Терминальные районы хромосом у двух близкородственных видов бурозубок, Sorex granarius и Sorex araneus (Soricidae, eulipotyphla)

• Автор: Минина, Юлия Михайловна
• Шифр специальности: 03.00.15
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2008
• Место защиты: Новосибирск
• Количество страниц: 108 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Теломерные районы.

1.1.1. Структура и состав теломер

1.1.2. Методы определения размера теломер

1.1.3. Размеры теломер у разных видов

1.1.4. Способы поддержания длины теломер.

1.1.4.1. Зависимость длины теломер от активности теломеразы.

1.1.4.2. Альтернативные способы поддержания длине, теломер

1.1.5. Геномная нестабильность при дисфункции теломер
1.1.6. Теломерные повторы в интерстициальных сайтах хромосом.
1.2. Субтсломерные районы хромосом.
1.3. Структурная и функциональная связь между теломерами и ядрышком
1.4. x ii и x объекты для исследования терминальных
районов хромосом.
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1. Материалы.
2.2. Методы
2.2.1. Получение первичных клеточных культур.
2.2.2. Фиксация митотических клеток
2.2.3. Приготовление цитологических препаратов.
2.2.3.1. Приготовление препаратов метафазных хромосом для I.
2.2.3.2. Приготовление препаратов для микродиссекции.
2.2.3.3. Приготовление препаратов фибрилл для I.
2.2.4. Окраска хромосом нитратом серебра на ЯО районы
2.2.5. Микродиссскция метафазных хромосом
2.2.6. Получение меченых проб для I.
2.2.7. I на метафазных хромосомах и фибриллах.
2.2.8. 3 I и иммуноокрашивание.
2.2.9. I.
2.2 Модифицированная I
2.2 ii анализ
2.2 Анализ результатов.
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ.
3.1. Кариотииы x ii и x дифференциальая окраска хромосом I
3.2. Локализация теломерпых повторов на хромосомах x ii
3.2.1. Выявление теломерной ДНК с помощью проб разного происхождения.
3.3. Определение длины теломер на хромосомах x ii
3.3.1. Определение длины теломер на хромосомах x ii с помощью I.
3.3.2. Определение длины теломер на хромосомах x i с помощью i ii анализа.
3.4. Локализация теломерных последовательностей в хромосомах x .
3.5. Определение размера теломер в хромосомах x с помощью модифицированной I
3.6. Теломеры и ЯО районы в хромосомах x i и x .
3.6.1. Локализация теломерной и рДНК на хромосомах x i.
3.6.2. Локализация теломерной и рДНК в интерфазных ядрах x i
3.6.3. Выявление активных ЯО районов на хромосомах x i.
3.6.4. Локализация I8 рДНК и ЯО районов на хромосомах x .
3.7. Изучение структуры длинных теломер на хромосомах x i
3.7.1. Изучение структуры длинных теломер x i с помощью микродиссекционной пробы.
3.7.2. Выявление рДНК в длинных теломерах x i
ЗАКЛЮЧЕНИЕ.
ВЫВОДЫ.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Репликация теломер осуществляется с помощью специального фермента геломеразы, представляющей собой обратную траискриптазу в комплексе с РИКовон матрицей. ДНК теломер находится в комплексе как с рядом специальных факторов, осуществляющих рефляцию длины теломер, так и рядом других факторов, играющих важную роль в функционировании теломер и участвующих, например, в репарации и рекомбинации ДНК . Важную роль теломеры играют в правильном протекании мейоза. Роль этой структуры в протекании мейоза не совсем ясна. Считается, что образование хромосомного букета способствует распознаванию гомологов , . Теломеры участвуют во многих ключевых клеточных процессах, включая регуляцию клеточного цикла, клеточное старение, регуляцию транскрипции генов, находящихся как и субтеломерных, так и в других районах хромосом . Во многом они определяют структуру интерфазного ядра . Уменьшение активности теломеразы и нарушение структуры теломер в соматических клетках человека приводит к хромосомной нестабильности, старению клеток и онкотрансформации , i, i . В настоящее время описан альтернативный механизм поддержания длины теломер, с помощью которого клетки преодолевают ростовой кризис в отсутствии теломеразы и становятся бессмертными. При этом резко меняется длина теломер. Альтернативный механизм основан на рекомбинации теломерных и субтеломерных последовательностей , i, , , . Субтеломсрные районы хромосом также содержат повторенные последовательности, однако в отличие от теломерных канонических повторов это, как правило, смесь разного рода повторенных последовательностей и сегментных дупликаций. Субтсломсры относятся к наиболее пластичным хромосомным районам, харакгеризующимся повышенной частотой сестринских обменов, рекомбинационных и мутационных событий. Их структура и состав непостоянны и могут меняться даже в ходе онтогенеза. Э го свойство субтеломер обуславливает их роль в молекулярной эволюции генома и этиологии достаточного числа врожденных заболеваний человека i . i . Описанные выше свойства теломер и субтеломер послужили основанием к их тщательному изучению. Несмотря на большое количество работ по изучению теломер, подавляющее большинство из них посвящено изучению структуры и функции теломер в нормальных и опухолевых клетках человека. Репликативный кризис, обусловленный подавлением активности геломеразы при дифференцировке клеток, свойственен далеко не всем видам млекопитающих. Сказанное выше относится и к субтсломерам. К их изучению приступили существенно позже, чем к изучению теломер. К настоящему времени подробно изучены субтсломеры лишь в хромосомах человека. При этом не ясно, в какой степени особенности субтеломерных районов хромосом человека свойственны субтсломерам хромосом других видов млекопитающих. Анализ организации терминальных районов хромосом разных видов млекопитающих из разных отрядов позволит расширить наши представления о возможной структуре и функционировании этих хромосомных районов и позволит выяснить механизмы, лежащие в основе как стабильности, так и эволюционной лабильности кариотипов. Такой распространенный вид эволюционных перестроек как Робертсоновские слияния, очевидно, связан со структурой герминальных районов хромосом, а Робертсоновские распады требуют восстановления нормальной структуры разорванных концов хромосом. В настоящем исследовании была изучена структура терминальных районов хромосом у двух близкородственных видов бурозубок бурозубки иберийской Богех Богех агапеий БопсШае, ЕиНро1урЫа. Кариогипы этих видов составлены из практически одинаковых хромосомных плеч, однако отличаются числом акроцентрических и метацснтрических хромосом. Главенствующую роль в их кариотипической эволюции сыграли Робертсоновские перестройки, обусловленные слиянием акроцентриков и распадом мстацентрических хромосом. Принимая во внимание тот факт, что эти видыблизнецы дивергировали недавно, мы надеялись выявить следы недавних эволюционных преобразований, связанных с терминальными районами хромосом. Цели и задачи исследования.