Эффективность образования сестринских хроматидных обменов при индукции в клетках млекопетающих моноаддуктов и межнитевых сшивок ДНК

• Автор: Евграфов, Олег Вадимович
• Шифр специальности: 03.00.15
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1984
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 174 c. : ил

Оглавление
Введение .

Часть I. Обзор литературы. .

Глава I. Сестринские хрокатидные обмены .

1.1. Существуют ли спонтанные сестринские хроматиднне обмены .

1.2. Роль бромдезоксиуридина в образовании сестринских хроматидных обменов

1.3. Первичные повреждения ДНК, индуцирующие сестринские хроматидные обмены .

1.4. Репликация и образование сестринских хроматидных обменов.

1.5. Участие репарационных процессов в образовании сестринских хроматидных обменов

1.6. Модификаторы процесса образования сестринских хроматидных обменов

1.7. Модели механизмов образования сестринских хроматидных обменов

Глава 2. Псоралены как ДНКповрездающие агенты
2.1. Свойства псораленов, не активированных УФизлучением.
2.2. Фотохимическая реакция псораленов с ДНК .
2.3. Биологическое действие активированного светом псоралена
2.4. Мутационное действие псораленов .
Часть II. Собственные исследования
Глава 3. Материалы и методы .
3.1. Объекты исследования
Стр.
3.2. Фиксация и приготовление препаратов
3.3. Дифференциальное окрашивание хромосом
3.4. Анализ распределения сестринских хроматидных обменов по длине хромосомы
3.5. Индукция моноаддуктов и мешштевнх сшивок в ДНК i vi и в ДНК клеток, культивированных i vi
3.6. Выделение ДНК
3.7. Гидролиз ДНК.
3.8. Спектрофотометрия .
3.9. Измерение радиоактивности .
3 Тонкослойная хроматография . .
3 Электронная микроскопия ДНК в тотально денатурирующих условиях.
3 Определение дополнительного синтеза ДНК, индуцированного моноаддуктами
3 Математическая обработка
Глава 4. Экспериментальная часть.
4.1. Исследование фотохимических реакций 8метоксипсоралена с ДНК.
4.1.1. Изучение динамики образования моноаддуктов ДНК.
4.1.2. Определение параметров фотореакцш трансформации моноаддуктов в межнитевые сшивки
4.2. Изучение эффективности моноаддуктов и межнитевых сшивок ДНК в индукции СХО.
Стр.
4.3. Зависимость частоты образования СХО от величины мутагенной нагрузки .
4.4. Образование СХО в ряду клеточных поколений . 9
4.5. Феномен изоокрашивания 5
4.6. Исследование распределений сестринских хроматидных обменов
4.6.1. Распределение сестринских хроматидных обменов по клеткам
4.6.2. Сравнение распределений спонтанных, индуцированных моноадцуктами и мешитевыш сшивками ДНК сестринских хроматидных обменов по длине первой хромосомы клеток китайского хомячка
Глава 5. Заключение1
Выводы.
Список литературы


Для них характерна наибольшая степень индукции СХО, наблюдаемая при малых дозах мутагена. ДНК при обработке агентами из разных классов. Хотя неясно, почему разные типы первичных повреждений так различаются в способности индуцировать сестринские хроматидные обмены, но можно предположить, что это обусловлено расхождением в механизмах образования схо на базе первичных повреждений различных типов. В связи с этим возникает специальный вопрос о существовании спонтанных СХО, возникающих в отсутствие первичных повреждений ДНК. I.I. Существуют ли спонтанные сестринские хроматидные обмены Почти все методы, использующиеся для регистрации сестринских хроматидных обменов, с неизбежностью включают в себя обработку клеток веществами, которые могут сами индуцировать СХО. Поэтому существование спонтанных СХО требует специальных доказательств. Результаты исследований в этой области противоречивы. , i, , так и в системах i viv цСе . , . Аналогичные данные были получены и в случае применения тимидина для дифференцировки хроматид , . Однако существуют и работы, в которых обнаружено существенное уменьшение количества СХО при снижении концентрации БУдР в области малых доз в клетках СНО , , и даже снижение ДО нуля В клетках i i . Возможно, впрочем, что этот вид представляет собой исключение с нарушенным механизмом спонтанных обменов. В пользу этого предположения, по мнению Шонберга, говорит атипичная ориентация интерфазных хромосом БгозорЦИа те1апоцазЪег, ЧТО монет свидетельствовать об отсутствии спаривания гомологов и митотического кроссинговера, механизмы которого, возможно, обусловливают также и образование СХО всЬопЬеге, . Ряд исследователей считает, что существование спонтанных сестринских хроматвдных обменов доказывает образование дицентрических хромосомных г. СХО, как это зафиксировано, например, в работе Бревена и Пикока вчшеп, Роасоск, . Однако и это не является надежным доказательством существования спонтанных сестринских хроматидных обменов, так как механизмы образования СХО в кольцевых хромосомах могут принципиально отличаться от таковых в линейных хромосомах сатз. Таким образом, вопрос о существовании спонтанных СХО остается открытым. Ясно, что в формировании СХО определенную роль играет БУдР, использующийся в большинстве современных методов их регистрации. Рассмотрит, подробнее значение этого аналога тимидина в образовании индуцированных и неиндуцированных СХО. БУдР в ДНК i, , . Анализ СХО, образующихся в клетках больных, страдающих синдромом Блюма, показал, что их частота повышается в раз, когда репликация протекает на ДНК, содержащей БУдР, при этом в культуральной среде его не содержалось iii . Это также указывает на роль в образовании СХО молекул БУдР, инкорпорированных в геном, по крайней мере в этом патологическом случае. Однако было показано также, что часть обменов, возникающих за счет БУдР, не связана с его количеством в ДНК, а обусловливается концентрацией его в ростовой среде, и выход СХО может уменьшаться при добавлении в эту среду дезоксицитидина vi . Механизм этого явления не известен, однако можно предположить, что БУдР, находящийся в культуральной среде, воздействует на репликацию, нарушая баланс пула предшественников ДНК vi . Сходные данные получены и для тимидина. Эта гипотеза нашла свое частичное подтверждение в работе Перри реггу, , который обнаружил, что добавление тимидина в культуральную среду вызывает дозовозависимое повышение уровня СХО. Этот эффект также полностью снимался дезоксицитидином. При этом было замечено, что тимидин может увеличивать количество СХО, индуцированных нитрозогуанидином. Окей оскеу, 8I обнаружил, что при увеличении концентрации БУдР снижается количество СХО,индуцированных метилметансульфонатом. Для некоторых других мутагенов эта тенденция не наблюдалась или была выражена в меньшей степени. Из приведенных данных следует, что БУдР может модифицировать процесс образования СХО, индуцированных другим агентом. С .