Общий генетический контроль терминации трансляции и клеточного цикла у дрожжей Saccharomyces cerevisiae

• Автор: Борхсениус, Андрей Сергеевич
• Шифр специальности: 03.00.15
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2000
• Место защиты: Санкт-Петербург
• Количество страниц: 127 с. : ил.

Оглавление.

Обозначения и сокращения.

Введение

1. Интеграция контроля трансляции и клеточного цикла у эукариот

обзор литературы

1.1. Общая характеристика контроля клеточною цикла.

1.2. Трансляция и инициация клеточного цикла.

1.3. Трансляция и цитоскелет.

1.4. Факторы терминации трансляции 3 и роль в контроле

трансляции и других клеточных процессов.

1.5. Постановка задачи.

2. Материалы и методы
2.1. Штаммы и плазмиды, использованные в работе
2. Штаммы дрожжей vii и бактерии
ii i
2.1.2. Плазмиды
2.2. Среды и условия культивирования.
2 3 Генетические методы.
2 3.1. Стандартные генетические методы.
2 3 2. Тестсистема оценки кигтотической стабильности хромосом
2 3 3. Получение и анализ рецессивных супрессоров и и
доминантных кодонспецифичных супрессоров.
2.3.4. Анализ митотической стабильности плазмиды 5
2.3.5. Селективная система цитодукции Качественный тост на
цитодукцию
2.4. Молекулярнобиолошческие методы
2.5. Методы микроскопнрования.
2.6. Статистическая обработка результатов.
3. Результаты.
3.1. Определение стадии клеточного цикла, блокируемой при
инактивации или .
3.1.1. Определение терминального фенотипа.
3 1.2. Оценка возможности гибридизации летальных аскоспор с
клетками противоположного типа спаривания.
3.2. Влияние супрессорных мутаций и на стабильность
хромосом
3.2.1. Стабильность добавочной копии хромосомы 1 у мутантов
и .
3.2.2. Стабильность центромерной плазмиды у поздних мутантов
3.2.3. Чувствительность к беномилу у муташов с нормальной или
пониженной стабильностью хромосом.
3.2.4 Супрессия и чувствительность к беномнлу как плейотропные
проявления мутаций в гене .
3.2.5. Влияние доминантных супрессоров на стабильность добавочной
копии хромосомы 1 и чувавительность к беномилу
3.3. Характеристика мутаций, нарушающих кариогамию и
взаимодействующих с мутациями хир, и Iфактором.
3.3.1. Антисупрсссорный эффект у мутантов i. Анализ
косегрегации признаков и
3.3.2. Нонсенссупрессия у мутантов . обусловленная
мутацией 3.
3.3.3. Экспрессия у мутантов .
3.3 4, Взаимодействие мутации I22 и прнонных форм
3.3.4.1 Взаимодействие мутации I22 и фактора
3.3.4.2. Взаимодействие мутации 2 и ЕТАфактора
3.4. Изучение прнонизании продукта мутантной аллели
.
3.4.1. Получение штаммов, содержащих аллель .
3.4.2. Индукция Iфактора в реципиенте 9.
3.4.3. Нестабильность Р.1ЛЛ9.
3.4 4. Агрегация 6.
4. Обсуждение.
Выводы.
Благодарности
Список литературы


Также мы показали, что рецессивные супрессорные мутации или снижают митотическую стабильность хромосом, повидимому, нарушая их расхождение в анафазе митоза. Мы исследовали взаимодействие мутаций и или модифицированного приоцитированного с мутациями, приводящими к повышенной частоте цигодукцин мутациями Ис В результате, нами впервые выявлены мутации , одновременно нарушающие кариогамию и подавляющие супрессорный эффект нили 4. Мы изучили влияние делецин 0,0 кодонов , нарушающей взаимодействие и i, на индукцию и поддержание Iфактора и показали, это эта деления подавляет способность прионной формы к сегрегации в ряду клеточных делений. Мы предполагаем, что взаимодействие 8ир и Яир или, по крайней мере, Яир с белками цитоскелета необходимо для компартментализации трансляции в клетке и пространственного контроля клеточного цикла В этом случае, нарушение белокбелковых взаимодействий 8ир с элементами цитоскелета может приводить к дестабилизации аппарата трансляции с одной стороны, и цнтоскелстных структур, с другой. Кроме того, можно предположить, что появление 5фактора представляет собой побочный результат нормального процесса олигомеризации элементов цигоскслста. Бир и цитоскелетных белков иили ошибками их взаимодействия. Работа выполнена в лаборатории физиологической генетики Биологического НИИ СПбГУ. Отдельные эксперименты выполнены в лаборатории микологии инта им. Обтай характеристика контроля клеточного цикла. Клеточный цикл это совокупность строго упорядоченных процессов, ведущих к дупликации компонентов клетки, их сегрегации в разные части клетки и последующему делению клетки . Точное воспроизведение информации в ряду клеточных поколений требует временной и пространственной координации отдельных событий, контролирующихся относительно независимыми ферментативными комплексами репликация ДНК, конденсация хромосом, удвоение центросом и образование веретена деления и т. РНК и белка. Обеспечение такой координации, то есть, решение вопроса, КАК проходить клеточный цикл, является одним из аспектов его генетического контроля. Другой аспект контроля клеточного цикла решение вопроса, КОГДА инициировать клеточные деления, то есть выбор между различными программами развития клетки в зависимости от ее размера, наличия питательных веществ и от других внешних сигналов i . Генетический анализ мутантов по клеточному циклу мутантов , от ivii у дрожжей vii и i позволил к началу х годов определить функциональновременную зависимость между отдельными событиями хлеточного цикла i , . , а. В рамках этой теории рассматриваются два механизма контроля клеточного цикла 1 механизм, активирующий последовательную сменустадий клеточного никла часы клеточного цикла i 2 механизм, контролирующий точность прохождения отдельных этапов клеточного цикла i i. Последовательная смена стадий клеточного цикла контролируется консервативным среди эукариот семейством серинтреонин протсинкииаз i i гомологов . . Активация происходит при взаимодействии с нестабильными белками циклннами Сус см . По времени функционирования выделяют четыре группы циклипов . Е, А, В у высших эукариот, С1пЗ, С1п1,2, С1Ь5,6, С1Ы4 у . рис. Активация комплекса 4 6. 3 у . или точке ограничения ii i сталии i в ответ на воздействие сигналов, инициирующих клеточные деления . ii , , . В этот момент происходит детерминация судьбы клетки После активации комплекса 3 трансдстсрминация клетки уже невозможна и она способна только останавливать клеточный цикл на той или иной стадии. Комплекс 2 2 необходим для перехода i, в частности для инициации репликации ДНК 2 56 для прохождения стадии .