Генетический мониторинг таргетной терапии хронического миелолейкоза

• Автор: Куцев, Сергей Иванович
• Шифр специальности: 03.00.15
• Научная степень: Докторская
• Год защиты: 2009
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 202 с. : 18 ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Клиникогенетическая характеристика хронического миелолейкоза.

1.2. Генетическая диагностика хронического миелолейкоза.

1.2.1 Цитогенетическая диагностика хронического миелолейкоза

1.2.2. Молекулярногенетическая диагностика хронического миелолейкоза.

1.3. Генетический мониторинг терапии хронического

миелолейкоза ингибиторами тирозинкиназ.

1.3.1 .Молекулярнобиологические основы терапии хронического миелолейкоза иматинибом и другими ингибиторами тирозинкиназ

1.3.2 Цитогенетический мониторинг терапии хронического миелолейкоза.

2.3.3. Молекулярногенетический мониторинг терапии хронического миелолейкоза.
1.4. Генетический мониторинг резистентности к терапии
ингибиторами тирозинкиназ у больных ХМЛ.
1.4.1. Исследования амплификации гена
1.4.2. Исследование мутаций гена .
1.4.3. Фармакокинетический мониторинг терапии ХМЛ
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.
2.1. Материалы. Характеристика пациентов
2.2. Методы исследования
2.2.1. Стандартное цитогенетическое исследование клеток
костного мозга.
2.2.2. Флуоресцентная i i гибридизация хромосом I.
2.2.3. Количественная оценка экспрессии химерного
онкогена ВСЛАВЬ.
2.2.4. Определение первичной последовательности гена ВСЯАВВ
2.2.5. Измерение концентрации иматиниба в плазме крови и
межклеточной жидкости костного мозга
2.2.6. Статистическая обработка данных
РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ ГЛАВА 3. ЦИТОГЕНЕТИЧЕСКИЙ МОНИТОРИНГ ТЕРАПИИ ХРОНИЧЕСКОГО МИЕЛОЛЕЙКОЗА.
3.1. Цитогенетическая диагностика хронического миелолейкоза.
3.2. Цитогенетический мониторинг терапии хронического миелолейкоза
3.3. Дополнительные хромосомные аномалии в РЬнозитивных и
РЬ негативных клетках костного мозга
ГЛАВА 4. МОЛЕКУЛЯРНОГЕНЕТИЧЕСКИЙ МОНИТОРИНГ
ТЕРАПИИ ХРОНИЧЕСКОГО МИЕЛОЛЕЙКОЗА
ГЛАВА 5. МУТАЦИОННЫЙ МОНИТОРИНГ ТЕРАПИИ
ХРОНИЧЕСКОГО МИЕЛОЛЕЙКОЗА.
ГЛАВА 6. ФАРМАКОКИНЕТИЧЕСКИЙ МОНИТОРИНГ ТЕРАПИИ
ХРОНИЧЕСКОГО МИЕЛОЛЕЙКОЗА
ГЛАВА 7. ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


В одних исследованиях выявлено негативное влияние этих аномалий на достижение цитогенетического и молекулярного ответов. В других исследованиях дополнительные хромосомные аберрации, выявленные в положительных клетках до начала терапии иматипибом, достоверно не влияли на достижение цитогенетического ответа Маргынкевич И. С., Мартыненко Л. С., Иванова . I1. Особое прогностическое значение при цитогенетической диагностике X1 придается выявленной методом I делении в дериват Это довольно протяженная деления несколько мегабаз, захватывающая точки разрыва в хромосоме 9. X1 препаратами гидроксимочевины и аингерферона . ., i . ., . . . I. i . i . . . V . ., . О. . Также было обнаружено, что пациенты с этой делецией характеризуются худшим прогнозом при трансплантации костного мозга i . i . . Однако, в исследованиях эффективности терапии иматинибом не обнаружено зависимости выживаемости пациентов с XI от наличия делении в дериватной хромосоме 9 на момент диагностики ХМЛ . ., i . i . ., i . i . . Именно поэтому эксперты i в настоящее время рассматривают возможность исключения делении в дериватной хромосоме 9 из своих рекомендаций по лечению ХМЛ в качестве неблагоприятного прогностического фактора. Молекулярногенетическая диагностика ХМЛ Развитие молекулярногенетических технологий, в частности метода трансфекции ретровирусов, в х годах XX века позволило показать, что мутации некоторых генов могут приводить к развитию злокачественных опухолей. Гак, была доказана канцерогенная роль такого онкогена, как . В исследованиях . i с соавт. i . . ., v . был картирован в геноме человека на длинном плече хромосомы 9 в регионе 9 и было показано, что при ХМЛ ом транслоцируется на хромосому . Затем с соавт. . . ., i . хромосомы , а уже через год iv Е. iv . ii В. . Р., i . и , в результате которого образуется химерный транскрипт. . Таким образом, была доказана повышенная тирозинкиназная активность белка . ., . ., . ., i . ., . И, наконец, в этом же году в лаборатории . была произведена трансфекция гена экспериментальным животным, что вызвало развитие лейкоза . ., V . ., i . Результаты этих молекулярнобиологических исследований и появление в году метода полимеразной цепной реакции Г1ЦР заложили основу использования молекулярных технологий в диагностике и мониторинге терапии ХМЛ. Методология идентификации эволюционировала на протяжении последних лет Т. ii М. . Изначально было возможно только качественное определение транскрипта с использованием одношаговой амплификации или двухшаговой гнездовой амплификации с внутренними праймерами, повышающими чувствительность i . ., . ., . . . . ., . . .. . ., . ., i . Качественный ПЦРанализ, показывающий только наличие или отсутствие гранскрипта, недостаточно информативен. Поэтому для диагностики XI с последующей возможностью оценки динамики терапии на первый план вышли количественные ПЦРисследования и поиск прогностически важных уровней транскрипта Мисюрин . ., Аксенова Е. В., Крутов . . и др. Для определения минимальной остаточной болезни используют методику количественной полимеразной цепной реакции в реальном времени i , . В основе метода лежит регистрация накопления продуктов реакции в реальном времени и построение калибровочных кривых по реальным процессам, происходящим в каждой конкретной пробирке. Для дегекции ПЦРпродукта используются флуоресцентные красители, обеспечивающие флюоресценцию, прямо пропорциональную количеству НЦРпродукта так называемая репортерная флюоресценция.