Новый подход к оценке патогенного потенциала клинических штаммов Candida albicans

• Автор: Лисовская, Светлана Анатольевна
• Шифр специальности: 03.00.07
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2008
• Место защиты: Казань
• Количество страниц: 129 с. : ил.

1.1 Особенности систематики дрожжеподобиых грибов

i i

1.2 Структурно функциональная характеристика клетки

i i

1.3. Цитологические особенности клетки в различных условиях роста

1.4. Морфология гриба i i

1.5. Распространение i i в природе.

1.6. Кандиданосительство и кандидоз.

1.7. Патогенез и клинические проявления.

1.8. Адгезия и адгезины С. i.

1.8.1. Рецепторы клеточной стенки.

1.8.2. Адгезия к белкам экстрацеллюлярного матрикса.
1.8.3. Маннановые адгезины и другие связывающие белки.
1.9. Существующие модели i vi для изучения адгезии штаммов
1 Антигены С. i .
. Динамика антигенной структуры.
1 Экстракция компонентов клеточной стенки.
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
Глава 2.МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1. Объекты исследований.
2.1.1. Выделение и посев материала, количественный учет
клеток С. i
2.1.2. Идентификация грибов С. i.
2.2. Питательные среды
2.3. Растворы и реактивы
2.4. Аппаратура и техника измерений.
2.4.1.Устройство амперометрического штуноферментного сенсора
2.5. Определение уровня адгезии штаммов С. i.
2.5.1. Приготовление нитроцеллюлозной пленки
2.5.2 Иммобилизация белков на нитроцеллюлозi пленку.
2.5.3. Приготовление суспензии клеток С. i.
2.5.4. Определение количества адгезировавшихся клеток.
2.6. Влияние химических и биологических веществ на адгезию
клеток С. i
2.6.1. Влияние трипсина и маннопротеидного антигена клеточной стенки С. i на адгезию клеток
2.6.2. Влияние экстракта мицелиалъных грибов на адгезию
клеток С. i
2.7. Обработка экспериментальных данных.
2.8 Определение содержания количества антигена клетками С. i
2.8.1. Получение антигенов
2.8.2. Определение концентрации антигена С. i
Глава 3.РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.
3.1. Разработка модели адгезии С. i на нитроцеллюлозной пленке
3.1.1. Изучение связывания клеток гриба.
3.1.2. Выбор условий проведения процесса адгезии
3.1.3. Тестирование модели адгезии клиническими штаммами
С. i, выделенными из различных мест локализации
3.2. Сопоставление адгезивных характеристик штаммов как критерий оценки адекватности различных моделей адгезии.
3.3. Изучение влияния трипсина и маннопротеидного антигена
на адгезию клеток.
3.4. Адгезивные свойства клинических штаммов с различной
степенью чувствительности к противогрибковым препаратам.
3.5. Использование модели на основе нитроцеллюлозной пленки с иммобилизованным гемоглобином для изучения адгезивных свойств штаммов i i при кандидозах различной локализации.
3.5.1. Адгезивные свойства штаммов С.i выделенных с поверхности кожи
3.5.2. Адгезивные свойства штаммов С.i, выделенных со слизистых ротовой полости.
3.5.3. Адгезивные свойства штаммов С.i выделенных со слизистых влагалища.
3.5.4. Адгезивные свойства клинически незначимых штаммов С.i различной локализации.
3.6. Адгезивные свойства штаммов С. i в микробных ассоциациях с мицелиальными грибами.
3.7. Сопоставление адгезивных и антигенных свойств клинических штаммов
основных факторов патогенности С. i.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
Аг антиген
АД атопический дерматит бутирилтиохолин
БТХИ иодид
БСА Бычий сывороточный альбумин
ИФС амперометрический иммуноферментный
ХКК хронические формы кандидоза
ХМК хронический микоз кожи
ХЭ бутирилхолинэстераза
ЧСА человеческий сывороточный альбумин
ЭЦМ экстрацеллюлярный матрикс
i i
i i
А иммуноглобулин А
iii
секретируемые аспартилпротеиназы
i
ВВЕДЕНИЕ


