Разработка критериев вирусологической безопасности для клинического использования свиных гепатоцитов в аппарате "Вспомогательная печень"

• Автор: Питкина, Зорина Шмуровна
• Шифр специальности: 03.00.06
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2002
• Место защиты: Санкт-Петербург
• Количество страниц: 132 с. : ил

ОГЛАВЛЕНИЕ

Сокращения и обозначения

1. ВВЕДЕНИЕ.

1.1. Актуальность.

1.1.1. Оараи печеночная недостаточность, современные методы

лечения II

1.1.2. Характеристика системы Вспомогательная печень

1.1.3. Контроль качества при ксенотрансплантации с

использованием поросят в качестве доноров гспатоцитов

1.2. Цель исследования.

1.3. Задачи исследования.

1.4. Научная новизна и значение для практики.
1.5. Оценка риска и безопасности системы Вспомогательная
печень
2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
2.1. ричины возникновения и современные методы лечения
острой печеночной недостаточности у человека.
2.1.1. Этиология острой печеночной недостаточности.
2.1.1.1. Вирусные инфекции
2.1.1.2. рименение ацетамииофена
2.1.1.3. Применение рахшчиых лекарственных препаратов кроме
ацешминофена
2.1.2. Современное состояние проблемы лечения больных с острой
печеночной недостаточностью
2.2. Аппараты Вспомогательная печень.
2.2.1. Необходимость применения альтернативного лечения
2.2.2. Бноискусствснныс системы но поддержанию функции
печени и их сравнительный анализ
2.2.3. Использование свиных клеток и тканей для лечения острой
печеночной недостаточности
2.2.4. Применение свиных гспатоцигов в экстракорпоральных
системах с использованием мембран.
2.3. Риск вирусного инфицирования больных при
ксенотрансплантацй с использованием свиных гепатоцитов.
2.3.1. Этическая проблема ксенозоонозов
2.3.2. Характеристика и методы определения свиных вирусов,
представляющих опасность ятя кеснотрансплантации
2.3.2.1. Характеристика и методы диапюстики свиных экзогенных
вирусов.
2.3.2.2. Характеристика и инфекционные свойства свиных
эндогенных ретровирусов.
2.3.2.3. Методы диагностики свиных эндогенных ретровирусов
3. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
3.1. пределение вирусных агентов при кокультнвировании
свиных тканей и клеток
3.2. Среды и оборудование ятя контроля вирусов.
3.2.1. Изучение цитонатического действия вирусов.
3.2.2. Диагнос и ка гемадсорбнрующнх вирусов.
3.2.3. Реакция торможения емагглютинацни
3.2.4. Иммунофлуоресцагтный метод
3.2.5. Полимеразная цепная реакция.
3.2.6. Методы серологического обследования свиней
3.3. Изоляция и криоконсервация гспатоцигов
3.4. Дишностика свиных эндогенных ретровирусов.
3.4.1. Определение активности обратной транскрпптазы.
3.4.2. Применение полимеразной цепной реакции для диагностики
свиных эндогенных ретровирусов при кокультикировании свиных гепатоцитов с линией клеток человека 3
3.4.3. Определение потенциальной инфскционности свиных
эндогенных ретровирусов в биореакторе
3.4.4. Определение свиных эндогенных ретровирусов у леченых
пациентов
4. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ.
4.1. Программа гарантии и контроля качества терапии с
применением ксеногенных клеток.
4.1.1. Модель контроля качества
4.1.2. Оценка кон троля качества.
4.2. Программа контроля качества терапии с использованием
аппарата Вспомогательная печень
4.2.1. Оценка программы контроля качества аппарата
Вспомогательная печень.
4.2.2. Комплексная программа вирусологического контроля при
использовании аппарата Вспомогательная печень
4.2.2.1. Вирусологический контроль животных племенного стада
свиней.
4.2.2.2. Вирусологический контроль поросл допоров гепатопитов
4.2.2.3. Вирусологический контроль при исследовании
лимфатических узлов отдельных животных.
4.2.2.4. Вирусологический контроль гспатоцитов, используемых к
аппнарате Вспомогательная печень
4.3. Оценка снижения риска заражения свиными эндогенными ретровирусами в результате применения мембраны в
аппарате Вспомогательная печень
4.3.1. Определение свиных эндогенных ретровирусов в
криоконссрвированных гспатоцнтах по активности обратной транскрипты
4.3.2. Определение свиных эндогенных ретровирусов в
Крноконсервированных гспатоцнтах при кокультшшрованнн гспатоцитов п линии клеток человека 3
4.4. Контроль свиных эндогенных ретровирусов в биореакторе
аппарата Вспомогательная печень
4.5. Оценка вирусного контроля больных с острой печеночной недостаточностью при применении системы
Вспомогательная печень.
4.6. Обсуждение проблемы безопасности применения евиных
гспатоцитов.
4.7. Сертификация свиных гспатоцитов для обеспечения
инфекционной безопасности при их применении в аппарате Вспомогательная печень.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


