Ультраструктурный анализ инфицированных вирусами (ВТМ, ХВК, ВМС) растительных клеток и его использование при оценке поражаемости растений

• Автор: Полякова, Альбина Михайловна
• Шифр специальности: 03.00.06, 06.01.11
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2000
• Место защиты: Владивосток
• Количество страниц: 122 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

УСЛОВНЫЕ ОБОЗНАЧЕНИЯ

ВВЕДЕНИЕ.,

Глава I ХАРАКГЕРИСГИКА ВИРУСНОГО ПАТОГЕНЕЗА У РАСТЕНИЙ

РИ СИСТЕМНОМ ПОРАЖЕ ШИ обюр лигерапгуры.

1. Репродукция фитовирусов и распространение их по растению

2. Накопление вирусов .

3. Симптомы вирусных болезней

4. Физиологобиохимические изменения.

5. Цитопатология.

5.1. Вирусиндуцированные включения.

5.2. Изменения клеточных структур .
Глава II. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
1. Растения
2. Вирусы
3. Получение вирусных препаратов
4. Заражение, определение инфекциоиности.
5. Оценка содержания ингибиторов вирусов в соке
листьев растений
6. Определение удельной инфекциоиности ВТМ в препаратах из разновозрастных листьев
7. Определение активности гидролаз в листьях растений
7.1. Активность РНК азы
7.2. Активность протеаз
7.3. Активность кислой фосфатазы.
8. Электронная микроскопия.
8.1. Ультратонкие срезы.
8.2. Обработка срезов ферментами
8.3. Негативное контрастирование.
8.4. Определение диаметра частиц ВТМ в препаратах из системно инфицированных разновозрастных листьев табака
Глава III РАЗВИТИЕ ПАТОГЕНЕЗА В СИСТЕМНО ИНФИЦИРОВАННЫХ ВТМ ЛИСТЬЯХ ТАБАКА.
1. акопление ВТМ
2. Ультраструктура клеток инфицированных ВТМ разновозрастных листьев
2.1. Критический лист
2.2. Зрелый лист.
2.3. Верхушечный лист
3. Активность гидролаз в здоровых и инфицированных ВТМ
листьях разного возраста.
4. Исследование состояния частиц ВТМ в разновозрастных
листьях
4.1. Распределение частиц ВТМ по величине диаметра.
4.2. Удельная инфекционность ВТМ.
5. Ультраструктура паренхимных клеток инфицированных ВТМ листьев различающихся по поражаемости сортов табака
Глава IV РАЗВИТИЕ ПАТОГЕНЕЗА В ЛИСТЬЯХ ДУРМАНА,
СИСТЕМНО ИНФИЦИРОВАННЫХ ХВК.
1. Накопление ХВК и активность гидролаз в листьях разного возраста.
2. Ультраструктура клеток разновозрастных листьев,
зараженных ХВК
3. Размножение ХВК и формирование ХВКспецифических ламинарных структур
4. Ультраструктура клеток листьев дурмана, инфицированных
разнопатогенными штаммами ХВК.
Глава V. УЛЬТРАСТРУКТУРА КЛЕТОК ЛИСТЬЕВ РАСТЕНИЙ СОИ,
СИСТЕМНО ИНФИЦИРОВАН 1ЫХ ВМС.
ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
ЛИТЕРАТУРА


При этом мы полагали, что выявленные вирусиндуцированные реакции клеток можно будет использовать при оценке поражаемости и относительной устойчивости растений. Изучение клеточных реакций на вирусное заражение, как нам представляется, целесообразно проводить на клетках листьев растений, различающихся по способности накапливать вирус и степени поражаемости. Этим мы руководствовались при выборе объектов исследования системно инфицированные вирусами разновозрастные листья растений, различающиеся по вирулентности штаммы, разнопоражаемые сорта. Основная цель работы состояла в изучении защитных механизмов клеток листьев растенийхозяев, системно инфицированных вирусом табачной мозаики ВТМ, Хвирусом картофеля ХВК, вирусом мозаики сои ВМС. Работа выполнена в лаборатории общей вирусологии Биологопочвенного института ДВО РАН под руководством д. А.В. Реунова, которому автор выражает глубокую признательность. Автор также благодарит своих коллег с. Л.А. Лапшину, м. С.Н. Лега и м. В.П. Нагорскую, оказавших помощь в работе и участвовавших в обсуждении результатов. До настоящего времени практически ничего не известно о том, каким образом они проникают внутрь клеток. На основании данных, полущенных на изолированных протопластах, предполагают, что вирусные частицы могут проникать в клетки растений через микроповреждения плазмалеммы либо с помощью эндоцитоза см. Журавлев, . Репродукции вируса предшествует депротеинизация вирусной РНК, механизмы которой до конца не изучены. В инфицированных ВТМ протопластах томатов были обнаружены частицы вируса, диаметр которых был меньше диаметра нормальных вирионов. На этом основании высказывалось предположение, что депротеинизация вируса происходит в результате гидролиза белка оболочки i, ,. В соответствии с современными представлениями, механизм депротеинизации фитовирусов может состоять в так называемой котран сляционной разборке i, . Было показано i, , что, если частицы ВТМ инкубировать при 8, а затем перенести в бесклеточнуто трансляционную систему, то вирионы теряют субъединицы белка с 5конца и рибосомы связываются с обнаженным участком РНК, формируя трансляционно активные комплексы страйпосомы i. В процессе транслокации рибосом белковые субъединицы удаляются. Удалось показать, что котрансляционная разборка частиц ВТМ может происходить и в клетке . Сведения по экспрессии геномов различных фитовирусов приведены в ряде обзоров , v, i, i . Кратко остановимся лишь на данных, касающихся исследуемых нами тобамо, потеке и потивирусов. Известно Леднева, v, i, , что РНК ВТМ несет информацию для синтеза четырех белков 6, 0, и кДа. Первые два белка это так называемые ранние белки, которые включаются в РИКзависимый РНКполимеразный комплекс РНКрепликазу, участвующий в репликации вирусного генома. Полагают , , что РЖрепликаза присоединяется к Зконцу вирусной РЖ и, перемещаясь в направлении к 5концу, образует цепь затем на цепях с помощью репликазы синтезируются цепи РНК. В отличие от ранних белков, которые образуются в результате трансляции геномной РЖ, матрицами для синтеза кДа белка оболочки ВТМ и к Да белка, функция которого состоит в обеспечении транспорта вируса по растению v, v, , служат субгеномные РЖ Леднева, . Геном ХВК состоит из одной молекулы РЖ, которая кодирует 6 кДа репликазный белок, три транспортных белка , и 8 кДа и кДа белок оболочки i . Установлено Грама, Машковский, , что синтез белка оболочки осуществляется с помощью субгеномной мРЖ. Потивирусы используют для экспрессии геномов механизм, заключающийся не в продуцировании субгеномных РЖ, а в трансляции геномной РЖ в полипротеиновый предшественник, из которого затем посредством вирусспецифических протеаз образуются вирусные белки v, i, i . Процесс сборки вирионов наиболее изучен для ВТМ. В этом процессе различают две стадии инициации и элонгации , .