Молекулярно-цитогенетическое исследование уровня анеуплоидии в интерфазных ядрах клеток человека

• Автор: Тимошевский, Владимир Анатольевич
• Шифр специальности: 03.00.15
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2002
• Место защиты: Томск
• Количество страниц: 145 с. : ил

СОДЕРЖАНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

3.2. ПРИМЕНЕНИЕ ОДНОЦВЕТНОЙ ГИБРИДИЗАЦИИ I ДЛЯ АНАЛИЗА АНЕУПЛОИДИИ В ИНТЕРФАЗНЫХ КЛЕТКАХ БОЛЬНЫХ С ЧИСЛОВЫМИ НАРУШЕНИЯМИ ХРОМОСОМ
3.3. ПРИМЕНЕНИЕ ДВУХЦВЕТНОЙ I ДЛЯ ОЦЕНКИ АНЕУПЛОИДИИ В КЛЕТКАХ ЛИЦ, НЕ ИМЕВШИХ КОНТАКТА С ВРЕДНЫМИ ВНЕШНЕСРЕДОВЫМИ АГЕНТАМИ
3.4. ЧАСТОТА АНЕУПЛОИДИИ В СОМАТИЧЕСКИХ КЛЕТКАХ ЛИЦ, ПОДВЕРГАЮЩИХСЯ ВОЗДЕЙСТВИЮ ВРЕДНЫХ ВНЕШНЕСРЕДОВЫХ ФАКТОРОВ.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ.
ВЫВОДЫ.
ЛИТЕРАТУРА


Оцени ть частоту анеуплоидии по половым хромосомам и ряду аутосом набора в соматических клетках индивидов, подвергающихся в процессе профессиональной деятельности комплексному воздействию вредных факторов ядернохимического производства. Изучить влияние процесса культивирования клеток на выход числовых хромосомных нарушений у лиц, имевших и не имевших контакта с вредными внешнесредовыми агентами. Сравнить частоту анеуплоидии в соматических клетках лиц, подвергающихся воздействию комплекса факторов ядернохимического производства и контрольных индивидов с целью оценки возможного анеугенного эффекта вредных внешнесредовых факторов. Провести корреляционный анализ взаимосвязи между выходом структурных мутаций хромосом и частотой клеток с числовыми хромосомными нарушениями у лиц, подвергшихся профессиональному воздействию неблагоприятных внешнесредовых факторов. На основании полученных результатов по особенностям индукции анеуплоидии в интерфазных ядрах дать обоснование новой тестсистемы для оценки влияния мутагенных факторов среды на человека. Впервые получены данные о разрешающих возможностях интерфазного РБНанализа для детекции аиеуплоидии в клетках человека. Определена частота спонтанной анеуплоидии по половым хромосомам и ряду аутосом набора и пределы ее вариабельности в клетках крови здоровых лиц, не подвергавшихся воздействию внешнесредовых мутагенных агентов. Установлено, что частота спонтанной гипоплоидии близка к частоте гиперплоидии. Этот факт свидетельствует о том, что основным механизмом индукции анеуплоидии в лейкоцитах является нерасхождение хромосом, по сравнению с их отставанием в ходе клеточного деления. Показано, что у здоровых индивидов половые хромосомы X и У, в отличие от аутосом, более часто теряются в процессе культивирования клеток. Впервые с помощью молекулярноцитогенетического анализа исследован уровень числовых хромосомных нарушений в интерфазных ядрах клеток работников крупного ядернохимического комплекса. Установлено, что некультивированные клетки этих лиц более часто теряют Ухромосому, по сравнению с контролем, а культивированные клетки уже после первого цикла репликации ДНК обнаруживают увеличенную частоту анеуплоидии. Этот результат свидетельствует об экспрессии накопленных премугационных повреждений аппарата сегрегации хромосом, индуцированных вредными экзогенными факторами, в процессе в клеточного деления. Предложены собственные критерии оценки сигналов гибридизации центромероспецифичных ДНКзондов с хромосомными мишенями для анализа анеуплоидии в интерфазных клеточных ядрах. Впервые достоверно показано, что мутагенное воздействие вредных внешнесредовых агентов на человека может быть выявлено по повышению уровня анеуплоидных клеток в культуре через 1 цикл репликации ДНК, что принципиально важно для практического применения тестов на анеугенность. Поскольку интерфазный РБНанализ оказывается достаточно чувствительным для детекции анеугенного эффекта, то полученные данные могут быть положены в основу тестсистемы оценки числовых хромосомных нарушений в клетках человека при оценке экзогенных мутагенных воздействий и при эндогенных хромосомных нарушениях. В клетках периферической крови отдельные хромосомы набора, отличающиеся размером и положением центромеры, случайным образом вовлекаются в процесс спонтанного и индуцированного анеуплоидогенеза. Частота спонтанной гипоплоидии близка к частоте гиперплоидии и этот факт свидетельствует о том, что основным механизмом индукции анеуплоидии является нерасхождение хромосом, по сравнению с их отставанием в процессе клеточного деления. Некультивированные лейкоциты здоровых лиц, не подвергавшихся вредным внешнесредовым воздействиям, статистически не отличаются от культивированных клеток этих же индивидов по общей частоте числовых нарушений хромосом, однако в культивируемых клетках средние значения и пределы вариабельности частоты анеуплоидии проявляют заметную тенденцию к повышению, по сравнению с некультивированными. Половые хромосомы X и У, в отличие от аутосом, более часто теряются в процессе культивирования клеток.