Особенности роста, биосинтеза дифтерийного токсина и клеточных белков при культивировании Corynebacterium diphtheriae в условиях дефицита железа

• Автор: Гаврилова, Наталья Андреевна
• Шифр специальности: 03.00.07
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2000
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 116 с.

Введение

Обзор литературы

Глава 1. Антигенная структура С.ШрМЬеНае

1.1. Специфика состава клеточной стенки и основные антигены С.ШрМЬеНае

1.2. Анализ адгезивных свойств С.сНрМЬеНае Глава 2. Лизогения С.ЫрЫЬепае как фактор внутривидовой гетерогенности

Глава 3. Способность к усвоению железа у патогенных бактерий

3.1 Сидерофорзависимая система транспорта железа

3.1 Потребление железа без участия сидерофоров

3.1 Железотранспортная система СлНрМЬег1ае Глава 4. Железорегулируемые белки патогенных бактерий и их значение

Заключение по обзору литературы

Собственные исследования

Глава 5. Материалы и методы исследования
5.1. Штаммы .i и условия культивирования
5.2. Оценка накопления дифтерийного токсина в фильтратах
культуральной жидкости
5.3. Определение биологической активности фильтратов
культуральной жидкости на клетках СНО
5.4. Определение концентрации ионов железа
в питательной среде
5.5. Создание дефицита железа в питательной среде
5.6. Изучение способности .ii к усвоению различных
источников железа
5.7. Определение содержания белка
5.8. Метод получения препаратов клеточных белков .ii
5.9. Электрофорез препаратов клеточных белков .ii в
полиакриламидном геле
5 Выявление ДТ в иммуноблоттинге с
антитоксичекой сывороткой
5 Статистические методы анализа результатов исследования
Глава 6. Накопление дифтерийного токсина в многокомпонентных
питательных средах с различным содержанием железа
6.1 Определение дифтерийного токсина при культивировании С.ре7ае Р8 в питательных средах с различным содержанием ионов железа
6.2Культивирование С.сИрМЬеЬае РМВ в полноценной и полусинтетической питательных средах
Глава 7. Ростовые потребности различных штаммов С.ИрЫЬепае в
неорганическом и органическом источниках железа
7.1. Влияние вида и концентрации источника железа
на рост С.сИрМЬеНае
7.2. Влияние вида хелатора на степень лимитирования источника железа в среде при культивировании С.сНрМЬеггае 8
Глава 8. Культивирование С.ИрМЬег1ае в условиях дефицита железа в
питательной среде
8.1. Динамика роста С.сЛрНег1ае в условиях дефицита железа в питательной среде
8.2. Влияние дефицита железа на накопление ДТ
8.2.1. Накопление дифтерийного токсина токсигенными штаммами С.сИрЬег1ае РШ и
8.2.2. Изучение влияния дефицита железа на накопление ДТ штаммом С.сЛрЫЬеНае 8
Глава 9. Спектр клеточных белков С.сЛрМЬепае в условиях
дефицита железа
9.1. Сопоставление спектра клеточных белков разных штаммов С.сНрМЬепае
9.2. Влияние дефицита железа на состав клеточных белков токсигенных штаммов С.сИрЬМюНае Р1У8 и
9.3. Влияние дефицита железа на состав клеточных белков нетоксигенных штаммов С.сНрМЬег1ае и
9.4. Влияние дефицита железа на состав клеточных белков штамма С.сИрМЬепае 8
Глава . Влияние лизогенной конверсии на ростовые потребности в источнике железа и профиль клеточных белков С.сИрМНепае
Обсуждение
Выводы
Список литературы


Тем более, что, как показано для других патогенных бактерий, железорегулируемые белки участники утилизации железа обладают иммунопротективной активностью , , , , 1. Необходимость создания такой вакцины признана рядом исследователей , , , , однако вопрос о том, какие именно соматические антигены должны быть включены в такой препарат, остается открытым. При недостатке железа С. ЛрЫЬепае экспрессируют большое количество белков, функциональное значение которых, связь с патогенезом, их молекулярные характеристики у разных по генотипу Цох и Лх и другим свойствам штаммов, еще не выяснены. Кроме того, вне поля зрения современных исследований остались весьма важные аспекты проблемы, например, вариабельность потребности в источнике железа у циркулирующих штаммов С. ЛрЫЬепае, а также влияние лизогенной конверсии штамма на его зависимость от концентрации железа в очаге колонизации. Цель исследования выяснение особенностей влияния железа на рост, токсинообразование и биосинтез железозависимых белков у различных по своему генотипу йэхи ох и другим свойствам штаммов С. МАтелае. Изучение влияния дефицита железа, искусственно созданного в среде культивирования путем введения комплексообразующих соединений, на накопление дифтерийного токсина различными штаммами С. ИрМЬепае. Изучение влияния природы источника железа неорганического и органического и его концентрации на рост токсигенных и нетоксигенных штаммов С. ИрЫЬепае. Комплексное исследование штамма С. ЛрМЬепае, несущего охген, непроявляющийся в накоплении ДТ, в условиях избытка недостатка железа в среде. Выяснение влияния содержания железа в среде на состав клеточных белков, синтезируемых токсигенными и нетоксигенными клиническими изолятами С. ЫЬепае. Определение влияния фаговой конверсии на спектр железозависимых клеточных белков С. ИрЫЬепае на модели изогенной пары штаммов, различающихся по наличию отсутствию охгена. Научная новизна. Впервые установлены различия между штаммами С. ЛрМЬепае по лимитирующим рост концентрациям железа, которые взаимосвязаны с принадлежностью к определенному биоварианту и с видом источника железа. Выявлены различия между токсигенными и нетоксигенными штаммами по спектру синтезируемых клеточных белков при сниженной концентрации доступного железа в среде. Установлено, что лизогенная конверсия сообщает С. НрМИепае помимо способности к синтезу дифтерийного токсина, снижение потребности в источнике железа и расширение спектра железозависимых белков. Практическая значимость. Полученные сведения о штаммовой вариабельности С. НрМЬепае, проявившейся в различной способности к росту и интенсивности токсинообразования при одной концентрации железа в среде, могут быть использованы в дальнейшем как основа совершенствования питательных сред для лабораторной диагностики дифтерии. Данные о том, что лизогенная конверсия не только передает способность к образованию дифтерийного токсина, но и вызывает дерепрессию синтеза железозависимых белков у конвертанта, могут стать предпосылкой для поиска среди них белков с антигенной и иммунопротективной активностью. Использованный метод определения лимитирующей рост концентрации железа можно использовать для получения дополнительной индивидуальной характеристики штаммов. Этот количественный критерий, возможно, будет полезен при эпидемиологическом мониторинге циркулирующих штаммов С. ИрЫЬепае. Потребность в источнике железа для роста у штаммов С. ИрМЬепае имеет выраженные индивидуальные различия и зависит от биоварианта и вида источника железа. Спектр железозависимых клеточных белков варьирует у разных штаммов и не связан с биовариантом у токсигенныхштаммов способность к синтезу дифтерийного токсина ассоциирована с более широким, по сравнению с нетоксигенными штаммами, спектром клеточных белков. Диссертация изложена на 6 страницах, иллюстрирована 9 таблицами и рисунками. Указатель цитированной литературы включает 0 источников, из них на русском языке. Материалы диссертационной работы доложены на двух конференциях молодых ученых НИИВС им. И.И. Мечникова Москва, , гг. По теме диссертации опубликовано 6 работ 2 в центральной печати и 4 в тезисах докладов.