Молекулярно-генетическая и биологическая характеристика вирусов москитных лихорадок и создание тест-систем для диагностики этих инфекций

• Автор: Клименко, Ирина Сергеевна
• Шифр специальности: 03.00.06
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2009
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 98 с. : 9 ил.

ВВЕДЕНИЕ.

Часть 1. Обзор литературы.

1.1. Классификация и таксономия вирусов группы москитных лихорадок

1.2. Морфология, молекулярная организация и репликация флебовирусов.

1.3.Молекулярные аспекты эволюции флебовирусов.

1.4. Биологические свойства флебовирусов.

1.4.1. Цитопатогенная активность.

1.4.2. Эксперименты на лабораторных животных.

1.5. Эпидемиология москитных лихорадок. Экология вирусоввозбудителейЗО

1.5.1. История.

1.5.2. Распространение, заболеваемость, сезонность.

1.5.3. Экология вирусов МЛ.
1.6. Клиника и патогенез МЛ
1.7. Лечение.
1.8. Профилактика
1.9. Специфическая диагностика москитных лихорадок.
1.9.1. Вирусологическая диагностика москитных лихорадок
1.9.2. Серологическая диагностика москитных лихорадок
1.9.3. Молекулярная диагностика
Заключение по литературному обзору
Часть II. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
Глава 1. Материалы и методы.
1.1. Вирусы
1.2. Сыворотки крови больных лихорадочными заболеваниями неясной этиологии и здоровых жителей Южного региона России.
1.3. Сахарозоацетоновые антигены
1.4. Клеточные культуры
1.5. Получение иммунных асцитных жидкостей мышей ИАЖ.
1.6. Выделение и конъюгирование .
1.7. Иммуноферментный анализ.
1.8. Реакция связывания комплемента
1.9. Непрямой метод флюоресцирующих антител
1 Метод бляшкообразования
1 Выделение РНК вирусов москитных лихорадок
1 Проведение ОТПЦР для выявления рнк вирусов москитных лихорадок
1 Секвенирование.
1 Построение филогенетических дендрограмм
ГЛАВА 2. Молекулярногенетическая характеристика афганских штаммов вирусов МЛ.
2.1. Культивирование и серологическая идентификация штаммов вирусов МЛ.
2.2. Выбор чувствительной клеточной культуры.
2.3. Создание лабораторного варианта ОТПЦР тестсистемы для детекции РНК малого сегмента 8 вирусов НМЛ, СМЛ и Тоскана.
2.4. Филогенетический анализ афганских штаммов вирусов МЛ
2.5. Определение первичной нуклеотидной последовательности фрагмента гена, кодирующего гликопротеин Оп штаммов Аф и Аф
2.6. Филогенетические взаимоотношения штаммов Аф и Аф и других представителей рода РЫсЫплгия.
2.7. Определение различий в аминокислотной последовательности фрагментов нуклеопротеина и гликопротеина вп у штаммов вирусов МЛ
ГЛАВА 3. Создание и характеристика ИФА тестсистем для выявления антигенов вирусов МЛ, СМЛ и Тоскана, М и Оантител к ним и серологическое обследование жителей южною региона России.
3.1. Получение и характеристика антигенов, глобулинов и конъюгатов вирусов НМЛ, СМЛ и Тоскана.
3.2. Определение специфичности и чувствительности метода ИФА для
выявления антигенов вирусов НМЛ, СМЛ и Тоскана.
3.3. Определение специфичности и чувствительности метода ИФА для выявления антител I и 1 к вирусам НМЛ, СМЛ и Тоскана
3.4. Серологическое обследование больных лихорадочными заболеваниями неясной этиологии и здоровых жителей южного региона России.
ГЛАВА 4. Изучение действия рибавирина, его производных и других экспериментальных химических соединений на цитопатоген ну ю активность
вирусов НМЛ, СМЛ и Тоскана.
Заключение.
Выводы.
Список литературы


