Микробиологические и технологические аспекты разработки комплексного препарата бактериофагов

• Автор: Функер, Елена Викторовна
• Шифр специальности: 03.00.07
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2007
• Место защиты: Пермь
• Количество страниц: 102 с. : 52 ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

Список основных сокращений.

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. БАКТЕРИОФАГИ СВОЙСТВА, ПЕРСПЕКТИВЫ

ПРИМЕНЕНИЯ И ПРОИЗВОДСТВА.

1.1. Бактериофаги. Физикохимические и антигенные свойства.

1.2. Устойчивость фагов к факторам воздействия

1.3. Основные стадии взаимодействия фага с бактерией

1.4. Применение бактериофагов

1.5. Технологические аспекты производства лечебнопрофилактических препаратов бактериофагов.

1.6. Препараты бактериофагов. Лекарственные формы

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
ГЛАВА 3. СОЗДАНИЕ ПРОИЗВОДСТВЕННОЙ КОЛЛЕКЦИИ
ШТАММОВПРОДУЦЕНТОВ БАКТЕРИОФАГОВ.
3.1. Характеристика биохимических, тинкториальных, морфологических, культуральных свойств
микроорганизмов.
3.2. Чувствительность штаммов микроорганизмов к бактериофагам.
ГЛАВА 4. ПОЛУЧЕНИЕ КОМПЛЕКСНОГО ФАГОВОГО
ПРЕПАРАТА.
4.1. Разработка универсальной питательной среды
4.2. Создание технологии получения комплексного препарата секстафага
4.3. Характеристика свойств секстафага.
4.3.1. Влияние физикохимических факторов и стабильность
препарата.
4.3.2. Антибактериальная активность препарата
4.3.3. Хроматографический профиль
4.3.4. Электронномикроскопическая характеристика
секстафага
ГЛАВА 5. РАЗРАБОТКА ТЕХНОЛОГИИ И ОЦЕНКА КАЧЕСТВА РЕКТАЛЬНОЙ ЛЕКАРСТВЕННОЙ ФОРМЫ СЕКСТАФАГА
5.1. Особенности получения суппозиториев с бактериофагами.
5.2. Изготовление суппозиториев с комплексным препаратом секстафагом и свойства полученной лекарственной формы.
5.3. Изучение динамики выведения секстафага при пероральном и ректальном путях введения и
применение суппозиториев в клинической практике
ЗАКЛЮЧЕНИЕ.
ВЫВОДЫ.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Пастеровского института дЭрелль фильтровал через свечу Шамберлена испражнения больного тяжелой формой бактериальной дизентерии , 9. Полученный фильтрат в свою очередь был внесен в свежий бульон, в который одновременно засевали дизентерийные бактерии Шига. В этих опытах, многократно повторенных, в пробирках происходил нормальный рост, и только в конце болезни была получена порция испражнений, фильтрат которых растворял бульонную культуру дизентерийного микроба. Последующие фильтрации растворенной культуры и новые добавления фильтратов к свежим культурам позволили дЭрсллю установить, что в таких фильтратах содержится переносимый литический агент. При этом оказалось, что по мере пассажей через бактериальную культуру литическая способность фильтрата увеличивается. Переносимый литический агент был назван бактериофагом. Таким образом, Эдвард Творт и Феликс ДЭррель, независимо друг от друга сообщили о фильтрующихся объектах, способных к разрушению бактериальных культур 9, 9. Литический агент был назван бактериофагом. Можно считать, что феномен бактериофагии был открыт Н. Твортом, а действующее начало, то есть сам бактериофаг, обнаружен ДЭррелем 2. Фаги широко распространены в природе. Их выделяют из воды, почвы, сточных вод, организма животных и человека, молока, испражнений, лабораторных культур микроба 7, , , , 2, 1, 2. В литературе описаны работы по получению новых фагов в результате адаптации кишечных бактериофагов к альтернативным хозяевам. Таким способом, были получены склеромные фаги и сальмонеллсзный фаг 7. Экспериментальная адаптация бактериофага ФХ4 к роду подавляет его способность расти на традиционном хозяине ii, в то время как адаптация к ii не оказывает заметного влияния на рост в . Подавление роста на ii приводит к 23 замещениям в главном капсидном гене 7. Типичная фаговая частица состоит из головки и хвоста. Головка соответствует плотно упакованному ядру с нуклеиновой кислотой, окруженной белковой оболочкой капсид. Белковый капсид головки состоит из идентичных субъединиц, объединенных в призматическую структуру, обычно имеющую гексагональную форму в поперечном разрезе , . Бактериофаги группа вирусов, паразитирующих на бактериях. Им, как и всем вирусам, присущи 3 стадии существования вирион, вегетативный вирус и провирус. На основании формы и строения вириона различают 5 морфологических типов бактериофага по Тихоненко . . . Первый с длинным отростком, футляр которого сокращается, второй с длинным несокращающнмся отростком, третий с коротким отростком, четвертый с аналогом отростка и пятый нитевидный фаг. Первые три морфологические типа содержат двунитчатую ДНК, четвертый однонитчатую ДНК или РНК, пятый тип однонитчатую РНК 6, 6. Например, для фага кишечной палочки отношение размера головки к длине хвоста равно 14, для фага ii 1, для стафилококкового фага 13. ivii, vii с предложенным Аккерманом подразделением на подтипы 1, 2, 3 в соответствии с размером головки рис. Рис. Классификация морфологических типов бактериофагов по БредлиАккерману. Следствием осуществления фагом циклов последовательных инфекций бактерий, растущих на поверхности твердой среды или в полужидком агаре газон, является образование негативной колонии, называемой также иногда стерильным пятном или бляшкой. Вид НК признак, чрезвычайно специфичный для данного фага, иногда для группы родственных фагов. Признаки, которые позволяют отличить НК одного фага от НК другого, разнообразны наличие и размер зоны центрального лизиса наличие, степень и характер роста в этой зоне устойчивых бактерий определяют степень мутности центра НК наличие ореола часто зависит от выделения клетками литических ферментов характер края ровный или рваный, четкий или постепенно переходящий в газон. Специфичен вид НК у умеренных фагов, в их центре обычно растут лизогенные бактерии. Никакой связи между размером НК и размером фаговых частиц нет, хотя ранее считалось, что более мелкие фаги образуют большие НК изза более легкой диффузии частиц.