Характеристика молекулярной патологии в увеальных меланомах

• Автор: Манохина, Ирина Константиновна
• Шифр специальности: 03.00.15
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2009
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 87 с. : 17 ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМЫХ СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Характеристика увеальной меланомы

1.1.1 Клиническая характеристика заболевания

1.1.2 Клиникопатологические особенности и их прогностическая значимость

1.2 Хромосомные нарушения и идентификация генов, вовлеченных в канцерогенез

1.2.1 Увеальная меланома и меланома кожи

1.2.2 Хромосомные перестройки в УМ

1.2.2.1 Потеря хромосомного материала в увеальных меланомах

1.2.2.2 Определение избыточного хромосомного материала в УМ
1.2.3 Идентификация генов, вовлеченных в канцерогенез
1.2.3.1 Анализ потери гетерозиготиости в УМ
1.2.3.2 Поиск мутаций
1.2.3.3 Анализ метилирования в УМ
1.2.3.4 Изучение профиля экспрессии генов
1.3 Ассоциации молекулярных нарушений с клиникопатологическими факторами
1.4 Разработка ДНКдиагностических протоколов
1.4.1 Определение циркулирующих опухолевых клеток в общем кровотоке
1.4.2 Молекулярногенетическое исследование операционного материала
1.4.3 Техника тонкоигольной аспирационной биопсии
РЕЗЮМЕ
Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1 Клинический материал
2.2 Забор крови и операционного материала
2.3 Выделение геномной ДНК
2.4 Анализ аллельного дисбаланса
2.5 Аллельспецифическая амплификация мутантного аллеля ВКАР
2.6 Анализ метилирования метолом метилчувствительной ПЦР
2.7 Электрофорез в ПААГ
2.8 Ультратонкое окрашивание нитратом серебра
2.9 Программное обеспечение
2. Статистическая обработка
Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
3.1 Спектр молекулярных нарушений в увеальных меланомах
3.1.1 Анализ потери гетерозиготности в УМ
3.1.2 Анализ метилирования в УМ
3.1.3 Поиск мутаций
3.1.4 рофиль молекулярной патологии в исследованных образцах УМ
3.2 Анализ ассоциаций молекулярногенетических нарушений в увеальных меланомах с клиникопатологическими факторами и факторами прогноза
3.3 Спектр молекулярной патологии в УМ и меланоме кожи
3.4 Разработка системы ДНКмаркеров для диагностики увеальной меланомы
3.5 Диагностика молекулярных маркеров УМ в биоптатах
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Целыо настоящей работы является анализ молекулярногенетических изменений, ассоциированных с развитием увеальной меланомы и изучение потенциала их использования в клинической практике для расширения возможностей диагностики, а также прогнозирования течения заболевания. Исследовать аллельное состояние микросателлитных маркеров в локусах геновсупрессоров опухолевого роста и хромосомных районах, наиболее часто делегируемых в злокачественных опухолях. Определить статус метилирования промоторных районов ряда геиовсупрессоров опухолевого роста. В увеальных меланомах провести анализ молекулярных нарушений в генах и хромосомных районах, наиболее часто повреждаемых в меланомах кожи. Определить ассоциации молекулярногенетических нарушений с клиникопатологичес к и м и дан н ы м и. Оценить возможность использования тонкоигольной аспирационной биопсии для скрининга молекулярных нарушений. Настоящая работа является первым широкомасштабным молекулярногенетическим исследованием увеальных меланом на территории Российской Федерации и направлена на поиск молекулярных маркеров увеальных меланом с перспективой создания комплексной системы диагностических и прогностических маркеров, позволяющих врачу сделать правильный выбор в отношении тактики лечения и дальнейшего наблюдения пациентов. Проведено комплексное молекулярногенетическое исследование, включающее определение не только ранее описанных молекулярных нарушений, но и изучение состояния генов и сигнальных каскадов, связанных с регуляцией клеточного цикла, клеточной прогрессией и дифференцировкой. Выявлено наличие характерных для увеальной меланомы генетических и эпигенетических нарушений потеря одной копни хромосомы 3 моносомия 3, делеции 1р и 8р, метилирование ЯАПЛ. В исследовании обнаружены ассоциации моносомии 3 с характеристиками агрессивного течения меланомы, такими как эпитслиоидный клеточный тип, цилиарная локализация и пигментация опухоли. Аллельные делеции 1р не могут рассматриваться как патогномоничное нарушение в увеальных меланомах, однако определена их достоверная ассоциация с экстрасклеральной инвазией опухоли, снижающей выживаемость пациентов. Метилирование гена ЯА8Я1А является неслучайным изменением, обнаруженным в увеальных меланомах его отсутствие подтверждено в условнонормальной хорнондее тех же пациентов. Также определена его ассоциация с отсутствием аллельных потерь по маркерам ЯАР1А в хромосоме 3. Установлено, что основной спектр молекулярных нарушений, характерный для меланомы кожи, не играет важной роли в запуске патологических процессов в увеальной меланоме. Проведено комплексное молекулярногенетическое исследование 7 пациентов с диагнозом первичная увеальная меланома. Определена ассоциация структурных и количественных нарушений в хромосоме 3 и 1р с клиникоморфологическими характеристиками и факторами прогрессии опухоли, что позволит использовать анализ этих нарушений в качестве маркеров прогрессии на различных стадиях УМ. Показано, что тонкоигольная аспирационная биопсия ТИАБ представляет собой эффективный способ получения материала для генетического анализа пациентов с увеальной меланомой. Результаты, полученные в представленной работе, легли в основу разработки системы молекулярных маркеров УМ в дополнение к применяемым диагностическим методам гистологическому и биохимическому. Внедрение таких систем расширяет возможности диагностики, в том числе дифференциальной, а также позволяет определить риск метастазирования опухоли и выбрать тактику терапии. Результаты исследования были представлены на ежегодных Европейских конференциях по генетике человека в г. Ницца, Франция и г. Барселона, Испания, на конгрессе Международного общества онкоофтальмологов в г. Сиена, Италия, Всероссийской научнопрактической конференции Современные технологии в дифференциальной диагностике и лечении внутриглазных опухолей в г. Москва, конференции молодых ученых Фундаментальные науки и прогресс клинической медицины в году Москва. Результаты диссертационной работы отражены в печатных работах соискателя, в том числе 3 статьи опубликованы в журналах, рекомендованных ВАК МОН РФ соискателям ученой степени кандидата медицинских наук.