Молекулярно-генетические маркеры риска генерализованного пародонтита и их применение в диагностике

• Автор: Николаева, Елена Николаевна
• Шифр специальности: 03.00.07
• Научная степень: Докторская
• Год защиты: 2008
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 301 с. : 84 ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

Перечень условных обозначений.

Введение

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Концепция факторов риска заболеваний

1.2. Микробы факторы риска пародонтита.

1.2.1. Пародонтопатогенные бактерии индикаторы риска

пародонтита.

1.2.2. Современные представления о роли вирусов семейства

vii в этиопатогенезе пародонтита

1.3. Генетические факторы риска пародонтита

2. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА БОЛЬНЫХ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Методы лабораторных исследований
2.1.1 Забор исследуемого материала
2.1.2. Определение ДНК v ii, i
, i, ii ii и iiv i с помощью набора реактивов Мультиденг 5
2.1.2.1. Выделение ДНК.
2.1.2.2. Амплификация ДНК
2.1.2.3. Детекция продуктов амплификации.
2.1.3. Определение ДНК пародонтопатогенов с помощью набора реактивов i3 i ii
2.1.3.1. Полимеразная цепная реакция.
2.1.3.2. Выявление пародонтопатогенных бактерий методом
обратной гибридизации.
2.1.4. Определение ДНК вирусов семейства vii
2.1.4.1. Идентификация ДНК V, V 1,2 и V с помощью
Детекция ДНК V, V 1,2 и V методом электрофореза в агарозном геле.
Типирование генов .
Выделение ДНК из соскобов слизистой щеки
Клонирование выделенной ДНК.
Регистрация результатов.
Изучение полиморфизма генов I 1а и I .
Выделение ДНК из исследуемого образца.
Проведение ПЦР
Детекция продуктов амплификации методом обратной
гибридизации
Микробиологическое исследование.
Забор исследуемого материала
Выделение чистых культур и их идентификация.
Иммуноферментный анализ содержания антител к vi, ix 1,2 vi и i vi тврдофазным методом в сыворотке крови
Методы клинического обследования пациентов
Определение гигиенического индекса полости рта
Оценка папиллярномаргинальноальвеоляриого индекса
Изучение степени кровоточивости десны после зондирования.
Определение глубины пародонтальных карманов.
Исследование степени подвижности зубов
Определение пародонталыюго индекса
Рентгенологические методы исследования
Характеристика обследованных пациентов
2.5. Статистические методы и критерии.
СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
3. РАЗРАБОТКА ТЕСТ СИСТЕМЫ ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ДНК
ПАРОД ОНТОПАТ ОГЕННЫ X МИКРОБОВ С ПОМОЩЬЮ МО
ЛЕКУЛЯРНО ГЕНЕТИЧЕСКИХ МЕТОДОВ
3.1. Разработка набора реактивов для определения ДНК пародонтопатогенных микробов v ii i, i , i, ii ii, iivi при помощи мультиплексной полимеразной цепной реакции.
3.2. Анализ информативности молекулярногенетических
маркеров для диагностики и контроля лечения воспалительных заболеваний пародоита, вызванных анаэробными микробами.
3.2.1. Изучение особенностей состава пародонтопатогенной
микрофлоры у больных ХГП
3.2.2. Апробация набора реактивов Мультидент 5 при раз
личных воспалительных заболеваниях ротовой полости и челюстнолицевой области.
3.2.3. Апробация набора реактивов Мультидент 5 при мониторинге эффективности проводимого лечения.
4. ИССЛЕДОВАНИЕ ОСОБЕННОСТЕЙ ВИДОВОГО СОСТАВА
ОСНОВНЫХ ПАРОДОНТОПАТОГЕНОВ У ПАЦИЕНТОВ С
ХРОНИЧЕСКИМ ГЕНЕРАЛИЗОВАННЫМ ПАРОДОНТИТОМ И
У ЛИЦ СО ЗДОРОВЫМ ПАРОДОНТОМ
4.1. Результаты клинического обследования пациентов
4.1.1. Характеристика обследованных пациентов. Принципы
разделения на группы
4.1.2. Результаты индексных оценок
4.2. Изучение особенностей состава пародонтопатогенов
iivi, v ii, i , ii ii и i с помощью тест системы Мультидент5
4.3. Результаты исследования состояния специфического противовирусного иммунитета.
4.4. Исследование особенностей состава вирусов семейства
vii с помощью ПНР
4.5. Особенности состава пародонтопатогенов в зависимости
от присутствия вирусов семейства vii.
4.6. Оценка взаимосвязи пародонтальных индексов с ассоциациями пародонтопатогенов.
4.7. Анализ влияния вирусов на значения пародонтальных
индексов.
4.8. Аллельный полиморфизм генов I и I у больных
хроническим генерализованным пародонтитом
4.9. Полиморфизм генов класса II в норме и у пациентов
с воспалительными заболеваниями пародонта
5. РАЗРАБОТКА АЛГОРИТМОВ ДИАГНОСТИКИ ХГП НА ОСНОВЕ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИХ И ИММУНОГЕНЕТИЧЕ
СКИХ ПОКАЗАТЕЛЕЙ.
5.1. Корреляционный анализ предикторов с целыо их афеги
