Совершенствование иммунодиагностики кишечного иерсиниоза на основе моноклональных антител

• Автор: Уткин, Денис Валерьевич
• Шифр специальности: 03.00.07
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2004
• Место защиты: Саратов
• Количество страниц: 131 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ
ВВЕДЕНИЕ.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

ГЛАВА 1. СОВРЕМЕННОЕ СОСТОЯНИЕ ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКИ

КИШЕЧНОГО ИЕРСИНИОЗА.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

2.1. Штаммы микроорганизмов.

2.2. Антигены.

2.3. Реактивы и буферные растворы.

2.4. Культуральные и питательные среды

2.5. Условия гибридизации.
2.6. Биохимические методы.
2.7. Приготовление иероксидазных конъюгатов.
2.8. Методы иммуноанализа.
2.9. Оборудование и приборы.
2 Лабораторные животные.
2 Методы статистического анализа
ГЛАВА 3. ПОЛУЧЕНИЕ ГИБРИДОМПРОДУЦЕНТОВ МОНОКЛОНАЛЬНЫХ
АНТИТЕЛ
3.1. Изучение иммунореактивности белковополисахаридного комплекса
. ii.
3.2. Подбор оптимальной схемы иммунизации животных
3.3. Эффективность гибридизации, клонирования и реклонирования
3.4. Стабильность продуцирующих моноклональные антитела гибридом
i vi и i viv
ГЛАВА 4. ХАРАКТЕРИСТИКА КИШЕЧНОИЕРСИНИОЗНЫХ МОНОКЛОНАЛЬНЫХ АНТИТЕЛ.
4.1. Выделение и очистка
4.2. Специфическая активность.
4.3. Иммунохимические свойства
ГЛАВА 5. РАЗРАБОТКА ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫХ ИММУНОФЕРМЕНТНЫХ ТЕСТ СИСТЕМ ДЛЯ ОБНАРУЖЕНИЯ, ИДЕНТИФИКАЦИИ И СЕРОТИПИРОВАНИЯ У. ЕМШЮСОШСА.
5.1. Твердофазный иммуноферментный анализ.
5.2. Дотиммуноанализ.
5.3. Серотипированис свежсвыдсленных штаммов У. епегосоШса , , ,, ,, , сероваров в ТИФА и ДИА
ЗАКЛЮЧЕНИЕ.
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Создана клонотека стабильных гибридных клеточных линий, синтезирующих МКА к антигенам У. Три линии гибридом, продуцирующих МКА к У еШегосоИНса серовара Ш7. V еШегосоНИса серовара 1Вюл и одновременно к обоим указанным ссроварам 1 Сю. Специализированной коллекции культур клеток позвоночных Российской коллекции клеточных культур г. С.Петербург под номерами РКККП 0Д, РКККП 8Д, РКККП 9Д. Образцы МКА к видо и серовароспецифическим эпитопам возбудителя кишечного иерсиниоза успешно прошли лабораторные комиссионные испытания в соответствии с программой, утвержденной директором РосНИПЧИ Микроб 8 января г. Экспериментальные иммуноферментные тестсистемы для обнаружения, идентификации и серотипирования У епХегосоШса в ТИФА и ДИА, сконструированные на основе набора МКА, апробированы на коллекционных и свежевыделенных штаммах У. Подана заявка на изобретение Штамм гибридных культивируемых клеток животных . РККК П 9Д продуцент моноклональных антител, специфичных к белковополисахаридному антигену ii ii и сероваров в Федеральную службу по интеллектуальной собственности, патентам и товарным знакам. По материалам диссертации составлены методические рекомендации Идентификация возбудителя кишечного иерсиниоза и сероваров в иммуноферментном анализе с помощью моноклональных антител, одобренные Ученым советом РосНИПЧИ Микроб Протокол 7 от сентября г. Материалы диссертации используются при чтении лекций по иммунологии и лабораторной диагностике инфекционных заболеваний на курсах специализации врачей и биологов по особо опасным инфекциям и курсах усовершенствования врачей по бактериологии, иммунологии и эпидемиологии при РосНИПЧИ Микроб. Белковополисахаридный комплекс БПК У епегосоШса серовара, выделенный методом уксуснокислого гидролиза, содержит родо, видо и серовароспецифические антигенные детерминаты. Оптимизация схем иммунизации линейных мышей ВАТВс кишечноиерсиниозными антигенами и условий селективного отбора гибридных клеток повышает эффективность слияния лимфоцитов в 0 раз и число гибридом, продуцирующих моноклональные антитела разной специфичности, в среднем в раз. Использование спленоцитов линейных мышей, иммунизированных корпускулярным антигеном У. Шса серовара, при слиянии с сингенными мышиными миеломными клетками приводит к образованию гибридом, секретируюших моноклональные антитела не только к выше указанному, но и к ряду других серовариантов кишечноиерсиниозных бактерий. Серовароспецифические кишечноиерсиниозные моноклональные антитела направлены к антигенным детерминантам не только углеводной, но и белковой или гликопептидной природы. Видоспецифические эпитопы У. Шса локализованы на термостабильном полипептиде, молекулярная масса которого определяется ссроваром бактерий. Его синтез не зависит от температуры культивирования и плазмидного состава штаммов. Сконструированные на основе МКА экспериментальные г иммуноферментные тестсистемы позволяют проводить индикацию, идентификацию и серотипирование штаммов У. Ю4 2,3 5 м. ТИФА и 7,8 3 2,5 Ю5 м. ДИА в зависимости от сероваропринадлежности микробов. АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ. Российской научнопрактической конференции, посвященной 0летию Асграханской противочумной станции М3 РФ, Астрахань, г. Международной научнопрактической конференции, посвященной летию суверенитета Республики Казахстан и летию Талдыкорганской противочумной станции, Алматы, г. Юбилейной научнопрактической конференции, посвященной летию Дагестанской ПЧС, Махачкала, г. КГМУ и научной сессии отделения медикобиологических наук ЦентральноЧерноземного научного центра РАМН, Курск, г. РосНИПЧИ Микроб, Саратов, , , гг. ПУБЛИКАЦИИ. По теме диссертации опубликовано 7 работ. ОБЪЕМ И СТРУКТУРА РАБОТЫ. Диссертация состоит из введения, обзора литературы 1 главы, собственных исследований 4 глав, заключения, выводов и списка литеразуры, включающего 2 источника, в том числе 4 зарубежных. Материалы диссертации изложены на 1 странице машинописного текста и включают в себя таблиц, рисунков.