Культивирование и серологическая идентификация штаммов вирусов МЛ. Выбор чувствительной клеточной культуры. Создание лабораторного варианта ОТПЦР тестсистемы для детекции РНК малого сегмента 8 вирусов НМЛ, СМЛ и Тоскана. Филогенетические взаимоотношения штаммов Аф и Аф и других представителей рода РЫсЫплгия. ГЛАВА 3. Создание и характеристика ИФА тестсистем для выявления антигенов вирусов МЛ, СМЛ и Тоскана, М и Оантител к ним и серологическое обследование жителей южною региона России. Получение и характеристика антигенов, глобулинов и конъюгатов вирусов НМЛ, СМЛ и Тоскана. НМЛ, СМЛ и Тоскана. Серологическое обследование больных лихорадочными заболеваниями неясной этиологии и здоровых жителей южного региона России. ГЛАВА 4. НМЛ, СМЛ и Тоскана. Заключение. Выводы. ОП0 оптическая плотность при длине волны 0 нанометров. Группа вирусов москитных лихорадок МЛ род РИ1еЬоУ1гия семейство ВипуауЬЧсае в настоящее время насчитывает вируса, из которых объединены в 9 антигенных комплексов Вгуаги, СапсИги, СИШЬге, 5, неаполитанской москитной лихорадки, РиМа Того, лихорадки долины Рифт, 5а1еИаЬас и сицилийской москитной лихорадки. Имеющиеся данные по антигенной классификации остальных флебовирусов недостаточно полно характеризуют их таксономическое положение в пределах группы. Сведения по генотипированию многих флебовирусов также весьма ограничены. Протогипные штаммы флебовирусов были выделены в разные годы в Бразилии, Панаме, Колумбии, США, Италии, Греции, Иране, Кении, Судане, и ЦентральноАфриканской республике. Информация об истории выделения пяти вирусов Агтего, Оигата, 1хасапа1, МагщиИа, ОВптягои, включая данные об источниках выделения, в доступной литературе отсутствует. Источниками выделения оригинальных штаммов других флсбовирусов были москиты, больные острыми лихорадочными заболеваниями, 1рызуны, другие млекопитающие и комары ,,,. Значение флебовирусов в патологии человека установлено для из представителей этой группы 8 из них распроегранены в Бразилии, 2 в Панаме, 3 в странах Средиземноморья, Средней Азии и, возможно, в Закавказье, на юге Европейской части России, на Украине и Молдавии 2,,,. В и гг. НИИ вирусологии им. Д.И. Ивановского РАМН из крови больных советских военнослужащих, дислоцированных в Афганистане, были выделены три штамма вируса неаполитанской москитной лихорадки НМЛ и два штамма вируса сицилийской москитной лихорадки СМЛ 3. Наибольшее медицинское значение имеют неаполитанская МЛ, сицилийская МЛ, лихорадка Тоскана, а также южноамериканские МЛ Аленквер, Кандиру, Пунта Торо, Чагрес и другие, встречающиеся в Бразилии и Панаме ,,,,. Ареал СМЛ и НМЛ охватывает регион Средиземноморья европейские и африканские страны, республики Средней Азии, Иран и Афганистан 4. Заболевания лихорадкой Тоскана регистрируются в Италии, Испании, Португалии, на юге Франции, Словении, Греции, на Кипре и в Турции ,,. В публикациях отечественных и зарубежных авторов при описании географического распространения вспышек и эпидемий МЛ на территории бывшего СССР упоминаются республики Закавказья, Средней Азии Туркмения, Таджикистан, юг Киргизии, Украина Крым и Молдавия 2,,. Между тем, проведенный нами анализ более ранней информации позволил восстановить и прояснить ситуацию с заболеваемостью москитными лихорадками в южном регионе Европейской части бывшего СССР в первой половине XX века. В г. МЛ наблюдалась в Севастополе и Бахчисарае, в и г. Армавире, в г. Феодосии. В г. Новороссийске. В г. Георгиевске и близлежащих населенных пунктах было зарегистрировано больных. В г. Новороссийска эпидемия МЛ охватила более человек. Помимо приведенной информации, имеются сведения об эпидемических вспышках лихорадки паппатачи в послевоенные годы в Дагестане и других административных территориях Северного Кавказа. В настоящее время какиелибо данные об этих инфекциях в южном регионе отсутствуют, что обьясняется, возможно, резким снижением активности природных очагов, а также недоступностью тестсистем для специфической диагностики МЛ в практических региональных лабораториях.