Сравнительная характеристика штаммов ВТМ (дальневосточные изоляты), идентифицированных на овощных культурах

• Автор: Гнутова, Ирина Валерьевна
• Шифр специальности: 03.00.06
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2000
• Место защиты: Владивосток
• Количество страниц: 126 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ
ВВЕДЕНИЕ 4

ГЛАВА I. ВИРУС ТАБАЧНОЙ МОЗАИКИ И ЕГО ШТАММЫ обзор литературы

1. Общая характеристика ВТМ.7

2. Распространение вирусов в растениях

3. Симптомы пораженных растений .

4. Круг растенийхозяев.

5. Цитопатология

6. Штамыовое разнообразие вируса табачной

мозаики.

6.1. Штаммы ВТМ, поражающие томаты.

6.2. Штаммы ВТМ, поражающие перцы
6.3. Штаммы ВТМ, поражающие Оаклажаны
6.4 Классификация штаммов ВТМ
ГЛАВА II. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
1. Вирусные изолятк, идентифицированные на овощных
культурах
2. Биологическое тестирование .
2.1. Механическая инокуляция
2.2. Определение физических свойств штаммов ВТМ . .
3. Получение очищенных вирусных препаратов
штаммов ВТМ.
4. Получение стаммоспецифических антисквороток . .
5. Иммунохимические методы детекции штаммов ВТМ
5.1. Реакция двойной иммунодиффузии.
5.2. Ракетный иммуноэлехтрофореэ.
5.3. Иымуноферментный анализ.
5.3.1. Непрямой вариант .
5.3.2. Сэндвич метод
6. Изучение вирусных включений методом световой
микроскопии.
7. Электронная микроскопия
7.1. Негативное контрастирование
7.2. Ультратонкие срезы
ГЛАВА III. РЕЗУЛЬТАТЫ
1. Биологическое тестирование вирусных изолятов ВТМ,
выявленных на овощных культурах .
1.1. Иэолят из перца.
1.2. Изолят из томата
1.3. Изолят из баклажана.
2. Физикохимическая и антигенная характеристики изучаемых штаммов ВТМ
2.3. Получение очищенных вирусных препаратов
штаммов ВТМ
2.2. Получение моноштаммовых антисывороток
2.3. Выявление антигенного родства между штаммами
ВТМ с помощью иммунохимических методов
2.3.1. Реакция двойной иммунодиффузии
2.3.2. Ракетный иммуноэлектрофорез
2.3.3. Иммуноферыентный анализ
3. Ультраструктурная характеристика взаимодействия
штатов ВТМ с клетками листьев табака
ГЛАВА IV. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
ВЫВОДЫ 2
ЛИТЕРАТУРА


Вирионы ВТМ представлены жесткими палочками диаметром км, состоящими из белковой оболочки капсида и заключенной в ней инфекционной РНК Мэтьюз, . Капсид вириона состоит из 2 идентичных белковых субъединиц, плотно упакованных в виде спирали, шаг которой равен 2,3 нм. Белковая субъединица представляет собой молекулу с молекулярной массой м. i . Одноцепочечная РНК ВТМ, имеющая м. Да, уложена в вирионе в спираль с шагом 2,3 нм и расположена в желобке, образованном белковыми субъединицами. Репродукция вируса происходит в клетке, после проникновения в которую вирионы подвергаются разборке депротеинизации. По мнению некоторых авторов i, , , депротеиниэация ВТМ состоит в гидролизе белка вирионов. Получены данные о так называемом контрансляционном механизме депротеинизации ВТМ i, . II современным представлениям Леднева, v, i, , , , монопартитный геном ВТМ несет информацию для синтеза четырех полипептидов 6, 0, и кДа. Матрицей для синтеза 6 и 0 кДа белков служит вирионная РНК. Установлено, что эти белки ответственны за репликацию зирусного генома и входят в РНКзависимый РНКполимеразныи комплекс РНКрепликазу. Имеются данные, что в состав РНКрепликаэы тобамоиирусов наряду с вирусными могут входить и клеточные компоненты , , . Образовавшаяся вирусспеиифическая РНКрепликаза осуществляет репликацию вирусной РНК. РНК Леднева, v, i, , , . После синтеза вирусных РНК и капсидного Оелка происходит процесс сборки вирионов, который подразделяют на две стадии инициации и элонгации , , . Первые зрелые частицы ВТМ появляются через 6 мин после начала сборки , . Следует отметить, что взаимодействие вирионной РНК с капсидным белком и молекул Оелка между собой, отличается высокой специфичностью Тальянский, , . Однако, возможность фенотипического смешивания штаммов ВТМ Тальянский, и образование псевдовирионов хлоропластных ДНКтранскриптов одетых оболочечным белком ВТМ, указывают на ее относительность , i, . ВТМ может образовывать паракристаллы или жидкие кристаллы, в которых соседние вирусные частицы очень хорошо пригнаны друг к другу. При высыхании паракристаллов расстояние между центрами частиц становится равным ,2 нм во влажном геле расстояние между частицами составляет ,5 нм, что приблизительно равно расстоянию между наружными концами субъединиц Лурия, Дарнелл, . При обработке вирионов ВТМ слабой щелочью происходит освобождение белкового компонента вируса в частично агрегированной форме, который носит название Абелка. Этот белок может вновь соединяться с РНК вируса, формируя палочки, обладающие инфекционностью , . РНК в результате могут возникать плоские диски . ВТМ представляет собой явление, подобное кристаллизации, и сборка вирусных белковых субъединиц в спиральные капсиды отражает свойства, присущие самим этим субъединицам Лурия, Дарнелл, . Капсиды ВТМ обладают относительно жесткой структурой. Это показывает, что связи между субъединицами в последовательно расположенных витках спирали довольно прочны. Коэффициент седиментации ВТМ равен 4 . ВТМ один из саос стабильных вирусов. Точка термической инактивации ТТИ от С до С и выше, предельное разведение инфекционного сока ПРС 6 Ю, период сохранения инфекционности ПСИ вируса в соке растений от нескольких месяцев до нескольких лет. Вирус может длительное время сохраняться в сухих растениях Молдован, . Считается, что вирус не распространяется насекомыми и пыльцой . Ъ. Однако некоторые авторы не разделяют этого мнения , Виллемсон, . В природе ВТМ в основном передается при контакте больного растения со здоровым, изредка семенами Щербинин, Щербинина, , вегетативным размножением, через почву Виллемсон, , прививками, а также в результате сельскохозяйственной деятельности человека. В последние годы появились данные, что ВТМ может переноситься на большие расстояния туманами и облаками .