Изучение биологических свойств выделенных бактериофагов Yersinia enterocolitica и разработка на их основе технологии индикации и идентификации возбудителя кишечного иерсиниоза

• Автор: Коритняк, Богдан Михайлович
• Шифр специальности: 03.00.07, 03.00.23
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2005
• Место защиты: Ульяновск
• Количество страниц: 164 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Характеристика бактерий вида У еЫегосоНИса

1.2. Распространение и резервуар кишечного иерсиниоза

1.3. Лабораторная идентификация вида V еЫегосоШса

1.4. Бактериофаги и их применение в лабораторной практике

1.4.1 .Фагоидентификация бактерий и фаготипирование

1.4.2. Выделение бактериофагов

1.4.3. Чувствительность бактерий вида У еЫегосоШса

1.4.4. Реакция нарастания титра фага РНФ
II. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Материалы и методы
2.1.1. Материалы .ч
2. Методы
2.2. Результаты собственных исследований
2.2.1. Поиск бактериофагов У епегосо1Шса и селекция
клонов фагов
2.2.2. Характеристика выделенных фагов бактерий вида
У еШегосоНпса
2.2.3. Определение температурных параметров
культивирования выделенных бактериофагов
2.3. Разработка метода выделения и ускоренной идентификации бактерий вида У еШегосоИИса спользованием фагов
2.4. Разработка оптимальных условий постановки РНФ
бактерий вида У етегосоШса с использованием фагов
2.4.1. Определение количественного показателя РНФ, имеющего диагностическое значение
2.4.2. Установление оптимального времени, обеспечивающего наиболее полноценное взаимодействие фага с бактериями
2.4.3. Использование РНФ для обнаружения бактерий вида У. еЩегосоПбса в объектах внешней среды
2.4.3.1. Исследование водопроводной воды, коитаминированной бактериями вида У. еШегосоШгса с помощью РНФ
2.4.3.2. Исследование комбикорма, контаминированного бактериями вида У етегосоИНса с помощью РНФ
2.4.3.3. Исследование проб фекалий, контаминированиых бактериями вида У. еЫегосоЛЛса с помощью РНФ
2.4.3.4. Исследование мяса, контаминированного бактериями вида У етегосоЛЛса с помощью РНФ
2.4.3.5. Результаты выделения бактерий вида У. еМегосоИЛса
из сточных вод хозяйств Самарской области
2.5. ОБСУЖДЕНИЕ
ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ ЛИТЕРАТУРНЫХ
ИСТОЧНИКОВ
ПРИЛОЖЕНИЯ
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
ВТ веротоксин
ГБМ грамотрицательные бактерии менингитов
ГОБ грамотрицательные бактерии
ГУС гемолитический уремический синдром
ДГТ дегидрогеназный тест
ДНК дезоксирибонуклеиновая кислота
КОЕ колонии образующая частица
ЛПС липополисахарид
МПА мясопептонный агар
МПБ мясопептонный бульон
МПЖ мясопептонная желатина
ОВТ окислительновосстановительный тест
ОКИ острые кишечные инфекции
РА реакция агглютинации
РНФ реакция нарастания титра фага
РИГА реакция пассивной гемагглютинации
СМЖ спинномозговая жидкость
У ПБ условнопатогенные бактерии
ЦНС центральная нервная система
ЭПЭ энтеропатогенные эшерихии
ЕРЕС энтеропатогенные кишечные палочки
1ЛЭ летальная доза
ЬТ термолабильный энтеротоксин
БТ термостабильный энтеротоксин
ВВЕДЕНИЕ
Актуальность


При С и низком содержании кальция активизируются продуцирование липополисахаридов, мембранных белков образующих фибриллярный слой ii, , , , ii , i , , i, . Бактерии вида ii факультативные анаэробы, обладают психофильными свойствами. Оптимальная температура роста при С, минимальная 2С v, i i V, i, ii, , максимальная i, , Ющенко, . Оптимальной средой для роста является среды 7,27,6, но возбудитель может расти при от 3. i , . Иерсинии нетребовательны к питательным веществам, растут на обычных питательных средах МПА, агаре Хоттингера и бульоне Хоттингера, средах Эндо, ЭМС, Плоскирева, Серова, иерсиниозно псевдотуберкулезная среда с бромтимоловым синим, агаре МакКоники, агаре. Хорошо растут на шоколадном и кровяном агарах, в МПБ, 1 пептонной воде. Для данных бактерий характерна олигофридность, т. Ющенко, Дулатова, Ценева и др. Смирнов, Зыкин, Щербаков, Хапцев, . На плотных средах МПА, агаре Хоттингера и др. Через часов культивирования размер колоний увеличивается до 0,81 мм и они приобретают сероватый оттенок Ющенко, Дулатова, . Культуры иерсиний, длительно хранившиеся в условиях холодильника или выращенные при температуре С часто диссоциируют с переходом от Б в Яформу, что проявляется образованием различных по форме колоний на плотных питальных средах, а также морфологическими отличиями клеток преобладание в мазках коккоподобных бактерий, располагающимися нередко короткими цепочками. На агаре Эндо вырастают мелкие, круглые, росинчатые бесцветные колонии. На вторые сутки колонии увеличиваются в диаметре, и приобретают розовый оттенок иногда в центре колонии розовая точка. На среде Серова вырастают колонии округлой формы с неровными краями, с чуть, сосцевидновыпуклым центром, темнокрасного цвета. Колонии матовые, суховатые, при снятии, петлей легко сдвигаются по агару. На иерсиниознопссвдотуберкулезная среда с бромтимоловым синим, вырастают круглые, гладкие колонии голубого цвета, в диаметре до 2 мм. Через часов роста голубоватозеленые колонии с фестончатым краем. На данных средах проводится отбор характерных колоний, для проведения дальнейшего определения био и сероваров при помощи биохимических тестов Цснева и др. Смирнов, Смирнов, Ценева, Зыкин, Щербаков, Хаицев, . Бактерии У. У. ii сбраживает до кислоты многие спирты и углеводы, есть отдельные указания на выделение некоторыми штаммами иерсиний небольшого количества газа. Ющенко, . Ферментативная активность кишечных иерсиний зависит от температуры культивирования, что подтверждается результатами тестов ФогестПроскауэра и с метилротом при С и С. vi , . Сведения о биохимической активности У. У. ii в первые сутки культивирования ферментирует глюкозу, галактозу, манит, глицерин способны ферментировать сахарозу и сорбит при отсутствии фермента салицина, эускулина, и обладает ферментом каталазой, неактивна в отношении арабиназы, арабитола, фруктозы дульцита, рамнозы, раффинозы, лактозы. У патогенных для человека варианты бактерий присутствуют салицин, индол, ксилоза, трегалоза, и отсутствует пиразинамидазная активность. Периодически встречаются лактозопозитивные варианты среди сероваров 05, 07,8 Ющенко, Дунаев, Ценева, . Штаммы иерсиний, выделенные из различных объектов, не обладают плазмолитической, фибринолитической и протсолитической активностями, не утилизируют цитрат на средах Симонса и Кристенсена, дают положительную реакцию с метиловым красным. Также для данных бактерий характерна сорбция красителей кристаллического фиолетового, Конго красного, восстанавливают нитраты в нитриты. . i i, i . . Иерсинии не ферментируют мелибиозу, инулин, не ферментирует декстрин, не разжижает желатин не обладает ферментами оксидаза, аргининдегидрогеназой, фенил апаниндезаминазой, лизиндскарбоксилазой, триптофандезаминазой, амилазой не продуцирует сероводород. Мочевину полностью ферментирует на вторые сутки при С.