Генетическая характеристика хромосомной области пигментации штаммов пяти подвидов возбудителя чумы

• Автор: Зудина, Ирина Витальевна
• Шифр специальности: 03.00.07, 03.00.15
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2000
• Место защиты: Саратов
• Количество страниц: 114 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Структурнофункциональная организация области

пигментации нерсиннй

1.1.1. Область пигментации хромосомы К реягй.

1.1.2. Область пигмешации хромосомы энтсропатогснных иерснннй.

1. 1.3. Нестабильность островов высокой патогенности

возбудителя чумы и энтеропатогенных иерснннй

1.2. Фенотипическое проявление признаков, кодируемых генами хромосомной области пигментации, у природных штаммов

пяти подвидов V резпх

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ .
Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1. Бактериальные штаммы
2.2. Питательные среды, препараты и реактивы.
2.3. Методы исследований.
Глава 3. ФЕНОТИПИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ПРИРОДНЫХ
ШТАММОВ ПЯТИ ПОДВИДОВ У. РЕЯТЯ.
3.1. Конструирование полу синтетической среды для определения признака пигментации у штаммов пяти подвидов К. резИз
3.2. Изучение состава клеточной популяции природных пггаммов
У. рехШ по признак пигментации.
3.3. Рост природных штаммов пяти подвидов У. i на питательных средах с дефицитом свободных ионов железа
3.4. роявление признака чувствительности к псстицину
у природных штаммов пяти подвидов чумною микроба 5
Глава 4. СОЗДАНИЕ КОЛЛЕКЦИИ И ХАРАКТЕРИСТИКА
ИЗОГПИНЫХ И МУТАНТОВ ШГАММОВ ПЯТИ ПОДВИДОВ ВОЗБУДИТЕЛЯ ЧУМЫ
4.1. Получение вариактов типовых и референтных
штаммов пяти подвидов У. i.
4.2. Создание коллекции изогеннмх клонов штаммов пяти подвидов . i, мутантных по признакам пигментации и чувствительности к псстицину
4.3. Выявление структурных изменений в тобласти хромосомы мутантных клонов штаммов У. i
4.4. Рост мутантных клонов штаммов возбудителя чумы на питательных средах с пониженным содержанием свободных ионов железа.
4.5. Определение вирулентности изогенных мутантных клонов штаммов чумного микроба.
Глава 5. СРАВНИТЕЛЬНОЕ ИЗУЧЕНИЕ НЕСТАБИЛЬНОСТИ ОЬЛАСТИ ХРОМОСОМЫ У КЛОНОВ ШТАММОВ ПЯТИ ПОДВИДОВ . I
5.1. Определение частоты возникновения мутаций по признаку пигментации.
5.2. Определение частоты возникновения мутаций по признаку чувствительности кпесгицину.,.
5.3. Определение частоты встречаемости и мутаиюв в популяциях клонов штаммов пяти подвидов чумного микроба в процессе хранения.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ.
ВЫВОДЫ.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Создать и охарактеризовать коллекцию изогенных спонтанных мутантов типовых и референтных штаммов пяти подвидов чумною микроба по признакам пигментации, чувствительности к пестицину, способности к росту в условиях дефицита железа при С и вирулентности. Методом ПЦРанализа выявим у полученных мутантов чумного микроба возможные изменения в структуре области пигментации хромосомы. Определить частоты возникновения и встречаемости спонтанных мутантов по признакам пигментации и чувствительности к псстицину у штаммов пяти подвидов возбудителя чумы. На основе полученных данных провести сравнительный анализ процессов популяционной изменчивости по признакам, кодируемым генами области пигментации, у штаммов пяти подвидов возбудителя чумы. Впервые с привлечением статистических методов проведены исследования изменчивости признаков, кодируемых генами хромосомной области пигментации штаммов пяти подвидов чумного микроба. Установлены достоверные различия в частотах возникновения и встречаемости мутантов по признакам пигментации и чувствительности к пестицину у штаммов основного и неосновных подвидов возбудителя чумы. Показано, что у штаммов основного подвида наиболее часто происходят обширные делении области пигментации и мутации в генах Лрегнона. У штаммов неосновных подвидов, наоборот, более часто возникают мутации в генах Ллюрегиона. Получены новые сведения о различном характере накопления мутантных клеток в популяциях штаммов разных подвидов в процессе хранения при пониженных температурах. На основании этих данных можно заключить, что штаммы основного и четырех неосновных подвидов представляют собой две обособленные группы в пределах вида У. Ня. Впервые создана коллекция изотенных мутантных по Нтя и Ряппризнакам вариантов типичных штаммов пяти подвидов чумного микроба. В результате использования этой изогенной системы у штаммов неосновных подвидов возбудителя чумы был определен характер взаимоотношения признаков пигментации, чувствительности к пестицину и способности к росгу при С на железохелатированных средах с вирулентостью для белых мышей. Показано, что у штаммов трех неосновных подвидов гиссарского, алтайского и удэгейского, как и у штаммов основного подвида, вирулентность для белых мышей коррелирует с Рядпризнаком и со способностью к росту на средах с дефицитом ионов железа при С. У отдельных штаммов кавказского подвида отсутствует четкая корреляция между экспрессией Ряппризнака и вирулентностью. С помощью сравнительного ПЦРанализа впервые показано, что у штаммов, циркулирующих в природных очагах чумы на территории стран ОIIи Монголии, утрата одного из признаков пигментации или чувствительности к пестицину, как правило, обусловлена не обширными делениями Ьпх или рсгионов. НР1 и ИюПИоиерона области пигментации. Лрегионов. ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ. В Г осударственной коллекции патогенных бактерий РосНИПЧИ Микроб депонирована коллекция изогенных спонтанных мутантов по признакам пигментации и чувствительности к пестицину, выделенных из популяций клонов типовых и референтных штаммов пяти подвидов чумного микроба штаммов. По результатам работы составлены Методические рекомендации по приготовлению и использованию полусинтстичсскок среды для дифференциации колоний . Ученым советом Российского научноисследовательского противочумного института Микроб протокол 3 от марта г. РосНИПЧИ Микроб по учрежденческому уровню внедрения. АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ. Материалы диссертации представлены и доложены на Научнопрактической конференции, посвященной 0летию образования противочумной службы России Саратов, , научной конференции учреждений по борьбе и изучению природноочаговых инфекций Министерства Здоровья и Социальной Зашиты УланБатор. Монголия, , итоговой научной конференции Рос. НИПЧИ Микроб Саратов, и на международном конгрессе ii Мюнхен, Германия, . ПУБЛИКАЦИИ. По теме диссертации опубликовано 8 научных работ. СТРУКТУРА И ОБЪЕМ ДИССЕРТАЦИИ. Диссертация изложена на 4 страницах машинописного текста, состоит из введения, главы обзора литературы, четырех глав собственных исследований в т. Работа иллюстрирована 9 таблицами и рисунками. Библишрафический указатель содержит 6 отечественных и 0 зарубежных источников.