИ ЦИТОГЕНЕТИЧЕСКОМ АНАЛИЗЕ
3.4. МИКРОСАТЕЛЛИТНАЯ НЕСТАБИЛЬНОСТЬ ПРИ РАННЕЙ ЭМБРИОНАЛЬНОЙ ГИБЕЛИ.
3.5. ЛОЖНОЕ ОТЦОВСТВО.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


С помощью анализа полиморфных микросателлитных ДНКмаркеров обнаружено, что стандартный цитогенетический анализ длительно культивируемых клеток спонтанных абортусов не выявляет до случаев мозаичных форм хромосомных нарушений. Показано существенное увеличение частоты мутаций в микросателлитных повторяющихся последовательностях ДНК у спонтанных абортусов по сравнению с нормальным уровнем мутационной изменчивости. Высказано предположение, что феномен микросателлитной нестабильности может быть косвенным показателем фактора отбора во внутриутробном периоде развития человека. Впервые определена частота ложного отцовства в русской популяции ЗападноСибирского региона. Исследованные в настоящей работе высокополиморфные тетрануклеотидные 8ТЯлокусы 1,14, О ДНКдиагностике наследственной патологии. Поскольку однородительская дисомия по 7 исследованным хромосомам набора человека 2, 9, , , , и не вносит существенного вклада в раннюю эмбриональную летальность у человека, то нет необходимости разработки мер ее специального учета в акушерскогинекологической практике. Созданный банк ДНК семей с невынашиванием беременности может быть использован в дальнейших исследованиях причин эмбриональной гибели. Обнаруженный в настоящей работе факт неполной выявляемости хромосомных аномалий у спонтанных абортусов при цитогенетическом анализе длительно культивируемых эмбриональных клеток говорит о необходимости дополнительного применения молекулярногенетических методов при проведении таких исследований. Обнаруженный феномен повышенного уровня мутационной изменчивости микросателлитных повторяющихся последовательностей ДНК у спонтанных абортусов позволяет предположить неслучайную ассоциацию этого явления с ранней эмбриональной гибелью. Это ориентирует на дальнейший поиск связи микросателлитной нестабильности с изменчивостью активных участков генома, которая может лежать в основе ранней гибели зародыша и спонтанного прерывания беременности. При проведении медикогенетичсского консультирования и дородовой диагностике наследственной патологии необходимо учитывать достаточно высокую частот ложного отцовства в русских популяциях. Однородительская дисомия по 7 хромосомам набора человека хромосомы 2, 9, , , , и , имеющим участки, синтенные с импринтированными районами генома мыши, не вносит существенного вклада в гибель кариотипически нормальных зародышей на эмбриональной стадии развития человека. Цитогенетический анализ длительно культивируемых клеток эмбрионов не выявляет до хромосомных аномалий, идентификация которых становится возможной с помощью проведения дополнительного молекулярногенетического исследования. Сибирского региона составляет 5,5. Несмотря на впечатляющие успехи медикобиологических наук в изучении онтогенеза человека, до настоящего времени остается недостаточно изученным период внутриутробного развития организма. Каждый раз развитие нового организма, возникающего в результате слияния сперматозоида с яйцеклеткой, подвергается строгой проверке силами естественного отбора на способность к нормальному автономному существованию. В результате такой проверки неудачные новые генетические конструкции гибнут на разных стадиях внутриутробного развития. Показано, что до зигот погибают уже в предимплантационном периоде, а клинически распознаваемых беременностей заканчиваются спонтанными абортами , 1. Причинами такой высокой смертности могут быть инфекционные заболевания, иммунологические конфликты между матерью и плодом, нейроэндокринные нарушения и неблагоприятное воздействие факторов окружающей среды. Однако, наиболее существенная роль в нарушении раннего эмбрионального развития у человека принадлежит геномным, хромосомным и генным мутациям, т. Так, числовые изменения хромосом обусловливают около случаев спонтанного прерывания в первом триместре беременности до недель, и эта цифра возрастает до в случаях ранней эмбриональной гибели ii . Рассмотрим более подробно роль цитогенетических аномалий в нарушении раннего развития зародыша человека.