Изучение молекулярно-генетических аспектов опухолеобразования у редиса Raphanus sativus

• Автор: Матвеева, Татьяна Валерьевна
• Шифр специальности: 03.00.15
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2000
• Место защиты: Санкт-Петербург
• Количество страниц: 112 с.

ОГЛАВЛЕНИЕ
Введение
Глава 1. Обзор литературы
1.1 .Опухолеобразование у растений
1.1.1 .Причины опухолеобразования у растений
1.1.2.Опухолеобразование, вызванное агробактериями
1.1.3. Привыкание культур растительных тканей к
отсутствию фитогормонов в питательной среде in vitro
1.1.4. Опухолеобразование у межвидовых гибридов
1.1.5. Опухолеобразование в пределах отдельных видов растений
1.1.6. Факторы, влияющие на процесс генетического опухолеобразования
1.2. Инактивация генов
1.2.1. Основные положения
1.2.2. Транскрипционная инактивация (ТИ)
1.2.3. Посттранскрипционная инактивация (ПТИ)
1.3. Контроль клеточного цикла и опухолеобразование
1.3.1. Опухоли арабидопсиса и клеточный цикл
1.3.2. Отличительные особенности растительных клеток
1.3.3. Регуляция клеточного цикла у грибов и животных
1.3.4. Контроль клеточного цикла у растений
1.3.5. Взаимодействие фитогормонов с основными регуляторами клеточного цикла
Глава 2. Материалы и методы
2.1. Материалы
2.2. Методы
2.2.1. Поддержание коллекции
2.2.2. Получение асептических растений
2.2.3. Изучение чувствительности эксплантов к кинетину
2.2.4. Выделение растительной ДНК
2.2.5. Выделение ДНК агробактерий и Е
2.2.6. Поиск последовательностей ДНК, гомологичных агробактериальным онкогенам, в геноме редиса
2.2.6.1.ПЦР с невырожденными праймерами
2.2.6.2. ПЦР с вырожденными праймерами
2.2.6.3. Рестрикция геномной ДНК растений
2.2.6.4. Приготовление ДНК-зондов для блот-гибридизации по Саузерну
2.2.6.5.Блот-гибридизация по Саузерну
2.2.7. Изучение влияния азацитидина на проявление признаков, сопутствующих опухолеобразован ию, у редиса
in vitro
2.2.7.1. Методы культуры in vitro
2.2.7.2.Анализ метилирования ДНК
2.2.8.Поиск RAPD-маркера, проявляющегося совместно с признаком “способность к опухолеобразованию”
6.2.9. Статистическая обработка
Глава 3. Результаты
3.1. Поиск последовательностей ДНК, гомологичных
онкогенам Agrobacterium tumefaciens и Agrobacterimn rhizogenes
3.1.1. Поиск последовательностей методом ПЦР с невырожденными праймерами
3.1.2. Поиск последовательностей методом ПЦР с вырожденными праймерами
3.1.3. Поиск последовательностей методом блот-гибридизации

по Саузерну геномной ДНК редиса
3.2.Влияние азацитидина на проявление признаков, сопутствующих опухолеобразованию, у редиса (Raphanus sativus)
in vitro
3.2.1. Изучение чувствительности к кинетину in vitro у инбредных линий редиса
3.2.2. Влияние азацитидина на чувствительность редиса к ауксину и цитокинину
3.2.3. Влияние азацитидина на формирование вторичных опухолей
3.2.4.Влияние AzaC на метилирование ДНК
3.3. Анализ наследования признака "способность к
опухолеобразованию" у редиса
3.4. Поиск RAPD-маркера, проявляющегося совместно с
признаком “способность к опухолеобразованию”
Глава 4. Обсуждение
Выводы
Список литературы
Приложение

за даже в отсутствии фосфорилирования тирозинов. Одной из функций ЦЗК7 является посредничество в передаче сигнала от поврежденной ДНК к системам транскрипции и регуляции клеточного цикла (Lew, Kornbluth, 1996, Fisher, 1997).
1.3.4. Контроль клеточного цикла у растений
У растений описано по меньшей мере четыре типа ЦЗК и четыре класса циклинов А, В, D и Н (Inze, 1999).
Обширное семейство ЦЗК включает гомологи cdc2, которые можно объединить в две группы. Представители первой из них (далее обозначаемые как c-cdc2, от англ. "cognate")coдepжaт консервативный домен из 16ти аминокислот, характерный для cdc2 других эукариот, и называемый PSTAIRE по однобуквенному обозначению аминокислот его центральной части. Представители другой группы (далее обозначаемые как v-cdc2, от англ. "variant") к настоящему моменту описаны только у растений и характеризуются необычным PSTAIRE доменом. Их в свою очередь делят на два класса: содержащие PPTALRE и PPTTLRE домены,
соответственно. Уровень экспрессии c-cdc2 постоянен на протяжении всего клеточного цикла, v-cdc2 экспрессируются стадиеспецифично: PPTALRE — с фазы S до конца митоза, PPTTLRE — в фазе G2 и начале фазы М. Активация киназных комплексов, содержащих c-cdc2, периодична с пиками в периоды G1-S и D2-M, до активации PPTTLRE-cdc2. v-cdc2 контролируют поздние митотические события и, в отличие от c-cdc2, не могут комплементировать мутацию гена cdc2 (cdc28) дрожжей (Fobert et al., 1996; Doonan, Fobert, 1997).
К другим ЦЗК, обнаруженным у растений, относится продукт гена R2 риса, имеющий структурное сходство с ЦЗК7 млекопитающих, и продукты 2х генов люцерны: Ms-cdc2C, гомологичный двум киназам