Механизмы образования секрета в молочной железе

• Автор: Марков, Александр Георгиевич
• Шифр специальности: 03.00.13
• Научная степень: Докторская
• Год защиты: 2000
• Место защиты: Санкт-Петербург
• Количество страниц: 337 с. : ил.

Оглавление
Введение

Глава 1 Основные объекты и методические приемы,

используемые в диссертации

1.1 Объекты исследований

1.2 Радиоиммунное определение окситоцина в крови самок

1.3 Введение радиоактивной метки и измерение

радиоактивности

1.3.1 Авторадиографическое исследование включения Н

лейцина в секреторные клетки молочной железы мышей

1.3.2 Измерение радиоактивности образцов жидкостным

сцинтилляционным методом
1.3.3 Измерение радиоактивности фракции цитозольных белков
1.4 Электромеханический способ регистрации сократительной
реакции миоэпителиальных клеток альвеол молочной железы
1.5 Электрофизиологические методики изучения функций
секреторных клеток альвеол молочной железы
1.5.1 Регистрация трансэпителиальной разности потенциалов в
альвеолах молочной железы мышей
1.5.2 Регистрация трансэпителиальной разности потенциалов в
молочной железе коз
1.5.3 Измерение трансэпителиального электрического сопротивления в альвеолах молочной железы мышей
1.6 Измерение давления в молочной железе мышей и коз
1.7 Исследование выделения белка из эксплантатов ткани
молочной железы
1.8 Изучение выделения молока из молочной железы коров
Состав растворов и концентрации физиологически активных веществ
Статистическая обработка результатов исследований
Особенности процесса вскармливания потомства у животных с незначительной по объему емкостной системой
Литературные предпосылки
Специфические методические особенности экспериментов
Наблюдение за поведением самок и детенышей в период кормления
Определение продолжительности кормлений и перерывов между ними
Поведение мышат при сосании
Определение концентрации окситоцина в крови самок Регистрация динамики рефлексов выведения молока Измерение веса потомства Включение Н3лейцина в ткань молочной железы Результаты исследований
Изучение продолжительности кормлений и перерывов между ними у мышей
Особенности поведения детенышей при сосании. Уровень окситоцина в крови самок при кормлении потомства Изучение динамики рефлексов выведения молока Изменение веса мышат при различной продолжительности кормления
Сравнение интенсивности включения Н3лейцина в ткань молочной железы мышей через различные интервалы после прекращения кормления Заключительные замечания
3.
3.2.
3.2.
3.
3.3.
3.3.
Исследование влияния окситоцина на функции секреторных и миоэпителиальных клеток молочной железы
Литературные предпосылки
Специфические методические особенности экспериментов
Оценка количества Н3лейцина в секреторных клетках и ткани молочной железы мышей при действии окситоцина Регистрация сократительной реакции миоэпителиальных клеток молочной железы мышей
Регистрация сократительной реакции миоэпителиальных клеток молочной железы мышей при многократном применении окситоцина
Регистрация трансэпителиальной разности потенциалов и давления в молочной железе коз Результаты исследований
Влияние окситоцина на внутриклеточный транспорт Н3лейцина в секреторных клетках молочной железы мышей Исследование сократительной реакции миоэпителиальных клеток молочной железы мышей при аппликации окситоцина
Сократительная реакция миоэпителиальных клеток молочной железы мышей при многократном применении окситоцина
Влияние ручного доения и окситоцина на трансэпителиальную разность потенциалов и давление в молочной железе коз Заключительные замечания
Роль катехоламинов в регуляции функций секреторных и миоэпителиальных клеток молочной железы
4.
4.2.
4.2.
4.2.4.
4.
4.3.
4.3.
Литературные предпосылки
Специфические методические особенности экспериментов
Оценка количества Н3лейцина в секреторных клетках и ткани молочной железы мышей при действии изопротеренола и фенилэфрина
Оценка количества Н3лейцина в секреторных клетках и ткани молочной железы мышей при действии окситоцина на фоне повышенной концентрации изопротеренола Определение концентрации белка в переживающей культуре клеток молочной железы мышей Исследование влияния катехоламинов на процесс выделения молока у коров
Оценка выведения молока при инъекции адреналина, норадреналина, изопротеренола и фенилэфрина Оценка выделения молока при инъекции изопротеренола на фоне максимального опорожнения молочной железы коров
Оценка выведения молока и содержание в нем жира при инъекции изопротеренола Результаты исследований
Влияние изопротеренола и фенилэфрина на включение Н3лейцина в секреторные клетки молочной железы мышей
Влияние изопротеренола на количество Н3лейцина в секреторных клетках молочной железы мышей при действии окситоцина
Исследование влияния изопротеренола на экструзию белка из эксплантатов ткани молочной железы мышей Исследование трансэпителиальной разности потенциалов и давления в молочной железы коз при действии
4.3.
4.3.7 Глава
5.
5.2.1.
5.2.1.2 5.2.2.
адреналина, норадреналина, изопротеренола и фенилэфрина
Изучение процесса выделения молока у коров при введении адреналина, норадреналина, изопротеренола и фенилэфрина
Исследование выделения молока при действии изопротеренола на фоне максимального опорожнения молочной железы коров
Влияние изопротеренола на количество молока и содержание в нем жира у коров Заключительные замечания
Изучение целостности альвеол и механочувствительности миоэпителиальных и секреторных клеток при накоплении и выведении секрета в молочной железе мышей Литературные предпосылки
Специфические методические особенности экспериментов
Методические подходы для определения состояния альвеолярнопротоковой системы молочной железы мыши
Регистрация через различные интервалы после кормления сократительной реакции миоэпителиальных клеток альвеол при аппликациях окситоцина Измерение давления в молочной железе мышей при различных интервалах после кормления Оценка реакций секреторных клеток и целостности железистого эпителия молочной железы мышей через различные интервалы после кормления Регистрация реакций миоэпителиальных и секреторных
клеток при применении ионов гадолиния Результаты исследований
Изучение состояния альвеолярнопротоковой системы молочной железы мышей через различные интервалы после кормления
Изменение параметров сократительной реакции миоэпителиальных клеток альвеол молочной железы мышей
Исследование величины давления в молочной железе мышей
Исследование реакций секреторных клеток и целостности секреторного эпителия молочной железы мышей через различные интервалы после кормления Исследование реакций миоэпителиальных и секреторных клеток на окситоцин в условиях применения ионов гадолиния
Заключительные замечания
Заключение
Литература
Введение
Актуальность


