Получение и свойства соматических гибридов аспорогенных дрожжей рода Rhodotorula в связи с их полисахаридообразованием

• Автор: Коклюшкин, Владислав Владимирович
• Шифр специальности: 03.00.07
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2002
• Место защиты: Санкт-Петербург
• Количество страниц: 124 с. : ил

Содержание
ВВЕДЕНИЕ.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1. ТАКСОНОМИЧЕСКОЕ ПОЛОЖЕНИЕ ДРОЖЖЕЙ РОД

1.1. Характеристика дрожжей рода

1.2. Характеристика . ii ii .. i ..

1.3. Характеристика .

2. Распространение i

2.1. i в природных субстратах.

2.2. Дрожжевая биота животных и человека

3. Перспективы практического использования
I.
3.1. Использование i для сорбции некоторых гокси
ческих соединений
3.2. Ферменты из i
3.3. Представители рода как продуценты биологически ак
ТИННЫХ веществ
зование некоторых видов ШкоюшЬ в пищевой промышленности..
НЕГИ ШСКИЕ АСПЕКТЫ СЕЛЕКЦИИ ДРОЖЖЕЙ,
4.1. Генетическая инженерия.
ф тетические среды ДЛЯ селекции микроорганизмов.
Р рование селективных признаков у анагиорфиых дрожжей
рода И1о1оги1а
Р пластирование дрожжей и слияние прот опластов
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
5. Объекты, материалы и методы.
5.1. Объекты исследования
5.2. Хранение и поддержание штаммов микроорганизмов
5.3. Стерилизация питательных сред и буферных растворов
5.4. Получение штаммов тесткультур с селективными признаками
5.4.1. Обработка культур химическими мутагенами.
5.4.2. Обработка культур физическим .мугагеном.
5.5. Выделение и идентификация ауксотрофиых мутантов.
5.5.1. Получение первичных ауксотрофов.
5.5.2. Получение первичных полиауксотрофов и ауксотрофов с измененным фенотипом.
5.5.3. Увеличение концентрации ауксотрофиых мутантов.
5.5.4. Идентификация ауксотрофиых мутантов.
5.6. Получение гибридных вариантов.
5.6.1. Получение протопластов культур. Определение эффективности протопластирования, реверсии ауксотрофиых протопластов к прототрофности и степени регенерации протопластов.
5.6.2. Слияние протопластов 4В
5.7. Отбор гибридных вариантов.
5.8. Биохимический анализ гибридных вариантов
5.9. Анализ синтезируемого полисахарида
5. Статистическая обработка результатов
6. Результаты и обсуждение
6.1. Создание генетически маркированных линий дрожжей.
6.1.1. Обработка i мутагенами НМБ, ДАБ и лучами Рентгена
6.1.2. Комбинированное действие НМБ и 2дезоксиглюкозы на i.
6.1.3. Анализ ауксотрофной коллекции i
6.2. Внутривидовая и межвидовая гибридизация
6.3. Генетическое и биохимическое доказательство гибридного происхождения отдельных штаммов i
ВЫВОДЫ.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


. и . . и . НМБ, ДАБ, рентгеновское излучение на . . ii сопровождается образованием стабильных только урацил, метионин, аденин, и пролинзависимых ауксотрофных мутантов, а также диауксотрофных мутантов типа , ига. . и . . и . i 16 и i6, лимонную кислоту i6, а также галактозу, манитол и водорастворимый крахмал i41, что не свойственно базовому штамму . ВКМ 1. Получены межвидовой гибридный вариант i8, обладающий синтетической активностью, в шесть раз превышающей гликансинтазную активность базового штамма, и внутривидовые гибридные варианты обладают активностью, в 1,85,2 раза превышающей активность базового штамма . ВКМ 1. Образуемые ими экзогликаны сравнимы между собой по моносахаридному составу. Оценена генетическая совместимость некоторых ауксотрофных мутантов и определены пары мутантов для скрещивания с большей вероятностью, что обеспечивает получение высокопродуктивных гибридов. Разработан и предложен метод обогащения ауксотрофных мутантов, основанный на замене глюкозы в питательной среде се аналогом 2дезоксиглюкозой. Стабильные ауксотрофные мутанты . . ii по урацилу, метионину и адснину получены под влиянием НМБ, ДАБ и рентгеновских лучей. В результате слияния протопластов получено 9 жизнеспособных внутривидовых и межвидовых гибридов. Синтетическая активность 2 гибридных вариантов находилась в широком диапазоне от полного подавления до увеличения в 6,4 раза по отношению к исходному штамму . ВКМ 1 продуценту экзогликана, среди них отобрано высокопродуктивных штамма. Отобран межвидовой гибрид с повышенной синтетической активностью. Экзополисахарид по моносахаридному составу сравним с экзополисахаридом, продуцируемым . ВКМ 1. Отдельные гибриды приобрели способность ассимилировать некоторые углеводы, ранее не используемые ни одним из родителей. Результаты исследований доложены на всероссийской научной конференции Актуальные проблемы создания новых лекарственных средств СанктПетербург, , на юбилейной научной сессии, посвящнной 0летию со дня рождения проф. Н. А. Преображенского Москва, и на заседаниях кафедры микробиологии СПХФА , , , . По диссертации опубликованы тезисы докладов на указанных выше научной сессии и конференции, одна статья в журнале Микология и фитопатология РАН г и три статьи в журнале Проблемы медицинской микологии , г. Диссертация изложена на 4 страницах и состоит из введения, обзора литературы, описания методов исследования, результатов работы и их обсуждения, выводов и списка литературы, содержащего 3 источника, из них на русском языке. Работа содержит 7 рисунков и таблиц. РОДА ЮЮЕХУГХЖиЕА. Характеристика дрожжей рода КЬо1о1оги1а. Среди полезных для человека микроорганизмов, используемых в практической деятельности, дрожжи занимают особое место. В эту группу одноклеточных грибов включают более 0 видов. Благодаря большому практическому значению дрожжи стали объектом многочисленных исследований цитологов, физиологов, биохимиков, генетиков, экологов, что диктуется первоочередными запросами микробиологической промышленности Хоуксворг Д. Л., . Это связано также и с тем, что спектр продуктов, получаемых с помощью дрожжей, заметно возрос. Микромицеты рода ШюсЬюпйа относят к дрожжевым организмам базндиомицетового аффинитета. Они привлекают к себе все больше внимание как продуценты биологическиакгивных веществ полисахаридов, липидов, жирных кислот, ферментов. Наибольший интерес проявляют к внеклеточным полисахаридам, способность которых при низких концентрациях давать вязкие растворы, при высыхании прозрачные, сравнительно прочные пленки, и ряд других примечательных свойств, обусловливает высокие потенциальные возможности их широкого применения во многих отраслях промышленности пищевой, текстильной, бумажной, химической, фармацевтической и др. Дрожжи таксономически гетерогенная группа истинных грибов, жизненный цикл которых в анаморфном состоянии в основном представлен одноклеточной формой.