Таким образом, поскольку адгезия гриба к клеткам и тканям макроорганизма является первоначальной ступенью инвазии грибковых клеток и одним из основных факторов патогенности, приводящей к развитию кандидоза, было бы чрезвычайно интересно изучить адгезивные свойства клинических штаммов с целью выяснения их связи с особенностями проявления заболевания. В этом плане представляет интерес разработка легко воспроизводимого метода определения адгезивной активности штаммов. Существующие в настоящее время модели адгезии изза разнообразия условий существования штаммов, приводящей к выборочной экспрессии различных механизмов адгезии не являются абсолютно адекватными и удобными для исследования большого количества штаммов ,,. Цель и задачи исследования. Целыо работы явилось изучение основных факторов патогенности адгезии и уровня антигенов у различных клинических штаммов С. Разработать новую модель для определения адгезивных свойств дрожжеподобных грибов. Исследовать адгезивные свойства штаммов, выделенных от больных с кандидозами различной локализации. Изучить и сопоставить два различных по своему характеру факторов патогенности адгезины и антигенная активность с учетом конкретной локализации грибов. Оценить влияние присутствия прочих патогенных и условнопатогенных грибов на адгезивные свойства С. Научная новизна работы. Предложена доступная модель оценки адгезивной активности С. Используемая пленка имеет постоянные свойства, что позволяет проводить исследование большого количества штаммов в идентичных условиях, тем самым, делая возможной стандартизацию предлагаемого метода определения адгезивных свойств. Впервые проведено сопоставление адгезивной и антигенной активности . Исследования показали отличия в биологических и биохимических свойствах штаммов, в том числе, в зависимости от их мест локализации в макроорганизме. Выявлена корреляция между различными характеристиками вирулентных свойств кандид. Штаммы с высоким процентом адгезии содержали большое количество антигена в клетках. Изучено влияние условий культивирования штаммов на экспрессию факторов патогенности. Подобраны оптимальные условия состав среды культивирования, температура, среды инкубации и т. Практическая ценность работы. Предложена доступная и легко воспроизводимая модель определения уровня адгезии штаммов дрожжеподобных грибов. Использование предлагаемой модели помогает быстро дифференцировать патогенные и непатогенные штаммы но проявляемому ими уровню адгезии к белкам в частности, гемоглобину. Использование комплексного подхода к изучению патогенных свойств штамма адгезивной и антигенной активности, позволит систематизировать штаммы по их способности быстро колонизировать, инфицировать, и избегать защитные механизмы макроорганизма. Результаты исследования могут быть использованы как один из критериев диагностики кандидоза и прогнозирования микотических осложнений у больных с иммунодефицитами. Разработана модель i vi для определения адгезивных свойств дрожжеподобных грибов с использованием иммобилизованного гемоглобина в качестве субстрата адгезии. Выявлены значительные различия в адгезивных свойствах среди лабораторных и клинических штаммов С. Адгезия и антигенная активность клинических штаммов С. Разработан и рекомендуется к применению новый способ оценки патогенного потенциала клинических штаммов С. Апробация работы. Результаты работы докладывались и обсуждались на научнопрактической конференции Актуальные проблемы дерматовенерологии. XXI век Казань, , Научнопрактической конференции по медицинской микологии VIII Кашкинские чтения, С. Петербург, г. IX Всероссийском Съезде дерматовенерологов Москва, г. IV Всероссийском конгрессе по медицинской микологии Москва, г. IX Кашкинских чтениях С. Петербург, г. V Всероссийском конгрессе по медицинской микологии Москва, г. X Кашкинских чтениях С. Петербург, г. XVII Национальном конгрессе по болезням органов дыхания Казань, г. Публикации По теме диссертации опубликовано работ. Из них 4 статьи и тезисов докладов на всероссийских конференциях. Структура и объем работы Диссертация изложена на 0 страницах машинописного текста, содержит таблиц и 2Л рисунков. Работа состоит из введения, трех глав, заключения, выводов и списка литературы. Список литературы включает 4 источника в том числе 0 иностранных автора.