В последнее десятилетне в связи с распространением гепатитов и наркомании отмечен рост смертности от острой и хронической печеночной недостаточности. Однако ни один из современных методов лечения не способствует восстановлению функциональной способности или регенерации печени. В связи с этим показатели смертности больных с ОПН в настоящее время остаются очень высокими . Особенно это относится к фульминантным гепатитам и ОПН у наркоманов. Недостаток донорского материала для проведения трансплнтации печени, наиболее эффективного в настоящее время метода лечения больных с ОПН. В связи с этим ксенотрансплангация как метод лечения, при котором для трансплантации используются живые клетки, ткани и органы, источником которых служат животные, имеет явное преимущество благодаря неограниченному количеству и доступности донорского материала. Ксенотрансплантаты могут применяться в экстракорпоральных перфузионных системах. Поэтому разрабатываемые искусственные органы биологического происхождения, в состав которых входят селективные мембраны и свиные гспатоциты i . X также следует отнести к ксенотрансплантации. Данный метод лечения больных с ОПН нриобретаег особую актуальность, так как мембраны осуществляют барьерную функцию и, следовательно, ксеногенные клетки не находятся в прямом контакте с плазмой крови реципиента. Однако, несмотря на сообщения о достоверной эффективности этих систем, при использовании которых происходит трансмембранный контакт крови больных со свиными клетками, на первый план выступает проблема обеспечения безопасности больных. Известно, что все свиные клетки содержат эндогенные геномы ретровирусов, способные экспрессировать ретровирусные частицы тина С в культуре клеток II. С. . С. . Теоретическая возможность инфицирования пациентов этими вирусами создает опасность развития у них онкологических заболеваний. Нерешенным остается вопрос о степени экспрессии СЭРВ i viv. Поэтому проблема применения искусственной печени и друптх ксеноорганов, тем более их трансплантации, непосредственно связана с проблемой обеспечения инфекционной безопасности. Два основных фактора определяют важность обеспечения безопасности при ксенотрансплантации для лечения больных с ОПН. Вопервых, у больных с ОПН изза нарушенной функциональной способности печени отсутствует сопротивляемость к любым инфекционным агагтам, которые могут быть занесены в организм при использовании биологической системы. Вовторых, отсутствует достаточно полный контроль вирусологической безопасности биологического продукта, производимого из тканей животных, и поэтому такой продукт может служить источником многих известных и неизвестных инфекционных болезней. Следовательно, разработка критериев оценки инфекционной безопасности предлагаемого биологического продукта для лечения больных с ОПН является крайне необходимой. Причинами ОНИ. Однако часто причину выяснить не удается. ОПН характеризуется развитием желтухи, коагулопатии и энцефалопатии, возникающими в результате внезапного нарушения функциональной способности печени фульминантная печеночная недостаточность ФПН. Впоследствии у больных возможно развитие отека мозга, поражения почек, асцита, желудочнокишечного кровотечения, мультиорганной недостаточности, приводящих к летальному исходу i . ОМИ с сопутствующей энцефатопатией приводит к высоким показателям смертност и, ко торые варьируют от до . ПНФ трансплантата печени при ортотопической трансплантации ОТТ. Однако, трансплантация печени является дорогостоящей процедурой и требует последующего пожизненного приема иммунодепрессантов с соответствующими матсриатьными затратами для больного и многочисленными факторами риска для его здоровья например, малнпшзацня или оппортунистическая инфекция. Наряду с трансплантацией методом лечения большинства больных с II являемся только поддерживающая консервативная терапия, направленная на сохранение жизни до подхода их очереди на проведение трансплантации печени. К сожалению, установлено, что ни один из современных методов лечения нс способствует восстановлению функциональной способности или регенерации печени. В связи с этим показатели смертности больных с ОПН остаются высокими.