Значение измерения авидности антител класса IgG к отдельным белкам вируса гепатита С для диагностики различных форм инфекций

• Автор: Мукомолова, Анна Львовна
• Шифр специальности: 03.00.06
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2004
• Место защиты: Санкт-Петербург
• Количество страниц: 149 с. : 40 ил.

1.1 Вирус гепатита С.

1.2 Диагностика вирусного гепатита С.

1.2.1 Определение антител классов и 1М к белкам вируса гепатита

С методами иммуноферментного анализа и иммуноблоттинга

1.2.2 Определение ядерного антигена вируса гепатита С в сыворотке крови.

1.2.3 Качественное и количественное определение РНК вируса

гепатита С

1.2.4 Определение генотипа вируса гепатита С.

1.3 Измерение авидности антител класса 1Ц широко распространенный

метод диагностики.

1.3.1 Принципы определения авидности антител класса .

1.3.2 Использование определения авидности антител для диагностики стадий инфекционного процесса при различных инфекционных и паразитарных заболеваниях и оценки эффективности вакцин
1.3.3 Авидность антител при гепатите С
1.4 Заключение
Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1 Разработка теста для измерения авидности антител класса к белкам вируса гепатита С.
2.2 Измерение авидности антител класса к ядерному белку
и неструктурному белку у больных острым и хроническим гепатитом С
2.3 Наблюдение за изменением показателя авидности антител
у детей первого года жизни, рожденных матерями с ВГСинфекцией
2.4 Статистическая обработка результатов
Глава 3. РАЗРАБОТКА ТЕСТА ДЛЯ ИЗМЕРЕИЯ АВИДНОСТИ АНТИТЕЛ КЛАССА ДО К ОТДЕЛЬНЫМ БЕЛКАМ ВИРУСА ГЕПАТИТА С.
3.1 Реагирование иммуносорбентов на основе синтетических пептидов С и с сыворотками, содержащими и не содержащими антиВГС по результатам их исследования в коммерческих тестсистемах
3.2 Влияние концентрации мочевины в промывочном буферном растворе и фактора разведения образца на результаты
измерения авидности антител к белкам вируса ГС
3.3 Воспроизводимость теста определения авидности антител
3.4 Определение индекса авидности антител класса в сыворотках, содержащих и не содержащих антитела к вирусу ГС класса 1М
3.5 Сравнительный анализ определения авидности антител на приготовленных иммуносорбентах с использованием синтетических пептидов и на иммуиосорбенте коммерческой тестсистемы для определения суммарных антиВГС.
3.6 Заключение
Глава 4. ИЗМЕРЕНИЕ АВИДНОСТИ АНТИТЕЛ КЛАССА ДО К ЯДЕРНОМУ И НЕСТРУКТУРНОМУ БЕЛКАМ У ДЕТЕЙ БОЛЬНЫХ ОСТРЫМ И ХРОНИЧЕСКИМ ГЕПАТИТОМ С
4.1 Спектр антител к белкам вируса ГС и авидность антител к
ядерному и белкам у детей с острым гепатитом С
4.2 Измерение авидности антител у детей с острым ГС в
динамике инфекционного процесса.
4.3 Спектр антител к белкам вируса ГС и авидность антител к
ядерному и белкам у детей с хроническим гепатитом С
4.4 Измерение авидности антител у детей с хроническим ГС
в условиях динамического наблюдения
4.5 Спектр антител к белкам вируса ГС и авидность антител к ядерному белку у детей с антиВГС, но без выраженных признаков заболевания
4.6 Заключение
Глава 5. КОМПЛЕКСНОЕ ЛАБОРАТОРНОЕ ОБСЛЕДОВАНИЕ
ДЕТЕЙ ПЕРВОГО ГОДА ЖИЗНИ, РОЖДЕННЫХ МАТЕРЯМИ С ХРОНИЧЕСКИМ ГЕПАТИТОМ С.
5.1 Авидность антител к ядерному белку вируса ГС
и динамика специфических лабораторных показателей у детей с транзиторными материнскими антителами к вирусу ГС
5.2 Авидность антител к ядерному белку вируса ГС
и динамика специфических лабораторных показателей
у детей, предположительно инфицированных вирусом ГС
в первом полугодии жизни.
5.3 Заключение
Глава 6. ОБСУЖДЕНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ.
ВЫВОДЫ.
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
