Энрофлон-К как средство для профилактики и деконтаминации клеточных культур и иммунобиологических препаратов от бактериальной и микоплазменной инфекции

• Автор: Карпухина, Ольга Геннадьевна
• Шифр специальности: 03.00.07
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2004
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 187 с. : 2 ил.

Поэтому целесообразно деконтаминацию культур клеток проводить с учетом эффективности препаратов в отношении конкретных видов микрофлоры. Для повышения результативности деконтаминации следует использовать не только монопрепараты, но и их сочетания, что может привести к синергидному эффекту . Микоплазменная контаминация. Первое сообщение о загрязнении линий клеток микоплазмамиконтаминантами появилось в году 1. При заражении клеток НеЬа различными видами микоплазм, последние были обнаружены как в зараженной, так и в контрольной культурах. При последующей проверке из 5 линий клеток 3 оказались загрязненными. Контаминация микоплазмами линий клеток явление широко распространенное. Хейфлик утверждает, что всех клеточных линий загрязнены микоплазмами. Другие авторы 8 приводят более высокий процент контаминации 0. Длительно культивируемые клетки почти все загрязнены микоплазмами. Загрязнение первичных культур клеток микоплазмами наблюдается значительно реже и составляет лишь 0,8 4 , 7. Микоплазменная контаминация проявляется в разрушении клеточного монослоя. Механизм цитопатического действия многообразен и сложен. Он может быть связан с утилизацией агригинина микоплазмами из культуральной среды 3. Конкуренция за использование аминокислоты микоплазмами и клетками может быть одной из причин цитопатического действия. Многие виды микоплазм используют протеины и липиды цитоплазматических мембран клеток эукариот для предсинтеза своих соответствующих структур. Поэтому, в ряде случаев, цитопатическое действие в виде отслаивания клеток от стекла может быть следствием разрушения цитоплазматических мембран клеток , 1. Микоплазмы способны также менять метаболизм и антигенную структуру клеток 4, существенно влиять на ростовые свойства и урожай культур и оказывать в отдельных случаях ингибирующее действие на репродукцию вирусов 9,0. Микоплазменная контаминация нарушает биохимические процессы в клетках , 0, 7, 2 и приводит к изменению цитогенетических характеристик клеточных линий , , 2, 3, 5, 7, 9, 8, 0, 2, 7, 0. Широкое распространение микоплазменной инфекции среди ПЛК ряд авторов считает результатом аэрозольного заражения , 6, 1, 1, 3, 0, 4. В частности было отмечено, что микоплазма, распыленная в воздухе, в течение 2х дней полностью сохраняет свою инфекционность , 2. Именно поэтому обмен ПЛК между лабораториями, служит дополнительным источником контаминации. По мнению РоЬ Л биологические материалы и несоблюдение правил асептики являются не единственными способами контаминации клеточных культур микоплазмами. Автор считает, что стерилизация ПС и растворов фильтрацией не освобождает их от контаминирующих агентов. Некоторые исследователи считают, что микоплазмы попадают в культуру клеток с СК 9, 2, 3 и трипсином 3. Латентное микоплазмоносительство, скрытые очаги инфекции в организме животных и птиц , может также явиться источником контаминации клеточных культур , 9. Источниками контаминации могут быть также и сотрудники лабораторий латентные микоплазманосители. Загрязнение, вероятнее всего, происходит воздушнокапельным путем при пипетировании ртом , 8. Поэтому для предотвращения контаминации клеточных культур необходимо соблюдать строгие асептические условия работы 7. Для контроля микоплазменной инфекции в клеточных культурах используют прямое выделение возбудителя на микробиологических ПС, методы специфического окрашивания ДНК оливомицином или НоеЬ, методы молекулярной гибридизации, цепную полимеразную реакцию ПЦР, а также различные иммунологические реакции обнаружения антигенов , , 6. Обязательным является соблюдение ряда условий подготовки проб для тестирования, поскольку не только присутствие антибиотиков, но и некоторые ферменты трипсин, значительное отклонение среды, наличие криозащитных сред, медленное замораживание и ряд других факторов могут приводить к повреждению плазматических мембран микоплазм, что в свою очередь приводит к искаженным результатам контроля. Обычные рекомендации сводятся к проведению 2х пассажей испытуемых проб без антибиотиков 4.