Усовершенствование лабораторной диагностики сальмонеллезов групп A, B, C, D, E на основе иммунофлуоресцентного анализа

• Автор: Шаронова, Елена Ивановна
• Шифр специальности: 03.00.07
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2003
• Место защиты: Пермь
• Количество страниц: 118 с. : ил

Следует отметить, что арсенал таких методов достаточно разнообразен метод импедансной микробиологии, хроматомассспектрометрический метод, полимеразная цепная реакция, радиоиммунологический анализ и др. Поэтому, в настоящее время, ведущее значение в подтверждении диагноза принадлежит бактериологическому методу индикации возбудителя. Однако, низкая чувствительность, продолжительность и трудоемкость данного метода, не удовлетворяют потребности практического здравоохранения, что обуславливает необходимость разработки новых более эффективных методов обнаружения сальмонелл
Одним из наиболее доступных и высокочувствительных экспрсссметодов индикации сальмонелл является прямой метод флуоресцирующих антител 0, 2. А, В, . Применение пМФА ограничено отсутствием коммерческих иммуноглобулинов к сальмонеллам групп С и В, а также наведенной неспецифической флуоресценцией ННФ, обусловленной эффекторными свойствами фрагментов интактных молекул флуоресцирующих иммуноглобулинов. Имеются сведения о том, что использование флуоресцирующих фрагментов иммуноглобулинов для индикации других грамотрицательных бактерий способствует снижению ННФ и позволяет объективно и достоверно оценивать результаты пМФА 9, ,0. Перечисленные выше предпосылки побудили нас к проведению настоящего исследования, целью которого явилась разработка поливалентных флуоресцирующих фрагментов иммуноглобулинов к сальмонеллам групп А, В, С, , Е для усовершенствования диагностики сальмонеллезов на основе прямого иммунофлуоресцентного анализа. Разработать комплексный иммуноген . А, В, С, , Е. Подобрать оптимальные условия иммунизации, обеспечивающие получение специфических высокоактивных сывороток к сальмонеллам. Разработать методику получения поливалентных флуоресцирующих фрагментов иммуноглобулинов на основе сывороток к . Научная новизна. Разработаны критерии оценки качества антигенов сальмонелл групп А, В, С, , Е и получен комплексный иммуногеи . Рекомендована оптимальная схема иммунизации экспериментальных животных, обеспечивающая получение специфических высокоактивных сывороток к сальмонеллам групп А, В, С, , Е. Модифицирован способ получения и оценена диагностическая значимость поливалентных флуоресцирующих фрагментов иммуноглобулинов для экспрессиндикации сальмонелл групп А, В, С, , Е в материале различного биологического происхождения. На основе иммунофлуоресцентного анализа с использованием поливалентных флуоресцирующих фрагменгов иммуноглобулинов предложен способ выявления жизнеспособных и инактивированных клеток сальмонелл. Теоретическое и практическое значение работы. Полученные данные расширяют представление о способах повышения качества флуоресцирующих конъюгатов, предназначенных для экспрессдиагностики сальмонелл групп А, В, С, , Е. Результаты исследования могут быть реализованы при конструировании специфических высокоактивных флуоресцирующих конъюгатов к другим представителям энтеробактерий. Разработана технология приготовления поливалентных флуоресцирующих фрагментов иммуноглобулинов и положительно оценена их пригодность для обнаружения сальмонелла групп А, В, С, , Е в образцах клинического материала и пищевых продуктов. А, В, С, , Е Приоритетная справка по заявке от 8 февраля г на изобретение Способ выявления жизнеспособных сальмонелл. Высокоактивный комплексный антиген . А, В, С, , Е, пригоден в качестве иммуногена. Иммунизация экспериментальных животных по разработанной схеме, предусматривающей внутримышечную и внутривенную аппликацию комплексного иммуногена . Для получения поливалентных флуоресцирующих фрагментов иммуноглобулинов к сальмонеллам с сохранением их специфической активности на уровне исходных иммуноглобулинов целесообразно применение щадящего ферментолиза, предусматривающего снижение дозы папаина до I мг и восстанавливающего реагента цистеина до 0,1 мг. Использование диагностического препарата, приготовленного на основе поливалентных флуоресцирующих фрагментов иммуноглобулинов, позволяет выявлять сальмонеллы групп А, В, С, , Е и их антигены в материалах различного биологического происхождения. Апробация работы и публикации.