Генетическая гетерогенность популяций кур, определяемая ДНК-фингерпринтингом и RAPD-анализом

• Автор: Митрофанова, Ольга Викторовна
• Шифр специальности: 03.00.15
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2003
• Место защиты: Санкт-Петербург
• Количество страниц: 118 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Некоторые особенности структуры ДНК животных и птиц

1.2. Полиморфные ДНКмаркеры.

1.2.1. Полиморфизм длин рестриктныъх фрагментов II

1.2.2. Мини и микросателли гы. ДНКфингерпринтинг

1.2.3. Зонды, используемые в ДНКфингерпринтинге животных

и ПТИЦ.

1.2.4. ДНКфингерпринтинг в изучении популяций.

1.3. Полимеразная цепная реакция со случайными праймерами КАРИРСК.

1.3.1. Методические особенности ЯАРОРСЯ
1.3.2. Использование КАРОРСЯ для изучения популяций животных
1.4. Другие полиморфные маркеры.
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.
2.1. Объект исследования
2.2. Выделение ДНК .
2.3. ДНКфингерпринтинг
2.3.1 Рестрикция образцов ДНК.
2.3.2. Электрофорез гидролизованных фрагментов ДНК
2.3.3. Перенос ДНК с агарозного геля на фильтр
2.3.4. Прегибридизация и гибридизация ДНК
2.3.5. Детекция дезоксигенина на фильтрах
.4. Полимеразная цепная реакция со случайными праймерами.
5. Обработка результатов исследования.
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
3.1. Анализ полиморфизма ДНК у различных пород кур с помощью случайных праймеров.
3.2. Анализ геномного полиморфизма в линиях кур экспериментальной популяции Русская белоснежная с помощью случайных праймеров
3.3. Анализ полиморфизма ДНК кур на основе использования фингерпринтинга.
3.4. Анализ результатов переноса амплифицированных ДНК
фрагментов на фильтр
ГЛАВА 4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ.
ПРЕДЛОЖЕНИЯ ПРОИЗВОДСТВУ.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Домашняя курица давно является привлекательным генетическим объектом, однако организация генома кур исследована пока недостаточно. Особенно следует отметить, что практически отсутствуют сведения о генетических особенностях малочисленных пород и экспериментальных популяций. Такая ситуация зачастую приводит к тому, что г енетическое разнообразие в этих популяциях оказывается далеко не оптимальным. Слишком низкая вариабельность может вызвать повышение коэффициента инбридинга, вследствие чего возникает инбредная депрессия. Высокий уровень генетического разнообразия в популяции может привести к потере уникальных свойств или признаков, характерных для этой популяции. Селекция в таких группах птицы не лает ожидаемого эффекта. Поэтому контроль генетическою разнообразия является существенным фактором в селекции. В значительной мере решить проблему изучения генома домашней курицы позволяют методы, основанные на анализе полиморфизма ДНК. К ним. ДНКфингерпринтинг. Совместное использование этих методов особенно перспективно, поскольку МОЗВОЛЯС Цель и задачи исследований. Основной целью нашей работы является оценка генетического разнообразия в породах и экспериментальных популяциях кур с помощью полиморфных ДНКмаркеров. ГТГ повторов в структуре ДНКфрагментов, синтезирующихся в ходе ЯАРОРСЯ. Научная новизна. Впервые с помощью полимеразной цепной реакции со случайными праймерами обнаружены последовательности ДНК, характерные для кур, подвергшихся селекции к пониженным температурам и неоплазмам. Проведен сравнительный анализ генетических параметров, рассчитанных на основе ДНКфингерпринтинга и ЯАРОРСЯ в ряде пород и экспериментальных популяциях кур. Показан высокий уровень сходства между курами популяции Русская белоснежная и курами породы Белый леггорн ВБ0,, а так же между курами экспериментальной популяции Русская белоснежная и курами породы Русская белая ВБ0,. Показано, что в ходе полимеразной цепной реакции со случайными праймерами амплифипируются нуклеотидные повторы ГТГ5. Сравнительный анализ генетических параметров, рассчитанных на основе использования ДНКфингерпринтинга и ЯАРОРСЯ, в ряде пород и экспериментальных популяциях кур показал их полное совпадение. Отмечено существенное повышение достоверности показателей при одновременном использовании двух методов. Теоретическая и практическая значимость работы. Показано, что в геноме кур могут быть выявлены последовательности ДНК, характерные для популяций, подвергшихся направленному отбору. Результаты исследований свидетельствуют об эффективности использования КДРОРСК анализа дчя поиска маркерных нуклеотидных последовательное гей для пород и отдельных популяций птиц. Совместное использование КАРЭРСК и ДНКфингерпринтинга можно рекомендовать для контроля над генетическими процессами в популяциях малочисленных пород, а так же в популяциях, селектируемых на определенные признаки. Апробация работы. ЯАРОРСЯ различия между линиями кур, выявленные с помощью ЯЛРОРСК. ДНК, получаемых в ходе полимеразной цепной реакции со случайными праймерами. ГЛАВА 1. Ядерная ДНК животных и птиц включает в себя различные по своей организации нуклеотидные последовательности. Наиболее популярным остается деление последовательностей ДНК на уникальную, которая присутствует в геноме в единственном числе, и повторяющуюся Гинатулин, . Повторяющиеся элементы в геноме животных были открыты в конце х годов. В дальнейшем особое внимание к себе привлекли тандемные или сателлитныс повторы, которые объединяются в огромную и разнообразную по структуре и последовательности группу, организованную в непрерывные кластеры с расположением мономерных единиц головакхвосту. Длина составляющих кластер мономеров варьирует от нескольких пар оснований до нескольких тысяч, а их число в разных семействах повторов колеблеться от нескольких десятков до миллионов Гречко, . Строгая классификация тандемных повторов на основании этих признаков весьма затруднительна и условна. Чаще всего различают группы мини и микросательлитов. Минисателлиты тандемно повторяющиеся последовательности с единицей повтора 90 п. богатые .