Экспериментально-клиническое изучение споровых пробиотиков

• Автор: Осипова, Ирина Григорьевна
• Шифр специальности: 03.00.07
• Научная степень: Докторская
• Год защиты: 2006
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 283 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ

ЧАСТЬ I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

ГЛАВА 1. НОРМАЛЬАЯ МИКРОФЛОРА

1.1. Микрофлора кишечника и ее роль в обеспечении состояния здоровья

организма хозяин

1.1.1. Бактерии рода i как компоненты нормальной микрофлоры

1.1.2. Нарушения колонизационной резистентности дисбиозы. Модели дисбактериозов

1.2. Колонизационная резистентность вагинального биотопа и ее механиз мы

1.2.1. Дисбиоз влагалищного биотопа

ГЛАВА 2. СОВРЕМЕННОЕ СОСТОЯНИЕ ПРОБЛЕМЫ ПРОБИОТИКОВ

2.1. Композиционный состав пробиотиков
2.2. Пробиотики на основе бактерий рода i
2.3. Критерии отбора культур в состав пробиотиков ГЛАВА 3. МЕХАНИЗМЫ ЛЕЧЕБНОПРОФИЛАКТИЧЕСКОГО ДЕЙСТВИЯ ПРЕПАРАТОВ ПРОБИОТИКОВ
ЧАСТЬ II. СОБСТВЕННЫЕ РЕЗУЛЬТАТЫ
ГЛАВА I. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
1.1. Материалы
1.2. Методы
1.2.1. Исследование культуральнобиохимических свойств бактс рий .i
1.2.2. Исследование культуральнобиохимических свойств микроорганиз
1.2.2.1. Микробиологическое исследование вагинального биотопа
1.2.3. Микроскопический метод исследования вагинальных мазков
1.2.4. Определение адгезивной активности
1.2. 4.1. Метод определения адгезии микробов к эритроцитам
1.2.4.2. Метод определения адгезии микробов к эпителиальным клеткам кишечника крыс или мышей
1.2.4.3. Определение уровня адгезивной активности штаммов пробиоти ков на модели эпителиальных клеток влагалища человека
1.2.5. Определение чувствительности штаммов к антибиотикам
1. 2.6. Определение антагонистической активности
1.2.6.1. Определение антагонистической активности пробиотиков в отно шение к клиническим штаммам УПМ
1.2.7. Определение устойчивости бактерий к действию биологических жидкостей
1.2.8. Обработка НИЛИ
1.2.9. Моделирование дисбактериоза у животных
1.2 Методы изучения безопасности
1 Изучение острой и хронической токсичности
1 Изучение безвредности
1 Изучение вирулентности
1 Изучение токсичности
1 Изучение токсигенности
1 Изучение дермонекротических свойств
1 Определение влияния споросодержащих препаратов на детокси пирующую функцию печени гсксеналовая проба
1.2 Оценка персистирования штаммов рода i в желудочно кишечном тракте мышей
1.2 Методы статистической обработки результатов исследований
ГЛАВА 2. МОДЕЛЬ ДЛЯ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОГО ИЗУЧЕНИЯ ШТАММОВ
2.1. Моделирование дисбактериоза па мышах
2.1.1. Влияние доксициклина на фекальную микрофлору мышей
2.1.2. Влияние ампиокса на состав фекальной микрофлоры
2.1.3. Изучение адгезивной акгивности УПБ при экспериментальном дис бактериозе
2.1.4. Изучение транслокации УПБ при экспериментальном дисбактериозе
2.1.5. Использование пробиотиков для коррегироваиия дисбиоза
2.2. Моделирование инфекционного процесса вызванного .i 7
2.2.1. Использование пробиотиков для профилактики и лечения инфекции, вызванной .i Н
ГЛАВА 3. РАЗРАБОТКА КРИТЕРИЕВ ОТБОРА ШТАММОВ
3.1. Изучение безопасности штаммов бактерий рода i в опытах на 5 лабораторных животных
3.2. Изучение биологических свойств штаммов пробиотиков в опытах
i vi и i viv
ГЛАВА 4. КОНСТРУИРОВАНИЕ КОМПЛЕКСНЫХ ПРОБИОТИКОВ
4.1. Биоспорин
4.2. Витаспорин
4.3. Биспорнн
4.4. Субтикол
4.5. Ирилис
4.6. Сравнительное изучение новых споровых пробиотиков с другими
коммерческими препаратами на основе бацилл
4.7. Использование пробиотиков для коррекции дисбиоза
4.8. Использование споровых пробиотиков для профилактики и лечения 6 инфекции, вызванной .i
ГЛАВА 5. СРАВНИТЕЛЬНОЕ ИЗУЧЕНИЕ СПЕЦИФИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ
РАЗЛИЧНЫХ ПРОБИОТИКОВ
5.1. Изучение антагонистической акгивности различных лекарственных 0 форм пробиотиков
5.2. Адгезивная активность различных лекарственных форм пробиотиков
5.3. Изучение влияния низкочастотного инфракрасного лазерного излуче 6 ния НИЛИ на специфическую активность пробиотиков
5.3.1. Влияние НИЛИ на жизнеспособность бактерий
5.3.2. Воздействие НИЛИ на антагонистическую активность пробиотиков
5.3.3. Воздействие НИЛИ на уровень адгезии пробиотиков и патогенных 0 Е.соН
ГЛАВА 6. КЛИНИЧЕСКАЯ АПРАБАЦИЯ БИОСПОРИНА
6.1. Испытание безопасности и переносимости биоспорина на добро воль 5 цах
6.2. Государственные испытания безопасности, переносимости и клиниче 8 ской эффективности биоспорина сухого
6.2.1. Результаты испытания безопасности, переносимости и клинической 9 эффективности биоспорина при ОКИ на ограниченном контингенте больных взрослых
