Дифференциация популяций человека и животных по генам главного комплекса гистосовместимости

• Автор: Удина, Ирина Геннадьевна
• Шифр специальности: 03.00.15
• Научная степень: Докторская
• Год защиты: 2003
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 252 с. : ил

С тем, чтобы уменьшить процент искажений, которые могут быть вызваны применением разных панелей антисывороток, в обобщенном анализе мы использовали крупные специфичности, пе подразделяя отдельные антигены на субспецифичности, например, в случае НЬАА9, А, В и некоторых других антигенов. Типирование ВоЬАА антигенов класса 1 ГКГ проведено в выборках эйрширского п9 и чернопестрого скота п2 отечественной селекции из подмосковных хозяйств с помощью микролимфоцитотоксического теста ЮБзтеуегМеп ег а. Ытс1 сХ а1. Исследование проведено на базе Московской государственной академии ветеринарной медицины и биотехнологии им. К.И. Скрябина при участии Орловой А. Р., Карамышевой Е. Е. и Павленко С. П Применяли моноспецифичныс и олигосиецифичные антисыворотки МБи Эрнст и др. Удина и др. Антисыворотки получены в лаборатории гемобластозов и иммуномодуляторов Московской государственной академии ветеринарной медицины и биотехнологии им. К.И. Скрябина с помощью инъекций суспензии лейкоцитов, а также имплантацией кусочков кожи с последующими процедурами направленой абсорбции Слепченко и др. Выделение ДНК. Образцы мьппц предварительно измельчали, растирали в жидком азоте и просушивали на воздухе. Проведение полимеразной цепной реакции. Полимеразную цепную реакцию ПЦР проводили в объеме мкл в реакционной смеси, содержащей буфер для амплификации х мМ трисНС1 8,8, мМ . М каждого нуклеотида, ,5 мМ , нг смеси праймеров, 0 нг геномной ДНК, 1 единица активности полнмеразы. Амплификацию проводили в термоциклере РТС0 фирмы США РТС0 или фирмы iРоссия 4 в следующем режиме денатурация при С с. С с. С с циклов. Финальный синтез при С в течение минут. Типирование аллелей ГКГ класса I. Гипирование аллелей 3 проводили методом ПЦРПДРФ. Использовали ПЦР с праймерами , 1 2 Табл. З для амплификации экзона 2 гена, с последующим рестрикционным анализом ПЦРпродукта с рестриктазами , Нас 1 и X v i . Табл. IБ Приложение, Рис. Приложение. Анализ ПЦРПДРФ полиморфизма проводили в стандартных условиях с применением рестриктаз и НаеШ фирмы , Литва, а также X , результаты учитывали с помощью электрофореза в 6 9 акриламидном геле Рис. Приложение. Использовали ПЦР с аллельспецифичными праймерами и V, которые позволяют выявлять аллели, кодирующие аминокислотные последовательности в положении и V, VV и VV в положении V X . Турковой С. О., Карамышевой Е. Сулимовой Г. Е., Шайхаевым Г. О., Соколовой С. С. Сулимова и др. Эрнст и др. Удина и др. Изучение нуклеотидных последовательностей экзона 2 генов класса II ГКГ зубра и бизона. Для изучения аллелей генов класса II ГКГ i3 и ii3 использовали гетерологичную ПЦР с теми праймерами, что и в случае совместно с Шайхаевым Г. О. Табл. Полиморфизм экзона 2 гена Ii3 изучен методом ПЦРПДРФ с использованием рестриктаз и I i . Рис. Табл. А и 1Б. Приложение. Отдельные последовательности экзона 2 гена i3 были секвенированы. Для изучения гена класса II ГКГ применяли гетерологичную ПЦР с теми же праймерами, что и для 3. Полиморфизм амплифицированной нуклеотидной последовательности экзона 2 изучали с помощью прямого ссквенирования ПЦРпродукта с набором реагентов i . Изучение полиморфизма геномов пород лошадей методом анализа вариабельности микросателлитных локусов. Анализ вариабельности двух микросателлитных локусов, содержащих тетрануклеотидные повторы проведен в пяти породах лошадей совместно с Костюченко М. Табл. Изучение нуклеотидных последовательностей экзона 4 каппаказеина КРС, зубра и лося. Для изучения полиморфизма экзона 4 гена каппаказеина, который определяет аллели гена, применяли праймеры , разработанные для КРС Табл. ГЩРФанализом. В работе применяли гетерологичную ПЦР для изучения нуклеотидных последовательностей экзона 4 гена каппаказеина зубра с те ми же праймерами. Изучение гена каппаказеина у зубра проводили совместно с Бадагуевой Ю. Н., Сипко Т. П. и Сулимовой Г. Характеристика праймеров и изученных фрагментов генома с помощью ПЦР, ПЦРПДРФ и секвенирования, а также исследованных объектов. Экзон 2 4 1 1ЩР1ДРФ. Экзоп 2 5 ПЦР айрширская. МР 1 8 3 4 8 4 ПЦР. ГВС1 петля i 9 4 ПЦР. Примечание. V i . X . Удина и др. Сулимова и др. Удина и др. Ii . Для амплификации экзона 4 лося и косули применяли праймеры, разработанные на основе соответствующей нуклеотидной последовательности КРС с отдельными заменами Табл.