Анализ белкового состава, лектинов и фенолоксидаз в процессе морфообразования ксилотрофного базидиомицета Lentinus edodes (Berk.) Sing

• Автор: Ветчинкина, Елена Павловна
• Шифр специальности: 03.00.07, 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2008
• Место защиты: Саратов
• Количество страниц: 151 с. : ил.

1.2. Ьепйпш есосез шиитаке представитель ксилотрофных базидиомицетов

1.3. Физиологически активные вещества белковой природы в процессе жизнедеятельности растений и грибов

1.4. Лектины

1.4.1. История открытия и общие представления

1.4.2. Лектины высших грибов

1.5. Полифенолоксидазы общие представления, физикохимические свойства, функции

1.5.1. Лакказа

1.5.2. Мпзависимая пероксидаза

1.5.3. Тирозиназа

1.6. Взаимодействие лектинов с ферментами

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

2.1. Микроорганизмы и условия их культивирования
2.1.1. Объекты исследований
2.1.2. Глубинное культивирование
2.1.3. Поверхностное культивирование
2.1.4. Интенсивный способ культивирования
2.2. Определение ростового коэффициента
2.3. Условия выделения и очистки белков
2.3.1. Получение мицелиальных экстрактов
2.3.2. Гельпроникающая хроматография
2.3.3. Анионообмениая хроматография
2.4. Определение концентрации белка
2.5. Электрофорез в полиакриламидном геле
2.6. Визуализация белковых спектров
2.7. Определение молекулярной массы
2.8. Определение количественного содержания углеводов
2.9. Определение гемагглютинирующей активности
2 Удельная активность лектинов
2 Определение углеводной специфичности
2 Обнаружение оксидазной активности в процессе
роста мицелия
2 Спектрофотометрическое измерение активности феполоксидаз
2 Изучение влияния лектинов на активность ферментов
2 Статистическая обработка результатов
3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
3.1. Исследование морфологокультуразьных признаков
ряда штаммов Ь. есос1ез
3.2. Характеристика качественного и количественного состава внутриклеточных белков на разных стадиях развития
Ь. ес1оЛе.у Р9
3.3. Обнаружение и сравнительная характеристика внутриклеточных агглютининов лектинов на разных стадиях развития Ь. есо.1е
V9 при культивировании на агаризованных средах
3.4. Характеристика активности внутриклеточных агглютининов лектинов разных морфообразований Ь. ес1ос1ез Р9 при глубинном кзльтивировании
3.5. Выделение, очистка и характеристика внутриклеточных лектинов базидиомицета . ес1ос1ез Р9 на разных этапах его развития
3.5.1. Экстракция и очистка пектинов Ь. ес1ос1е8
3.5.2. Определение активности и углеводной специфичности пектинов
3.5.3. Определение молекулярной массы пектинов
3.6. Влияние внутриклеточных пектинов на процесс морфообразования I. ес1ос1ех9
3.7. Исследование внутриклеточных фенолоксидаз
на разных стадиях развития Ь. ес1ос1ез Р9
3.7.1. Оксидазная активность дикариотического мицелия
I. е1о1ез в процессе твердофазного культивирования
3.7.2. Влияние некоторых субстратов фснолоксидаз на образование коричневой мицелиальной пленки у
Ь. есос1ех
3.7.3. Зависимость оксидазной активности гриба от присутствия в среде культивирования природных субстратов
3.7.4. Фенолоксидазная активность экстрактов мицелия
на разных стадиях морфогенеза ,. ес1ос1ез
3.7.5. Выделение, очистка и изучение свойств лакказ глубинного непигментированного мицелия Ь. есЬсеа 9
3.8. Влияние лектинов сс1о1е Р9 на активность собственных лакказ
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Работа выполнена в лаборатории микробиологии ИБФРМ РАН по планам НИР в рамках бюджетных тем Съедобные культивируемые грибы физиология и биохимия, научный руководитель темы д. Никитина В. Е., гос. Никитина В. Е., гос. Данная работа получила финансовую поддержку гранта РФФИ 9а Лектины ксилотрофиых базидиомицетов разных систематических групп и гранта РФФИБРФФИ 2Бела Гликополимеры и углеводсвязывающие белки ксилотрофиых базидиомицетов функции и биологическая активность. Материалы диссертации использованы при выполнении дипломной работы биологического факультета СГАУ им. Н.И. Вавилова. Переход от вегетативных стадий развития базидиомицета Ь. ЛоЛея к генеративным сопровождается появлением характерного набора полипептидов. На стадии вегетативного мицелия е1ос1ех обнаружено три лектина два димера и тетрамер при переходе к генеративной фазе развития, высокую лектиновую активность проявляет комплекс белков, в состав которых входят полипептиды массой , и кДа плодонос тело содержит два лектина и кДа. Обнаруженные лектины относятся к галактозоспецифичным. Лектины коричневой мицелиальиой пленки ускоряют процесс перехода от вегетативной к генеративным стадиям развития гриба . Ксилотрофный базидиомицет . Мппероксидазу и тирозиназу. Состав комплекса меняется в процессе жизненного цикла базидиомицета и содержит от одной до четырех форм каждого фермента. Увеличение активности лакказ в результате воздействия субстратов фенолоксидаз на растущий мицелий . Лектины разных морфологических структур . Апробации работы. России с международным участием Современная микология в России на Международной научной конференции Современное состояние и перспективы развития микробиологии и биотехнологии Минск, Белоруссия, на 4ой Молодежной школеконференции с международным участием Актуальные аспекты современной микробиологии Москва, Россия, . Личный вклад соискателя Автором осуществлен аналитический обзор и обобщение экспериментальных и теоретических данных о белках, лектинах, фенолоксидазах различного происхождения в том числе, грибных, их строения, классификации, функционирования в контексте современных представлений. С использованием комплекса хроматографических, физикохимических методов исследования, соискателем выполнены решающие экспериментальные работы полученные результаты интерпретированы и объяснены в соотнесении с данными литературы по изучаемой проблеме. Публикации. По теме диссертации опубликовано работ, из них 7 статей в отечественных рецензируемых изданиях, рекомендованных ВАК РФ, 1 статья в зарубежном рецензируемом издании, 5 статей в сборниках и тезисов по материалам российских и международных конференций. Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания методов исследований, изложения и обсуждения результатов работы, заключения, выводов и списка цитируемой литературы, включающего 0 источников. Объем диссертации составляет 1 машинописную страницу. Работа содержит рисунка и 4 таблицы. Как гетеротрофы, они получают путем трансформации органических соединений субстрата, на котором обитают, все необходимые питательные вещества. Для ксилотрофных базидиомицетов характерным субстратом является древесина. Разрушение древесного субстрата обусловлено способностью образовывать разнообразные ферменты, с участием которых, эти организмы осуществляют биодеградацию таких сложных биополимеров как целлюлоза, лигиин, пектиновые вещества, гемицеллюлоза, белки i, i, Афанасьева и Кадыров, i V, . Биодеструкция древесины грибами это многоступенчатый полиэнзиматический процесс, в результате которого образуются низкомолекулярные олигомеры и мономеры, используемые грибами для восполнения энергетических потребностей, а также в многочисленных процессах метаболизма , , V . Благодаря уникальности своего метаболизма ксилотрофные базидиомицеты составляют важное звено биологического распада и ресинтеза органических веществ в природе, играют важную роль в лесных биоценозах, обеспечивая быстрое разложение мертвой древесины и регулируя естественным образом численность древесных растений в составе биоценозов v, v , Мюллер и Леффлер, .