Молекулярно-генетическое исследование экспрессии гена Est-S Drosophila virilis в трансгенных линиях Drosophila melanogaster

• Автор: Фридман, Марина Владиславовна
• Шифр специальности: 03.00.15
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2002
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 95 с. : ил

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Особенности у .viii, а также некоторых орто и пар алогичных генов у других видов дрозофилнд

Особенности и предпологаемые функции белка . viii и бел ка 6 .

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Использованные виды и линии i

Оборудование

Методы исследования

РЕЗУЛЬТАТЫ
ОБСУЖДЕНИЕ
ВЫВОДЫ
БЛАГОДАРНОСТИ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Были использованы конструкции, со дерле ащие в качестве маркера ген iii i V. Важной вспомогательной задачей была разработка простых и эффективных методов генетического анализа трансформантов и выведения линий, содержащих конструкцию в известной хромосоме. Использование линий с различной хромосомной локализацией позволяло нам исключить эффект положения. Также было существенно добиться того, чтобы линии содержали одну инсерцию на гаплоидный геном, чтобы исключить дополнительные регуляторные взаимодействия. Создать генетическую схему анализа трансформантов и последующего выведения линий, который позволил бы просто, быстро и достоверно локализовать инсерции на хромосомах и воспользоваться этой методикой для выведения линий трансгенных мух с различной локализацией инсерции. Исследовать трансгенные линии . ii. Выяснить, какое влияние на регуляцию транскрипции оказывают 5регуляторные области гена , прежде всего области проксимального и дистального промотора. Было показано, что наличие дистального промотора необходимо для экспрессии гена в семявыносящих луковицах, а наличие вышележащих последовательностей для подавления его экспрессии в других органах и тканях. Подобная негативная регуляция для этого гена ранее описана не была. Разработанная схема генетического анализа трансформантов и выведения линий трансгенных мух пригодна для системы трансформации, использующей вектор и хслперную плазмиду с дефектным Рэлементом. Она может быть использована в практических целях для получения максимального числа линии трансгенных мух с различной и известной хромосомной локализацией инсерции. Гсн по своей первичной структуре близок к другим генам рэстераз дрозофилид неспецифические эстсразы, предпочтительно расщепляющие не а, а рнафтилацетат. Здесь и далее мы будем обозначать эстеразные гены как , 6, продукты соответствующих локусов как , б. В свою очередь, все эти гены относятся к мультигенному семейству сериновых эсгераз. и его продукта целесообразно рассмотреть на фоне более широкого круга данных, касающихся эстераз дрозофилид. Для того чтобы в них было легче разобраться, приведм на рис. i. Кроме того, ряд упомянутых работ был посвящн именно изучению экспрессии р эстеразных генов у трансгенных мух других видов. В других работах вопрос о роли в экспрессии р эстазных генов различных регуляторных участков разрешался за счт использования гибридных конструкций с геном р галактозидазы. Будет интересно сравнить эти данные с нашими, которые получены теми же методами. Рассмотрим сначала данные по различным эстеразным генам и особенностям их экспрессии, а затем по особенностям наиболее изученных белков . . и их функциональной значимости. ОСОБЕННОСТИ ГЕНА У . . Ген эстеразы был локализован Корочкиным и Евгеньевым в районе 25 2й хромосомы . Корочкин Л. И., Евгеньев М. Б. с использованием известных мутаций, инверсии, гетерохроматиновых вставок, замещения сегментами хромосомы . Ген был клонирован в 2, после чего данная локализация была подтверждена Ениколопов Г. Н. , , iv . . , . Рядом с этим геном находится ген X , кодирующий другую нетканеспецифическую эстеразу, а следом за ним ген, кодирующий кукол очную эстеразу . Нуклеотидная последовательность первых двух генов расшифрована, а то, что рядом находится третий ген, показано блотанализом по Саузерну. Примечательно, что гены а и р эстераз находятся у . Рэстеразы на 9 ед. Анализ первичной структуры гена эстеразы показал, что с него может считываться мРНК п. У концевых добавлений, кодирующая белок в 2 а. Ожидаемая молекулярная масса белка 0, имеются два потенциальных участка гликозилирования по аспарагину в позициях 0 и 6. В белке присутствуют 8 остатков цистеина в позициях , , , 0. Ген содержит два экзона в п. достаточно характерна и для других Рэстеразных генов. Весьма интересно строение 5концевой части гена. На расстоянии 2 п.