рования
5.2. Изучение зависимости глубины пародонтального кармана
от агрегированных переменных факторов
5.3. Анализ зависимости степени тяжести заболевания от агрегированных предикторов.
5.4. Алгоритм экспресс диагностики степени тяжести хронического генерализованного пародонтита по микробио
логическим показателям
6. ОБСУЖДЕНИЕ
ЗАКЛЮЧЕНИЕ.
ВЫВОДЫ
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Бактериальные протеиназы индуцируют экспрессию, секрецию и активацию латентных форм матриксных металлопротеиназ организма хозяина, влияют на локальное накопление у интерферона и фенотип и 2 при пародонтите 5, 1. ЛПС наиболее важный амфифильный компонент наружной мембраны грамотрицательных бактерий, повышающий ее структурную целостность и биологическую активность. ЛПС . А и биологической активности 0. Он индуцирует экспрессию провоспалительных цитокинов и хемокинов моноцитами и макрофагами, обусловленную активацией 4 и или 8, 2. Интересно отметить, что десневые фибробласты более резистентны к медиаторам воспаления, индуцированных ЛПС . Это может быть связано с низкой экспрессией 2 и 4 на десневых фибробластах. В отличие от энтерального ЛПС . I5, I и I и низкие уровни у интерферона 5. В то время как 4 является основным трансмембранным рецептором для ЛПС грамотрицательных бактерий, 2 является ключевым компонентом при ответе на дрожжи и грамположительные бактерии 1. Возможным исключением являете я ЛПС . Индукция 2 мышиных макрофагов ЛПС . ЛПС . Важно отмстить, что уровень сывороточных антител к . ОШ ,8, Р 0,1 0 5. Таким образом, ЛПС . Действительно, . При инвазии клеток усиливаются вирулентные свойства бактерий и воспалительный ответ 0. Инфицирование . З8, , I3, каликриина и , что приводит к индукции гипертрофии Н9с2 кардиомиобластов. Р ii такими свойствами не обладают 6. Динамические исследования роли . Так как . В. , обсуждать роль одного вида микробов без другого практически невозможно 5. Некоторые авторы считают, что В. Так, при гингивите В. Е.Е. В. 8. При обследовании 5 человек с воспалительными заболеваниями пародонта в течение 2 лет с интервалом в 6 месяцев авторы показали, что встречаемость тяжелых форм пародонтита не является слишком высокой. Было показано, что Р. В. выявляют с высокой частотой как у пациентов с потерей зубодесневого прикрепления, так и с положительной динамикой. Наличие любого из этих видов микробов в определенном участке не является прогностическим фактором потери зубодесневого прикрепления в будущем. Однако, постоянное присутствие В. Авторы сделали заключение, что наличие В. У пациентов с тяжелой степенью пародонтита выявляли значительные количества . В. 9. В участках с воспалением определяли гораздо больше . В. 2, 0, по сравнению со стабильными участками. Позднее была подтверждена важная роль В. I выявили корреляцию прогрессирования пародонтита с наличием . В этом исследовании . ОШ . При этом и положительные, и отрицательные прогностические показатели были относительно высокими, соответственно, и 0. Однако В. В. и . В ряде работ была выявлена небольшая, но статистически значимая корреляция между клинической потерей зубодесневого прикрепления и персистенцией или повторным восстановлением патогенной микрофлоры 9, 1, 7, 6. Таким образом, наличие . ХГТТ и снижает вероятность достижения положительных результатов при проведении терапевтических мероприятий. Основными представителями биопленки, непосредственно прилегающей к десневому эпителию, являются пигментообразующие бактрии v i и v ii. Эти микробы одними из первых колонизируют ротовую полость вначале инфекционного процесса, связываясь или прилипая к другим бактериям и эпителиальным клеткам. Инвазия бактерий из биопленки в соединительную ткань считается особенно важным этапом патогенеза пародонтита 7. Факторами вирулентности этих бактерий являются мембранно ассоциированные протеиназы, ЛПС и цитотоксические конечные продукты метаболизма, которые способствуют дефадации тканей организма хозяина. Цистеиновые протеазы . ЛПС. В дозозависимой манере они снижают экспрессию I специфической на активированных ЛПС макрофагоподобных клетках 7 и ТНР1 0, 1. Гликопротсиновая фракция . I1 на десневых фибробластах, продукцию I 8, фанулоцитарного колониестимулирующего фактора и ГМСФ эпителиальными клетками 9. Штамм Р. В многочисленных исследованиях было показано, что Р. Этот вид пародонтопатогенов чаще выявляют в участках с профессирующим воспалительным процессом, чем в стабильных участках .