ПРИЛОЖЕНИЕ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Неструктурный белок 2 представляет собой протеазу, обеспечивающую аутокаталитическое расщепление полипептида . Неструктурный белок 3 ВГС выполняет ряд важных функций в жизненном цикле вируса. На конце белка расположен домен сериновой протеазы протяженностью 1 а. ВГС 3, 4. Кофактором этого фермента служит белок ЫБ4А. Область сериновой протеазы вместе с белком 2 образует домен зависимой металлопротеиназьт ,, и I металлосвязывающий сайт 3. Этот домен необходим для расщепления участка на молекуле полипротеинапредшественника. Сконцевая часть 3 является АТФгеликазой а. РНК в процессе репликации генома ВГС 4. Кроме того неструктурный белок 4 регулирует фосфорилирование белка 5, который обладает функцией репликазы. Белок 5 является вирусной РНКзависимой РНКполимеразой 8,, . Существенной особенностью характеристики ВГС является высокая степень изменчивости генома 1, х 3 замен на нуклеотидную позицию в год, что приводит к образованию квазивидов, субтипов и генотипов . В генотипах доля гомологичных нуклеотидов меньше , субтипах , квазивидах , 5, 7, 8. Наиболее консервативны ядерньш Спротеин, а в неструктурной области КБ 5протеин в зоне кодирования РНК зависимой РНКполимеразы. Согласно наиболее употребляемой классификации, все изоляты ВГС группируются в 6 главных генотипов 5, 7, 1, обозначаемых арабскими цифрами от 1 до 6. Внутри каждого генотипа выделяют субтипы, которые включают изоляты, состоящие из квазивидов. На принадлежность изолята к определенному субтипу указывают прописные латинские буквы, которые пишутся вслед за арабской цифрой ВГС 1а, ВГС1Ь, ВГС 1с, ВГС2а и т. В настоящее время известно более 0 субтипов ВГС и тысячи квази видов. Современное глобальное геофафическое распросфанение различных генотипов ВГС достаточно хорошо документировано. Некоторые генотипы встречаются по всему миру, тогда как другие циркулируют только в некоторых геофафических зонах. Генотипы 1, 2 и 3 получили наибольшее распросфанение, при этом тот или иной их субтип доминирует в определенных регионах , , , , , , 4, 9, 0, 6, 4. Генотипы 4, 5 и 6 имеют более локальное распросфанение. Генотип 4 основной тип ВГС в Ценфальной и Северной Африке, в Заире и на Среднем Востоке 4, 0. Генотип 5 выявлен исключительно в Южной Африке, и это единственный генотип, который включает лишь один субтип 5а 4. Генотип 6 широко представлен в странах ЮгоВосточной Азии 8, 3. Диагноз вирусного гепатита С требует обязательного подтверждения с помощью специфических лабораторных методов выявления серологических маркеров и генома ВГС в сыворотке крови. Для диагностики ВГСинфекции могут быть использованы серологические методы, в том числе иммунохимические, включающие определение специфических антител к антигенам ВГС, определение антигенов ВГС, молекулярногенетические методы, включающие качественное и количественное определение РНК ВГС в биологических жидкостях и тканях, а также определение нуклеотидных последовательностей генома ВГС секвенирование. Коммерческие ИФА тестсистемы используют для определения антиВГС в образцах плазмы или сыворотки крови. Диагностические тестсистемы 1го поколения на основе ИФА были предназначены для выявления антител к С белку и быстро получили повсеместное применение в клинической, эпидемиологической практике, а также при отборе доноров 3, 3. Однако они позволяли улавливать антитела к антигену, представляющего всего вирусного полипротеина, причем исключительно в неструктурной области , . За счет того, что искусственный рекомбинантный антиген С не полностью совпадал с натуральными вирусными белками, а антитела к согепротеину вообще не улавливались, тестсистемы 1го поколения оказались недостаточно чувствительными и специфичными. Было отмечено большое число ложноотрицательных результатов, особенно в фазу хронического ГС. У больных с выраженной гипергаммаглобулинемией, наоборот, тест для определения анти тел к С часто давал ложноположительные результаты , . Тестсистемы 2го поколения, появившиеся в г. ГС, причем не только неструктурной, но и структурной области , .