6.2.2. Результаты испытания клинической эффективности биоспорина при 2 лечении дисбактериозов различной этиологии на взрослых больных
6.2.3. Изучение клинической эффективности препарата на детях
6.3. Изучение профилактической эффективности биоспорина сухого
6.4. Изучение клинической эффективности препарата биоспории, таблетки 9 при лечении ОКИ и дисбактериозов
6.5. Расширение сферы применения биоспорина. Клиническая эффсктив 9 ность биоспорина при лечении бактериального вагиноза
ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Представители мукозной автохтонной микрофлоры фиксируются к строго определенным рецепторам эпителиальных клеток 4. Число таких рецепторов на эпителиальных клетках ограничено. Эго подтверждается наблюдениями, свидетельствующими о том, что предварительная обработка клеток КонА или адгезинами бактерий резко снижает количество микроорганизмов, способных фиксироваться на таких клетках. Механизмы, отвечающие за процесс специфической адгезии индигенных микроорганизмов, в последние годы интенсивно исследуются. Установлено, что одним из элементов, ответственным за адгезию, являются поверхностные структуры бактерий, содержащие лектины, которые комплементарны соответствующим рецепторам, расположенным на мембранах эпителиальных клеток. Лектины могут быть локализованы в мембранах бактерий, на их поверхности, а также на специфических фимбриях, которые, проходя сквозь толщу экзополисахаридного гликокаликса, фиксируют бактерии к соответствующим рецепторам . Адгезия бактерий может осуществляться и к рецепторам, локализованным в муциновом слое и на других микроорганизмах опосредованная адгезия 0. Своеобразие рецепторов детерминируется генетически у каждого индивидуума, о чем свидетельствует наличие почти полностью идентичной анаэробной и аэробной флоры у однояйцовых, но не у разнояйцовых близнецов человека 9 0. Адгезивность выступает в качестве одного из факторов, определяющих поведение микроорганизмов в ценозах 7 1. С помощью адгезинов осуществляется фиксация микроорганизма на поверхностях обитания 9. Математические модели экологических взаимодействий в культуре клеток и в кишке показали, что при сходности структуры рецепторов даже небольшие различия в адгезивной способности бактерии могут оказывать значительное влияние на их колонизацию в таких динамических системах, как кишка. Таким образом, бактериальные адгезины отличаются по степени аффинитета к специфическим рецепторам. Кроме того, один и тот же микроб в различных ситуациях способен продуцировать адгезины различной специфичности. Считается, что именно это свойство отражает способность микроорганизмов использовать различные экологические ниши. Особое внимание при этом привлекают микроскладки Мклеток эпителиальных клеток пейеровых бляшек, так как на них обнаружены рецепторы к факторам адгезии некоторых микроорганизмов кишечной группы. При этом едва уловимые изменения в рецепторсвязывающем участке адгезина могут оказать значительное влияние на тропизм адгезирующего микроба 8 5 9. Прикрепление бактерий к клеткам мишеням и установление взаимоотношений между микробом и хозяином увеличивают интенсивность основных физиологических процессов у бактерий, изменяют размеры и морфологию микробной клетки и, что самое важное, влияют па скорость размножения, способствуя колонизации и дальнейшей инвазии в ткани макроорганизма, в случае, если он является патогенным 8 2 1 6. На процесс специфической адгезии микроорганизмов к слизистой оболочке толстой кишки оказывают влияние многие факторы секреторные иммуноглобулины, аналоги рецепторов мембран, лизоцим, различные ионы, химические вещества. Поэтому обнаружение в просвете кишки и в фекалиях микроорганизмов, типичных для пристеночной микрофлоры, может свидетельствовать о нарушениях функции адгезии в результате воздействия тех или иных причин 2 1 6 8 5. Адгезия некоторых патогенных бакгерий к слизистой оболочке кишечника влечет за собой утрату микроворсинок и полное сглаживание щеточной каймы. Для энтеропатогенных эшерихий характерно чрезвычайно прочное прикрепление к мембране энтероцитов, что позволяет предполагать участие лектиноподобных иефибриальиых адгезинов 8 7. Одной из важных сторон защитной функции бактерий нормальной микрофлоры является антагонистическая активность в отношении патогенных и условно патогенных микроорганизмов. Благодаря биохимической активности микроэкологической системы пищеварительного тракта, обеспечивающей продукцию микрофлорой субстанции с выраженной антагонистической активностью, попадающие извне патогенные микроорганизмы быстро элиминируются из кишечника, что предотвращает развитие инфекционного процесса 7 2 5 8.