Метаболические функции и стресс-реактивность легких на разных этапах постнатального онтогенеза

• Автор: Нестеров, Юрий Викторович
• Шифр специальности: 03.00.13
• Научная степень: Докторская
• Год защиты: 2003
• Место защиты: Астрахань
• Количество страниц: 210 с. : ил. + Прил. (371 с.: ил.)

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ .

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Роль легких в обмене биологически активных веществ.

1.2. Современные представления об участии легких в

метаболизме липидов

1.3. Особеннос ти липидного обмена в легких при повреждающих воздействиях

.4. Сурфактантная система легких и ее функциональное значение

1.5. Поверхностноактивные свойства легких в условиях действия

экзо и эндогенных факторов

1.6. Значение перекисного окисления липидов в легких в норме

и при повреждающих воздействиях.
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
2.1. Общая характеристика экспериментов
2.2. Экспериментальные модели стресса
2.3. Определение серотонинразрушающей активности легких
2.4. Методики исследования липидных компонентов.
I 2.5. Методы исследования поверхностной активности легких
2.6. Определение свободнорадикального окисления липидов.
ГЛАВА 3. МЕТАБОЛИЧЕСКАЯ АКТИВНОСТЬ ЛЕГКИХ В ОТНОШЕНИИ СЕРОТОНИНА У ЖИВОТНЫХ РАЗНЫХ ВОЗ РАСТНЫХ ГРУПП И В УСЛОВИЯХ СТРЕССА
ГЛАВА 4. СТРЕССРЕЗИСТЕНТНОСТЬ ЛЕГОЧНОЙ ТКАНИ В ОТНОШЕНИИ
ЛИПИДНОГО ОБМЕНА НА РАЗНЫХ ЭТАПАХ ПОСТНАТАЛЬНОГО ОНТОГЕНЕЗА.
ГЛАВА 5. СТРЕССРЕАКТИВНОСТЬ СУРФАКТАНТНОЙ СИСТЕМЫ ЛЕГ КИХ.
ЭФФЕКТЫ ПРИРОДНОГО АНТИОКСИДАНТА ВИТАМИНА Е
ГЛАВА 6. ПЕРЕКИСНОЕ ОКИСЛЕНИЕ ЛИПИДОВ В ЛЕГ ОЧНОЙ ТКАНИ ПРИ
СТРЕССИГГДУЦИРУЮЩИХ ВОЗДЕЙСТВИЯХ РАЗНОЙ МОДАЛЬНОСТИ. ЭФФЕКТЫ ВИТАМИНА Е.
ГЛАВА 7. ВОЗРАСТНЫЕ ОСОБЕННОСТИ СТРЕССЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ
ЛЕГКИХ К ЛИНИДНОИ ПЕРОКСИДАЦИИ
ЗАКЛЮЧЕНИЕ.
ВЫВОДЫ.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Верхнюю часть полученной надосадочной жидкости переносили в следующую пробирку и центрифугировали при бОООобмин минут. Затем верхнюю одну треть центрифугата переносили в другую пробирку, добавляли такое же количество раствора хлорида натрия и центрифугировали 5 минут при обмин. Для измерения поверхностного натяжения использовали верхнюю фракцию. Для получения экстрактов легкого 0 мг легочной ткани растирали в тефлоновом гомогенизаторе до однородной массы. К гомогенату добавляли мл 0,9 раствора хлорида натрия и встряхивали в пластиковом стакане минут. Полученный водносолевой экстракт центрифугировали минут при обмин. Для оценки функциональной активности ССЛ измеряли ПН легочных смывов и экстрактов на модифицированных весах ВильгельмиЛенгмюра Нестеров и соавт. Прибор состоит из торсионных весов, тефлоновой кюветы с передвижным барьером и механизма для его передвижения. Кювета имеет внутренний размер 0xx мм. Ее стенки изнутри выложены тефлоновой лентой, соединенной с передвижным барьером. Кювету заполняли теплым физиологическим раствором и на его поверхность наслаивали исследуемый поверхностноактивный материал. Спустя минут производили пятикратное перемещение барьера в конечное и исходное положение. ПН смывов и экстрактов измеряли в динамике методом ДюНуи, основанном на измерении сил взаимодействия поверхности раздела фаз жидкостьтвердос тело. Передвигая барьер, изменяли площадь поверхности кюветы от 0 до и фиксировали показания торсионных весов в момент отрыва пластинки от изучаемой жидкости. Измеряли ПН максимальное при наибольшей площади монослоя и ПН минимальное при исходной площади кюветы. ПН выражали в мНм. На основании полученных данных вычисляли индекс стабильности ИС поверхностноактивных фракций легких по формуле Клементса ИС 2ПНмаксПНмин ПНмаксПНмин. ИС выражали в условных единицах. Перекисное окисление липидов в гомогенатах тканей оценивали по скорости спонтанного и неферментативного аскорбатзависимого ПОЛ, содержанию в тканях конечных малонового диальдегида и промежуточных гидроперекиси липидов продуктов ПОЛ, в части опытов определяли общую антиокислительную активность тканей. Метод основан на определении содержания конечного продукта ПОЛ малонового диальдегида МДА, который при взаимодействии с тиобарбитуровой кислотой образует окрашенный в розовый цвет триметиновый комплекс, имеющий максимум поглощения при Х02. В одну пробирку наливали 2 мл гомогената и 0,2 мл дисциллированной воды, во вторую 2 мл гомогената и по 0,1 мл растворов аскорбиновой кислоты 2,6 мМ и соли Мора 4 5, в третью те же вещества, что и во вторую и 1 мл раствора трихлоруксусной кислоты. Все пробы помещали на минут в водяную баню при С, после чего в первые две пробирки прибавляли по 1 мл трихлоруксусной кислоты и центрифугировали мин при обмин. Далее отбирали по 2 мл надосадочной жидкости, добавляли по 1 мл 0,8 раствора тиобарбитуровой кислоты и помещали пробы в кипящую водяную баню на минут. После этого их охлаждали и измеряли экстинцию на фотоэлектроколориметре при 2 нм. Х,Х2 Е,Е Х3 Е, х 3 х 3. Х скорость спонтанного ПОЛ нмоль МДА0, г за час инкубации, Х2 скорость аскорбатзависимого неферментативного ПОЛ нмоль МДА0, г за час инкубации, Х3 содержание МДА в исходном гомогенате нмоль0, г сырого веса ткани Е экстинции соответственно 1й, 2й и 3й проб 3,2 общий объем исследуемых проб, мл 2 объем надосадочной жидкости, взятой на определение МДА, мл 3 объем проб, взятой на фотометрию, мл 0,6 экстинция 1 нмоль МДА в 1 мл при 2 нм. Определение гидроперекисей липидов. Гидроперекиси липидов ГПЛ определяли в гомогенатах легочной ткани и в части опытов в плазме крови родановым методом по Казакову и соавт. К 0,5 мл экстракта ткани или плазмы крови приливали 0,5 мл воды и 1 мл раствора трихлоруксусной кислоты для осаждения белков. Пробы центрифугировали при обмин минут. К 1 мл надосадочной жидкости добавляли 5 мл спирта и 0,1 мл концентрированной соляной кислоты.