Затем фильтры переносили на мин в кипящий раствор ТХУ, промывали 2 мин в ацетоне и высушивали для удаления следов воды. В виалы с фильтром добавляли сцинтиллятор ЕР , США и помещали в термостат при С на мин. Перед расчетом радиоактивности виалы выдерживали несколько часов в холодильнике при 4 С. Пробы просчитывали на сцинтилляционном счетчике , Швеция. Содержание белка в пробе аликвоте определяли по методу Лоури . В основе этого метода лежит способность специального электровакуумного прибора механотрона преобразовывать механическое смещение в пропорциональную величину электрического сигнала рис. Сократительную реакцию миоэпителиальных клеток альвеол молочной железы измеряли с помощью механотронного преобразователя перемещения и силы 6МХ1Б, который представляет собой сдвоенный диодный механотрон с общим катодом 9 косвенного накала 8, одним подвижным анодом и вторым неподвижным . Он обладает высокой чувствительностью по току к силе мкАгс и к перемещению мкАмкм. Рис. Использование этого прибора для регистрации сокращения исследуемого объекта получило широкое распространение в физиологических исследованиях Блаттнер и др. Ковалев и др. Пашкова и др. Механотрон представляет собой систему рычагов, отличающийся от других подобных систем лишь тем, что осью вращения здесь является не фиксированная точка, а диафрагма механотрона. Чем меньше величина, которую предстоит измерить, тем дальше от диафрагмы механотрона должна быть точка ее приложения Блаттнер и др. Поэтому в опытах плечо, внешнее по отношению к диафрагме механотрона, было больше, чем его внутреннее плечо. Так как выбранный механотрон обладает высокой чувствительностью, его механическую часть легко перегрузить. Измерение изометрических сокращений, то есть при минимальном перемещении объекта, требует приложения к штырю механотрона значительной силы. В этих условиях прибор выходит за пределы своей линейной характеристики. Учитывая эти обстоятельства, был выбран изотонический режим регистрации сокращения, то есть перемещения альвеолы при сокращении миоэпителиальных клеток. Контрольные опыты показали, что регистрация перемещения альвеолы происходит в пределах линейной зависимости величины электрического сигнала от внешнего воздействия. На аппарате МЭ4 из стеклянных заготовок вытягивали микротрубочки с диаметром кончика приблизительно мкм. Затем на специальном аппарате формировали микрокрючок. При визуальном контроле с помощью стереоскопического микроскопа отыскивали участок железы, где заканчивался пласт секреторной ткани. К данному участку с помощью микроманипулятора подводили прижимающую пластинку 1. Ее располагали таким образом, чтобы краевые альвеолы оказались в центре отверстия, а один из краев отверстия фиксировал пласт секреторной ткани. Другой конец микрокрючка с помощью микрозажима был жестко соединен со штырем механотрона. В каждом из опытов с помощью микроманипулятора создавали минимальное и одинаковое из опыта в опыт механическое смещение кончика микрокрючка, которое оценивали по показаниям цифрового вольтметра. С помощью данного приема повышается точность и избирательность регистрации сократительной реакции растянутых с помощью микрокрючка альвеол, которые расположены между крючком и краем отверстия 4 прижимающей пластинки. Чувствительность механотрона по отношению ко всем механическим смещениям, развивающимся не в плоскости перемещения подвижного анода, существенно ниже. Для регистрации сократительной реакции отдельных альвеол механотрон с крючком ориентировали по отношению к данной альвеоле в плоскости его наибольшей чувствительности. Сигнал, который представлял собой ток разбаланса механотрона, усиливали на усилителе постоянного тока и его величину регистрировали на чернилопишущем приборе Н. Амплитуду сократительной реакции выражали в миллиметрах по отклонению линии записи на самописце от исходного нулевого уровня. В качестве электрофизиологических параметров, используемых в оценке функций секреторных клеток, использовали регистрацию трансэпителиальной разности потенциалов и трансэпителиального сопротивления.