Физиологические свойства и жирнокислотный состав спермы быков при использовании биологически активного препарата "Милайф"

• Автор: Леднев, Антон Вениаминович
• Шифр специальности: 03.00.13, 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2005
• Место защиты: Нижний Новгород
• Количество страниц: 131 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

Общая характеристика работы

Глава 1. Обзор литературы

1.1. Криоконсервация спермы сельскохозяйственных животных и влияние эффекта оттаивания на сохранение активности спермы.

1.2. Влияние замораживания и оттаивания

на структурный состав спермы.

1.3. Устойчивость спермы к замораживанию у различных сельскохозяйственных животных.

1.4. Особенности состава сред рекомендованных для разбавления

и хранения спермы сельскохозяйственных животных

1.5. Характеристика нового отечественного препарата Милайф для оценки возможности его применения в среде для разбавления

и глубокого замораживания спермы быков

Глава 2. Материалы и методы исследования
2.1. Место и условия проведения исследований
2.2. Методы исследования
2.2.1. Определение оптимального состава синтетической среды для разбавления и замораживания спермы быков
2.2.2. Определение жирнокислотного состава общих липидов методом газожидкостной хроматографии
2.3. Научнопроизводственный опыт по осеменению животных
2.4. Биометрическая обработка полученных опытных данных.
Глава 3. Результаты собственных исследований и их обсуждение
3.1. Определение оптимального состава синтетической среды для
разбавления и замораживания спермы быков
3.1.1. Определение оптимального количества биологически активного препарата Милайф для сохранения жизнеспособности спермы быков
3.1.2. Определение сочетаемости трех компонентов среды
3.1.3. Влияние биологически активного препарата Милайф на переживаемость сперматозоидов в процессе
замораживанияоттаивания
3.1.4. Влияние препарата Милайф на морфологию спермиев
3.1.5. Изучение влияния препарата Милайф на количественное содержание мертвых спермиев
3.1.6. Влияние препарата Милайф на устойчивость сперматозоидов быков к замораживанию
3.1.7. Снижение микробного числа при использовании
препарата Милайф
3.2. Определение жирнокислотного состава общих липидов методом газожидкостной хроматографии
3.2.1. Состав жирных кислот спермы быков
3.2.2. Динамика жирных кислот в результате
длительного хранения спермы быков.
3.2.3. Влияние препарата Милайф на жирнокислотный состав
общих липидов спермы быков
3.3. Оплодотворяющая способность спермы быков
Выводы
Рекомендации по использованию научных выводов
диссертационной работы.
Список используемой литературы


В первых исследованиях основное внимание уделялось изучению процессов в среде замерзания, динамике образования внутри и внеклеточного льда, образованию концентрированных растворов солей при вымерзании воды и действию их на клетки. Все эти процессы подробно описаны в ряде фундаментальных работ Л. Ре, О. Смит, Л. ЛозиноЛозинский, . Во всех жизненных процессах принимает участие вода . , . , О. Самойлов, . i, . , . , . , . Открытие витрификации сыграло чрезвычайно большую роль в разработке методов низкотемпературной консервации спермы, так как некристаллическое замерзание мало повреждает клетки и сохраняет их жизнеспособность. Многолетние исследования И. Смирнова по криоконсервации спермы животных позволили ему высказать предположение об одновременном протекании процессов кристаллического затвердевания воды в межклеточной жидкости и витрификации клеток. Согласно его схеме, при медленном охлаждении спермы свободная вода вне и внутри клеток затвердевает в виде крупных кристаллов, что приводит их к гибели И. Смирнов, . Гипотеза И. Смирнова нашла подтверждение в работах ряда авторов В. К. Милованов, Х. Х. Хабибуллин, Е. Платов, , Ф. И. Осташко, , . Изучая процессы замораживания спермы быка под люминесцентным микроскопом, была установлена четкая связь между скоростью замораживания, формой кристаллов и выживаемостью спермиев Е. Платов, , . В вопросе о том, какой фактор является главенствующим в механизме повреждения спермиев при замораживании, долгое время не было единого мнения. Большинство ученых считает, что этими факторами служат внутри и внеклеточная кристаллизация воды и действие гиперконцентрированных растворов солей, образующихся в результате вымерзания воды. Согласно теории В. , например, кристаллы могут прокалывать, сдавливать клетки, вызывая их гибель. В последние годы установлено, что механическое повреждение спермиев кристаллами льда маловероятно изза малых размеров сперматозоидов и эластичности мембран Ф. Осташко, . Применение оптимальных режимов замораживания и криопротекторов позволяет до минимума свести действие этого фактора. Теплообмен, выражающийся в оттоке тепла в момент охлаждения спермы и в притоке его при замерзании воды и при кристаллизации солей в эвтектических точках, а также скорость этих процессов вызывают специфическую, свойственную только живой клетке реакцию. Одной из таких реакций спермиев на охлаждение является температурный шок, который сопровождается рядом морфологических, физиологических и биохимических изменений в спермиях, приводящих к их гибели Е. М. Платов, . Работами ряда авторов показано, что большую опасность для спермиев представляют осмотические явления на мембране, возникающие в результате быстрого охлаждения или оттаивания клеток. Это явление получило название температурный шок В. К. Милованов, и было описано еще в г. М.П. Кузнецовым и М. П. Викиной, которые наблюдали его при резком охлаждении спермы баранов. Затем его явление отмечали и при охлаждении спермы быков и хряков И. Бирилло, Л. Пухальский, i, , В. К. Милованов, И. И. Соколовская, Ф. И. Осташко, . Устойчивость спермиев к холодовому удару в изотоническом растворе исследуемого вещества характеризуется коэффициентом защиты. Его определяют путем расчета отношения активности спермы в исследуемой среде до холодового удара к се активности после холодового удара. Сперма барана, более устойчива к холодовому удару, чем сперма быка Е. М. Платов, А. А. Шевцова, . Представления . о кинетике обезвоживания клеток при замораживании послужили основой двухфакторной теории повреждения биологических объектов. Согласно этой теории на первом этапе от 0 до 7 С наиболее отрицательно действует фактор, заключающийся в быстрой дегидратации клеток, а на втором от 7 до С наиболее опасна повышенная концентрация солей. Интенсивность влияния каждого фактора зависит от вида клеток, состава консервирующей среды и скорости замораживания.