Полимеразная цепная реакция в диагностике урогенитального хламидиоза

• Автор: Латыпова, Мунира Фадисовна
• Шифр специальности: 03.00.07
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2001
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 104 с.

ОГЛАВЛЕНИЕ
Введение5

Глава I. Обзор литературы.

1.1. Биологические свойства и жизненный цикл

i i

1.2. Эпидемиология хламидийной инфекции.

1.3. Основные методы лабораторной диагностики i i

1.3.1. Культуральный метод

1.3.2. Методы иммунологического анализа

1.3.3 Методы молекулярной диагностики.

1.3.4. Методы гибридизации нуклеиновых кислот.

1.3.5. Методы амплификации нуклеиновых кислот..
1.3.6. ПЦРанализ
1.3.7. Применение ПЦРанализа в лабораторной диагностике
Глава II. Собственные исследования. Материалы и методы.
2.1. Материалы исследования.
2.1.1.Общая характеристика клинического материала
2.2. Методы исследования
2.2.1. Диагностика инфекции с помощью ПЦРанализа.
2.2.2. Метод прямой иммунофлуоресценции.
2.2.3. Метод обнаружения i i в культуре клеток.
2.2.4. Методы статистической обработки .
Глава III. Результаты исследований и их обсуждение
3.1. Выбор оптимальной генетической мишени для диагностики i i методом ПЦР
3.2. ПЦРанализ как критерий излеченности
3.3. Выявление микробных ассоциаций, вызванных i i, ii, i
и ix vi 2 в урогенитальном тракте у мужчин и женщин методом ПЦР.
3.4. Сравнительный анализ ПЦР, ПИФ и культуры клеток в
диагностике урогенитального хламидиоза.
Заключение.
Выводы.
Список литературы


Однако, этот метод, по утверждению Евсеева Л. П. и Шайхаева 1 О. Наибольшей чувствтггсльностью обладает биологический метод посева на культуре клеток Мс Соу, Ь 4 и др. В настоящее время все более широкое распространение получают методы диагностики ИИПП, основанные на полимеразной цепной реакции ПЦР изза быстроты выполнения исследования, высокой чувствительности и специфичности , , 3, , . Но ПЦР, как и все другие методы диагностики, имеет свои достоинства и недостатки. Несмотря на то, по ПЦР как метод идентификации инфекционных агентов обладает наибольшей чувствительностью и специфичностью из всех доступных методов лабораторного анализа, попрежнему возникают проблемы при его использовании в лабораторной практике. Звучит много нареканий по поводу ложноположительных результатов, отсутствие показаний для использования данных ПЦРанализа в качестве критерия излеченности и корреляции результатов ПЦРанализа с другими распространенными методами обнаружения урогенитального хламидиоза. Основными причинами подобных разночтений является выбор неадекватной мишени при создании диагностических тестсистем, возможность перекрестных реакций с антигенными детерминантами других микроорганизмов, как причина ложноположительных результатов, а низкая стабильность реагентов, в свою очередь, приводит к снижению чувствительности реакции и получению ложноотрицательных результатов. Вышеизложенное свидетельствует об актуальности дальнейшего углубленного изучения проблемы диагностики урогенитальною хламидиоза с помощью I ЩРанализа и других методов. ЦЕЛЬ РАБОТЫ Усовершенствование лабораторной диагностики хламидийной инфекции методом полимеразной цепной реакции, оценка роли и диагностических возможностей этого метода. Изучить чувствительность и специфичность диагностических тестсистем, предназначенных для детекции i i и использующих различные генетические мишени рибосомальные гены, гены плазмидной ДНК, уникальные хромосомные гены. Исследовать возможность использования результатов ПЦРанализа как критерия оценки эффективности терапии хламидийной инфекции. Оценить значение ПЦРанализа в диагностике ИППП Выявить частоту встречаемости микробных ассоциаций, вызванных i i, ii. i и ix vi 2 в урогенитальном тракте у мужчин и женщин. Определить диагностическую значимость ПЦРанализа в сравнении с культуральной диагностикой и методом прямой иммунофлуоресценции для определения i i. Впервые проведены клиниколабораторные сравнительные исследования диагностических тестсистем отечественного производства, основанных на принципе полимеразной цепной реакции. ДНК, уникальных хромосомных генов ген трансферазы и рибосомальных генов. Гены рибосомальных РНК определены как адекватная генетическая мишень для детекции i i в клинических образцах, обеспечивающая максимальную чувствительность и специфичность. В работе впервые проведены исследования для определения роли результатов ПЦРанализа, как критерия излеченности и рекомендованы сроки его использования. Впервые методом ПЦРанализа изучена частота ассоциаций возбудителей ИППП и проведены широкомасштабные исследования встречаемости смешанных инфекций в урогенитальном тракте мужчин и женщин, обусловленных i i, ii, i и ix vi 2 . Определены диагностические возможности метода полимеразной цепной реакции с помощью усовершенствованной нами тестсистемы для детекции i i. Установлена высокая чувствительность и специфичность ПЦРанализа по сравнению с ПИФ и методом культуры клеток. Продемонстрирована возможность применения результатов ПЦРанализа в качестве критерия излеченности пациентов с хламидийной инфекцией с помощью разработанной нами тестсистемы с адекватной генетической шипенью к генам . Установлена возможность использования ПЦРанализа для исследования микробных ассоциаций урогенитального тракта и диагностики смешанных инфекций.