Молекулярно-генетическая характеристика двух локусов синдрома ломкой х-хромосомы у жителей Западно-Сибирского региона

• Автор: Толмачева, Екатерина Николаевна
• Шифр специальности: 03.00.15
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2001
• Место защиты: Томск
• Количество страниц: 130 с.

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Болезни экспансии тринуклеотидных повторов

1.2. Генетика синдрома МартинаБелл

1.3. Клинический фенотип синдрома ломкой Ххромосомы.

1.4. Молекулярногенетические основы синдрома МартинаБелл

1.5. Диагностика синдрома МартинаБелл.

1.6. Выделение новых фрагильных сайтов на Ххромосоме и

идентификация второй формы синдрома МартинаБелл

1.7. Эволюция тринуклеотидных повторов.

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1. Структура и объем материала. .
2.2. Культивирование лимфоцитов и получение препаратов
хромосом
2.3. Выделение ДНК из лимфоцитов периферической крови
2.4. Амплификация фрагментов ДНК Ххромосомы с помощью
полимеразной цепной реакции.
2.5. Методы статистической обработки.
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
3.1. Цитогенетический анализ ломкого сайта X3 у лиц
с неспецифической умственной отсталостью
3.2. Молекулярногенетический анализ локуса РИАХА
у умственно отсталых лиц
3.2.1. Выбор методов ПЦР для исключения диагноза
синдрома МартинаБелл.
3.2.2. Определение числа ССЮловторов гена БМЯ улице
умственной отсталостью
3.2.3. Анализ статуса метилирования Срвостровка локуса БЛАХА у
мужчин с умственной отсталостью, не экспрессирующих ломкий сайт X.3.
3.2.4. Анализ статуса метилирования СрСосгровка гена РМШ у лиц с
клиническими признаками синдрома МартинаБелл
3.2.5. Частота синдрома МартинаБелл у индивидов
с умственной отсталостью.
3.2.6. Сопоставление результатов цитогенетического исследования
и анализа статуса метилирования СрСостровка гена БМЯ.
3.3. Полиморфизм три нуклеотидных повторов локусов БКАХА и
РЯАХЕ в Томской популяции
3.3.1. Распределение частот СССповторов локуса РИАХА.
3.3.2. Распределение частот СССповторов локуса РЛАХЕ.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ.
ВЫВОДЫ.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Цель работы Молекулярногенетическая характеристика области экспансии тринуклеотидных повторов локусов РЯАХА и РЯАХЕ у лиц с умственной отсталостью и здоровых индивидов ЗападноСибирского региона России с разработкой эффективного подхода к диагностике синдрома ломкой Ххромосомы. Исследовать полиморфизм тринуклеотидных Свв и вССповторов локусов РИАХА и РАХЕ у жителей ЗападноСибирского региона России. ГЗыявить больных с синдромом МартинаБелл среди лиц с умственной отсталостью с помощью цитогенетического исследования ломкой Xхромосомы. Провести молекулярногенетический анализ локуса РЯАХА у индивидов с умственной отсталостью с помощью оценки статуса метилирования гена РМЯ1 и определения числа ССХЗповторов в данном локусе. Сопоставить эффективность диашостикн СМБ цитогенетическими и молекулярногенетическими методами и разработать новый протокол диагностики синдрома ломкой Ххромосомы на основе комплексного использования цитогенетических и молекулярногенетических методов исследования. Научнан новизна. Впервые в России проведено исследование распределения частот ССб и вССповторов в двух локусах синдрома ломкой Ххромосомы РАХА и РЯАХЕ. У жителей ЗападноСибирского региона России выявлена высокая частота промежуточных аллелей более копий СООповторов локуса БКАХА. С помощью комплекса цитогенетических и молекулярногенетических методов исследования определена частота СМБ у лице недифференцированной олигофренией. Практическая значимость работы. Проведена цитогенетическая и ДНКдиагностика СМБ у 7 умственно отсталых больных и их родственников. В случаях поставлен точный диагноз заболевания. Выявлены семьи с СМБ, в которых возможна дальнейшая профилактика умственной отсталости с помощью современных методов диагностики. В ходе исследования в практику здравоохранения внедрен новый протокол диагностики СМБ. Предложен более корректный диагностический критерий синдрома ломкой Xхромосомы при использовании цитогенетического метода. Определены популяционные характеристики распределения аллелей области трннуклеотидных повторов локусов БКАХЕ и БКАХЕ у жителей ЗападноСибирского региона России. Разработан двухэтапный протокол диагностики СМБ с помощью комплексного цитогенетического и молекулярногенетического анализа области экспансии трннуклеотидных повторов локусов П1АХА и П1АХЕ у больных с Хсцеплениой умственной отсталостью. Эффективная диагностика СМБ может быть достигнута путем предварительного выявления индивидов, не имеющих нормального локуса РЯАХА, с последующей оценкой у них у них статуса метилирования Срвостровка гена БМШ. Частота С МБ у лиц с умственной отсталостью в регионе составляет 6,8 6,3 у мужчин и 8,1 у женщин. При цитогенетической диагностике СМБ у лиц мужского пола правильный диагноз возможен лишь в том случае, если степень экспрессии ломкого сайта Хц. Геном человека содержит большое количество кластеризованных и диспергированных повторяющихся нуклеотидных последовательностей. Среди диспергированных по геному простых последовательностей ДНК обнаруживаются короткие тандемные повторы размером до 5 п. . Из этой группы повторяющихся последовательностей особого внимания заслуживают тринуклеотидные повторы, поскольку, как было показано в начале х годов, они обладают уникальной способностью изменения числа копий в последующих поколениях родословной, сопровождающейся развитием тяжелых заболеваний. Скорость мутационных превращений этих повторов существенно возрастает при увеличении некоторого порогового их числа у родителя, что приводит к изменению количества копий этих повторов у потомства. Такой необычный скачкообразный способ изменения числа копий трннуклеотидных повторов в последовательных поколениях родословной получил название экспансии гри нуклеотидных повторов, или динамической мутации i . Тринуклеотидные повторы, превысив определенный порог длины, специфичный для разных заболеваний, в основе которых лежит механизм экспансии, становятся нестабильными, и приобретают тенденцию к дальнейшему увеличению числа копий в последующих поколениях. Возрастание числа копий нестабильных последовательностей в последующих поколениях связано с явлением антиципации, т. .