Молекулярно-генетическое определение микобактерии туберкулеза у больных различными формами туберкулеза

• Автор: Носова, Елена Юрьевна
• Шифр специальности: 03.00.07
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2002
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 77 с.

Оглавление

Список сокращений.

Введение

Часть 1. Обзор литеразуры

Глава 1. Лабораторные методы выявления .i

Глава 2. Молекулярногенетические методы выявления .i

Глава 3. Полимеразная цепная реакция как наиболее простой и эффективный молекулярногенетический метод выявления .i.

Часть 2. Собственные исследования

Г лава 4. Материал и методы исследования.

4.1. Пациенты и клинические образцы.

4.2. Забор материала

4.3. Обработка образцов.
4.3.1. Обработка осадков образцов для
i.
4.3.2.0бработка осадков образцов для Нестед
4.4. Проведение анализа.
4.4.1. Приготовление реакционной смеси для ПЦР на i.
4.4.2. Приготовление реакционной смеси для НестедПЦР.
4.5. Регистрация и анализ продуктов амплификации
4.5.1. Анализ результатов на i.
4.5.2. Анализ результатов после проведения НестедПЦР.
4.6. Чувствительность и специфичность i
.i теста
4.7.0пределение чувствительности НестедПЦР
4.8.0пределение специфичности НестедПЦР.
4.9.Стандартные характеристики системы.
Глава 5. Сравнительный анализ ПЦР с микробиологическими
методами выявления .i
Глава 6. Эффективность выявления .i у больных разными формами туберкулеза с помощью вариантов метода ПЦР
Глава 7. Результаты применения ПЦР для контроля за эффективностью проводимого лечения
Глава 8. Результаты выявления .i с помощью ПЦР у пациентов в случае дифференциальной диагностики заболеваний легких.
Заключение.
Выводы.
Список литературы


Список сокращений. Часть 1. Глава 1. Лабораторные методы выявления . Глава 2. Молекулярногенетические методы выявления . Глава 3. Полимеразная цепная реакция как наиболее простой и эффективный молекулярногенетический метод выявления . Часть 2. Г лава 4. Материал и методы исследования. Пациенты и клинические образцы. Обработка образцов. i. Проведение анализа. Приготовление реакционной смеси для ПЦР на i. Приготовление реакционной смеси для НестедПЦР. Анализ результатов на i. Анализ результатов после проведения НестедПЦР. НестедПЦР. Стандартные характеристики системы. Глава 5. Глава 6. Эффективность выявления . Глава 7. Глава 8. Результаты выявления . ПЦР у пациентов в случае дифференциальной диагностики заболеваний легких. Заключение. Выводы. Актуальность р5оты. В последние годы эпидемиологическая ситуация по туберкулезу как в России, так и за рубежом значительно ухудшилась, возросли заболеваемость и смертность Приймак . ., Шилова М. В., Сон И. М., Кучеров А. Л., . Существенно увеличилось число больных с тяжелыми и хроническими формами, особенно с лекарственноустойчивым туберкулезом Хоменко А. Г., Голышевская В. И., . ., . Диагностические затруднения при туберкулезе общеизвестны. Это связано в первую очередь с клинической универсальностью туберкулеза, способного поразить любые органы и ткани, с разрывом по частоте между инфицированием и развитием туберкулеза как болезни, медленным ростом возбудителя и сложностью его выделения непосредственно из клинического материала, трудностью выявления измененных, ультрамелких форм, способных персистировать в организме человека Нестеренко Л. Н., Аксенов М. Ю., Борисов С. Е., . В связи с этим проблема раннего выявления возбудителя туберкулеза в последние годы стала особенно актуальной. Классические методы диагностики туберкулеза, такие как бактериоскопия, культуральный, иммуноферментный, цитологический весьма эффективны, но отличаются или недостаточной чувствительностью, или длительностью выявления i i МБТ Радюк С. Н., Рыжов К. А., . Развитие и совершенствование молекулярнодиагностических методов открыло новые перспективы для быстрого выявления микобактерий в клинических образцах. Наиболее широко распространенным методом является полимеразная цепная реакция ГПДР, в основе которой лежит амплификация специфического участка ДНК возбудителя. ii Т. V. 1. i . Существуют различные тестсистемы для ПЦРдиагностики туберкулеза, которые позволяют обнаружить возбудитель за короткий промежуток времени даже у больных со скудным бактериовыделением или в случаях, когда возбудитель находится в латентной фазе или в замороженных образцах. Все они высокоспецифичны. Чувствительность же, по данным из разных литературных источников, составляет vii . . i . v . В то же время эффективность выявления . ПЦР существенно колеблется при различных формах туберкулеза и в зависимости от стадии процесса и эффективности лечения Стаханов В. А., Леви Д. Т., Владимирский М. А., Черноусова Л. Н., Ларионова Е. Е., . Эти данные весьма противоречивы и, по существу, нет работ, в которых была бы сделана попытка обобщения результатов применения различных вариантов ПЦР и ее сравнения с другими современными методами диагностики, прежде всего культуральными, что и явилось целью данного исследования. Цель работы определить эффективность выявления . ii и нестедПЦР. Задачи работы. Проанализировать выявляемость . ПЦР по сравнению с другими лабораторнодиагностическими тестами, прежде всего культуральными методами определения микобактерий. Оценить эффективность использования ПЦР для выявления .