Гемолитическая активность токсигенных и нетоксигенных штаммов холерных вибрионов различных серогрупп

• Автор: Меньшикова, Елена Аркадьевна
• Шифр специальности: 03.00.07
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2003
• Место защиты: Ростов-на-Дону
• Количество страниц: 133 с. : ил

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Г смол изины бактерий.

1.2. Роль ионов железа в продукции гемолизинов

1.3. Гемолитическая активность холерных вибрионов.

1 .4. Влияние условий культивирования на продукцию гемолизина

холерных вибрионов

1.5. Генетическое детерминирование синтеза гемолизина.

1.6. Гемолизин холерных вибрионов. Получение и свойства.

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

2.1. Бактериальные штаммы.
2.2. Питательные среды
2.3. Методы изучения гемолитической активности
2.4. Оценка биологической активности супернатантов
холерных вибрионов.
2.4.1. Использование монослойных перевиваемых клеточных культур
2.4.2. Использование модели кроликовсосунков.
2.4.3. Использование кожной пробы Крейга
2.5 Получение и характеристика гемолизина холерных вибрионов.
2.5.1. Получение гемолизина холерных вибрионов.
2.5.2. Электрофорез в полиакриламидном геле
2.5.3 Количественное определение белка.
2.6. Получение иммунных сывороток к препаратам
гемолизина холерных вибрионов.
2.7. Изучение препаратов гемолизина в иммуноблотинге
2.8. Диффузная иммуннопреципитация по Оисег1опу.
2.9. Статистическая обработка.
СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.
ГЛАВА 3. ХАРАКТЕРИСТИКА ГЕМОЛИТИЧЕСКОЙ
АКТИВНОСТИ ХОЛЕРНЫХ ВИБРИОНОВ РАЗЛИЧНЫХ
СЕРОГРУПП И ТОКСИГЕННОСТИ.
3.1. Изучение гемолитической активности токсигенных и нетоксигенных штаммов холерных вибрионов ейог и серогруппы
3.2. Изучение влияния условий культивирования на интенсивность гемолитической активности токсигенных и нетоксигенных штаммов холерных вибрионов ейог и серогруппы
ГЛАВА 4. ХАРАКТЕРИСТИКА БИОЛОГИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ ТОСИГЕННЫХ И НЕТОКСИГЕННЫХ ШТАММОВ ХОЛЕРНЫХ ВИБРИОНОВ, КУЛЬТИВИРУЕМЫХ НА РАЗЛИЧНЫХ ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕДАХ
4.1. Тестирование супернатантов токсигенных и нетоксигенных штаммов холерных вибрионов, культивируемых на различных питательных средах, на модели перевиваемых клеточных культур.
4.2. Влияние среды культивирования на экспрессию биологически активных факторов холерных вибрионов еИог и серогруппы на модели кишечника кроликовсосунков
ГЛАВА 5. ПОЛУЧЕНИЕ И СРАВНИТЕЛЬНАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ГЕМОЛИЗИНА ТОКСИГЕННЫХ И НЕТОКСИГЕННЫХ ШТАММОВ ХОЛЕРНЫХ ВИБРИОНОВ РАЗЛИЧНЫХ СЕРОГРУПП.
5.1. Получение и характеристика препаратов гемолизина холерных вибрионов эльтор и серогруппы, выращенных в условиях лефицита железа
5.2. Изучение спектра гемолитической активности препаратов гемолизина токсигенных и нетоксигенных штаммов холерных вибрионов различных серогрупп
5.3. Получение сывороток и изучение серологической специфичности препаратов гемолизина токсигенных и нетоксигенных штаммов холерных вибрионов.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫIII
ЛИТЕРАТУРА


Актуальность ее очевидна в связи с использованием теста на обнаружение гемолитической активности при эпидемиологическом надзоре за холерой в качестве наиболее простого и доступного способа ориентировочной оценки эпидемической значимости штаммов. Сравнительная характеристика гемолитической активности сх и йх штаммов холерных вибрионов еког и серогруппы в различных условиях культивирования и выявление особенностей се экспрессии. Изучение литической активности супернатантов бульонных культур токсигенных и нетоксигенных штаммов холерных вибрионов еког и серогруипы по отношению к эритроцитам различных видов животных. Изучение проявления гемолитических свойств холерных вибрионов в различных условиях культивирования, в том числе в условиях дефицита железа. Тестирование супернатантов токсигенных и нетоксигенных штаммов холерных вибрионов, полученных в различных условиях культивирования, на модели перевиваемых клеточных культур. Получение и сравнительная характеристика гемолизина токсигенных и нетоксигенных штаммов холерных вибрионов, выращенных в условиях дефицита железа. Научная новизна и теоретическая значимость. Показано, что экспрессия гемолитических свойств сх штаммов холерных вибрионов серогруппы менее выражена и реже выявляется, чем у аналогичных штаммов вибрионов эльтор. Обнаружены сезонные колебания в проявлении гемолитической активности этих штаммов и более выраженное проявление ее в весенний и осенний периоды года. Установлено, что сх штаммы холерных вибрионов еког и серогруппы в триптоновой питательной среде без РеСЬ продуцируют гемолизин, обладающий одинаковым спектром литической активности по отношению к эритроцитам различных видов животных, биологическим и серологическим сходством с гемолизином с1к штаммов. В супернатантах сх4 штаммов холерных вибрионов, выращенных в триптоновой питательной среде без РеСЬ, способствующей активной продукции ими гемолизина, наряду с последним, обнаружено присутствие в незначительном количестве холерного токсина. Данные о повышении сх штаммами холерных вибрионов синтеза гемолизина и понижении концентрации холерного токсина в условиях дефицита железа РеСЬ являются основанием для обсуждения механизма координированной регуляции синтеза токигенными штаммами холерогена и гемолизина в зависимости от условий среды обитания. Научнопрактическая ценность работы. Впервые получены и охарактеризованы препараты гемолизинов, продуцируемых сх штаммами холерных вибрионов еНог и , серогруппы. Выявлено ингибирующее действие РеСЬ на экспрессию, в отличие от сх штаммов, гемолитической активности сх штаммов холерных вибрионов. Показано различие в концентрациях РеСЬ в питательной среде, ингибирующих экспрессию гемолитической активности токсигенных штаммов холерных вибрионов еког и серогруппы. Полученные результаты могут быть использованы в дальнейшем совершенствовании теста определения гемолитической активности для оценки эпидемической значимости штаммов с лимитированием питательной среды для пробы Грейга по содержанию , что будет способствовать ее стандартизации и повышению воспроизводимости результатов. Утверждены Ученым Советом РПЧИ протокол 6 от 5 июня г. Дифференциация токсигенных и негоксигенных штаммов холерных вибрионов серогруппы по чувствительности к нормальной человеческой сыворотке, где для оценки изменения состава популяции холерных вибрионов под влиянием нормальной человеческой сыворотки использовали определение гемолитической активности холерных вибрионов на плотных питательных средах. Результаты оценки спектра литической активности гемолизина холерных вибрионов отражены в методических рекомендациях i как модель i vi для изучения биологической активности токсических веществ различной природы, утвержденных Ученым Советом РПЧИ протокол 9 от октября г. Материалы исследований доложены на институтских научных конференциях и конкурсе научных работ молодых ученых РостовскогонаДону государственного научноисследовательского противочумного института в , , , годах. По материалам диссертации опубликовано работ, в том числе и в центральной печати. Положения, выносимые на защиту.